GB 31657.13-2026 食品安全国家标准 蜂产品中克百威及其代谢物 3—羟基克百威残留量的测定 液相色谱—串联质谱法

ICS 67.100 CCS X 16

中华 人民 共和 国国 家标 准

GB 31657.13—2026

食品安全国家标准蜂产品中克

百威及其代谢物3-羟基克百威

残留量的测定液相色谱-串联质谱法

National food safety standard—

Determination of carbofuran and its metabolite 3-hydroxycarbofuran residue in

bee products—Liquid chromatography-tandem mass spectrometry method

2026-04-24 发布

 

2026-10-01 实施

发布

中华 人民 共和 国农 业农 村部中华人民共和国国家卫生健康委员会国家 市场 监督 管理 总局

GB 31657 .13—2026

前言

本文件按照 GB/T

1 .1—2020« 标准化工作导则

第 1 部分 : 标准化文件的结构和起草规则»的规定

起草。

Ⅰ

GB 31657 .13—2026

食品安全国家标准

蜂产品中克百威及其代谢物 3 一羟基克百威残留量的测定

液相色谱串联质谱法

1 范围

本文件规定了蜂蜜、蜂王浆和蜂花粉中克百威及其代谢物 3__羟基克百威残留量检测的制样和液相色谱串联质谱测定方法。

本文件适用于蜂蜜、蜂王浆和蜂花粉中克百威及其代谢物 3__羟基克百威残留量的测定。

2 规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中 ,注日期的引用文件 ,仅该日期对应的版本 适用 于本 文件 ; 不注 日期 的引 用文 件 , 其最 新版 本(包括 所有 的修 改单)适用 于本文件。

GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

3 术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4 原理

试样中残留的药物用 1%乙酸乙腈溶液提取 ,分散固相萃取净化 ,采用液相色谱串联质谱测定 ,基质匹配标准溶液外标法定量。

5 试剂和材料

除另有规定外 ,所有试剂均为分析纯 ,水为符合 GB/T 6682 规定的一级水。

5 .1 试剂

5 .1 .1 乙腈(CH3 CN) :色谱纯。

5 .1 .2 乙酸(CH3 COOH) :色谱纯。

5 .1 .3 甲酸(HCOOH) :色谱纯。

5 .1 .4 乙酸铵(CH3 COONH4) :色谱纯。

5 .1 .5 氯化钠(NaCl)。

5 .1 .6 无水硫酸镁(MgSO4)。

5 .2 溶液配制

5 .2 .1 1%乙酸乙腈溶液 :取乙酸 10 mL,用乙腈稀释至 1 000 mL,混匀。

5 .2 .2 0.1%甲酸__5 mmol/L乙酸铵水溶液 :0.5 mL 甲酸和 0.193 g 乙酸铵以水溶解并稀释至 500 mL,混匀。

5 .2 .3 50%乙腈水溶液 :取等体积乙腈和水混溶。

5 .3 标准品

5 .3 .1 克百威(Carbofuran,C12 H15 NO3 ,分子量 :221 .26 ,CAS号 :1563__66__2) :纯度 ≥98 .0%。

5 .3 .2 3__羟基克百威(3__Hydroxycarbofuran,C12 H15 NO4 ,分子量 : 237 .25 ,CAS号 : 16655__82__6) : 纯度 ≥ 98 .0%。

1

GB 31657 .13—2026

5 .4 标准溶液制备

100 mL,配制成质量浓度为 100 μg/mL 的标准储备溶液 . 在 4 ℃下保存 ,有效期为 6 个月 .

5 .4 .1 标准储备液 :取克百 威和 3G 羟基 克百 威标 准品 各 10 mg, 精密 称定 , 用乙 腈溶 解并 稀释 定容 至

5 .4 .2 混合标准中间液 :精密量取克百威和 3G 羟基克百威标准储备液 0 .2 mL和 2 mL,用乙腈稀释定容

保存 ,有效期为 1 个月 .

至 10 mL,配制成克百威和 3G 羟基克百威浓度分别为 2 μg/mL和 20 μg/mL混合标准中间液 . 在 4 ℃下

5 .4 .3 混合标准工作液 :精密量取混合标准中间液 0 .2 mL,用乙腈稀释定容至 100 mL,配制成克百威浓

0 .1 mL、0 .25 mL、0 .5 mL、1 mL、2 .5 mL、5 mL, 用乙 腈稀 释定 容至 10 mL, 配制 成克 百威 浓度 为

度为 4 μg/L、3G 羟基克百 威浓 度为 40 μg/L 的混 合标 准工 作溶 液 . 再精 密量 取上 述混 合标 准工 作液

2 μg/L、4 μg/L、10 μg/L和 20 μg/L的系列混合标准工作溶液 . 上述混合标准工作液均在 4 ℃下保存 ,

0 .04 μg/L、0 .1 μg/L、0 .2 μg/L、0 .4 μg/L、1 μg/L和 2 μg/L, 3G 羟基克百威浓度为 0 .4 μg/L、1 μg/L、

有效期为 1 个月 .

5 .5 材料

5 .5 .1 乙二胺G NG丙基硅烷化硅胶(PSA) :粒径 40 μm~ 60 μm.

5 .5 .2 十八烷基硅烷键合硅胶(C18) :粒径 40 μm~ 60 μm.

5 .5 .3 微孔滤膜(有机相) :0 .22 μm.

6 仪器与设备

6 .1 液相色谱串联质谱联用仪 :配有电喷雾离子源(ESI) .

6 .2 分析天平 :感量 0 .000 01 g 和 0 .01 g.

6 .3 涡旋混合仪 .

6 .4 离心机 :5 000 r/min及以上 .

6 .5 组织捣碎机 .

7 试样的制备与保存

7 .1 试样的制备

7 .1 .1 蜂蜜

取适量新鲜或解冻的空白或供试蜂蜜 ,将其搅拌均匀 ;对有结晶的蜂蜜样品 ,在密闭情况下 ,置于不超过 60 ℃的水浴中解晶 ,待样品全部融化后搅匀 ,冷却至室温 . 制备好的试样置于样品瓶中 ,密封 ,并做上标记 .

7 .1 .2 蜂王浆

取适量新鲜或解冻的空白或供试蜂王浆 ,将其搅拌均匀 ;对于冷冻的供试样品 ,在常温下完全解冻后 ,搅拌均匀 . 制备好的试样置于样品瓶中 ,密封 ,并做上标记 .

7 .1 .3 蜂花粉

将供试样品粉碎后充分混匀 . 制备好的试样置于样品瓶中 ,密封 ,并做上标记 .

a) 取均质的供试样品 ,作为供试试样 ;

b) 取均质的空白样品 ,作为空白试样 ;

c) 取均质的空白样品 ,添加适宜浓度的标准工作液 ,作为空白添加试样 .

7 .2 试样的保存

蜂蜜 :常温保存 .

蜂花粉 :常温保存 .

蜂王浆 : - 18 ℃以下保存 .

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GB 31657 .13—2026

8 测定步骤

8 .1 前处理

称取试料(2±0 .05)g,于 50 mL具塞聚丙烯离心管中 ,加入 10 mL水、涡旋混匀后静置 10 min,加入5 mL 1%乙酸乙腈溶液 ,涡旋提取 3 min,加入 6 g无水硫酸镁和 1 .5 g氯化钠后立即剧烈振摇 1 min, 随后以 5 000 r/min离心 5 min;取上清液 1 .0 mL至装有 50 mg C18、50 mg PSA 和 150 mg无水硫酸镁的2 mL离心管中 ,涡旋混匀 30 s后以 5 000 r/min离心 5 min, 吸取上清液 0 .5 mL与 0 .5 mL水混匀 ,经0 .22 μm 滤膜过滤至进样小瓶 ,待液相色谱串联质谱联用仪测定。

8 .2 基质匹配标准工作溶液的制备

准确量取 0 .5 mL经提取和净化的空白试料上清液 ,氮气吹干 ,加入 0 .5 mL混合标准工作溶液复溶 ,

与 0 .5 mL水混匀 ,过微孔滤膜配制成克百威浓度为 0.02 μg/L、0.05 μg/L、0.1 μg/L、0.2 μg/L、0.5 μg/L、

1 μg/L和2 μg/L,3一羟基克百威浓度为 0 .2 μg/L、0 .5 μg/L、1 μg/L、2 μg/L、5 μg/L、10 μg/L和 20 μg/L

的系列基质混合标准工作溶液 ,供液相色谱串联质谱测定。 以标准工作溶液质量浓度为横坐标、定量离子

峰面积为纵坐标 ,绘制标准工作曲线。

8 .3 测定

8 .3 .1 液相色谱参考条件

a) 色谱柱 :C18 (50 mm×2 .1 mm ,1 .7 μm)或相当者 ;

b) 流动相 :A 为乙腈 ,B 为 0 .1%甲酸一5 mmol/L乙酸铵水溶液 ,梯度洗脱程序见表 1 ;

表 1 流动相梯度洗脱条件

时间min

A

%

B

%

0

20

80

2 .50

20

80

2 .60

30

70

6 .00

30

70

6 .10

90

10

8 .00

90

10

8 .10

20

80

9 00

20

80

c) 流速 :0 .2 mL/min;

d) 柱温 :40 ℃ ;

e) 进样量 :10 μL。

8 .3 .2 质谱参考条件

a) 离子源 : 电喷雾(ESI) ;

b) 扫描方式 :正离子模式 ;

c) 检测方式 :多反应监测(MRM) ;

d) 毛细管电压 :3 kV;

e) 离子源温度 :400 ℃ ;

f) 雾化气流速 :800 L/h;

g) 碰撞气 :二级碰撞气为氩气 ;

h) 碰撞气流速 :0 .15 mL/min;

i) 保留时间、定性离子对、定量离子对、锥孔电压和碰撞能量参考值见表 2。

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GB 31657 .13—2026

表 2 保留时间、定性离子对、定量子离子对、锥孔电压和碰撞能量

化合物

保留时间min

定性离子对m/z

定量离子对m/z

锥孔电压V

碰撞能量eV

克百威

5 .33

222 .0>123 .0

222 .0>165 .0

30

18

222 .0>165 .0

10

3一羟基克百威

1 .79

238 .1>163 .0

238 .1>181 .1

30

14

238 .1>181 .1

10

8 .3 .3 测定法

8 .3 .3 .1 定性测定

在相同测试条件下 ,试料溶液中克百威、3一羟基克百威与基质匹配标准溶液中克百威、3一羟基克百威的保留时间偏差在 ±0 .1 min以内 ;且检测到的相对离子丰度 ,应与浓度相当的基质匹配标准溶液相对离子丰度一致 ,其允许偏差为 ±40%。

8 .3 .3 .2 定量测定

溶液及试料溶液中克百威和 3一羟基克百威响应值均应在仪器检测的线性范围内。 对于试料中克百威或

取试料溶液和基质匹配标准溶液 ,作单点或多点校准 ,按外标法定量 , 以峰面积计算。 基质匹配标准

3一羟基克百威残留量超过仪器测定线性范围的 , 以 50%乙腈水溶液稀释试料溶液 ,使试料溶液稀释后克

百威或 3一羟基克百威的响应在仪器测定线性范围内 ; 同时调整基质匹配标准溶液中基质浓度与稀释后试

料溶液中基质浓度一致。 在上述液相色谱串联质谱条件下 ,克百威及其代谢物 3一羟基克百威基质(蜂蜜)

匹配标准溶液特征离子质量色谱图见附录 A。

8 .4 空白试验

取空白试料 ,采用完全相同的操作步骤进行平行操作。

9 结果计算和表述

试样中克百威和 3一羟基克百威残留量按标准曲线或公式(1)计算 ,总量按公式(2)计算。

ω = × f … … … … … … … … … … … … … … … (1)

式中 :

ω — 试样中克百威或 3一羟基克百威残留量的数值 ,单位为微克每千克(μg/kg) ;

ρS — 基质匹配标准溶液中克百威或 3一羟基克百威浓度的数值 ,单位微克每升(μg/L) ;

A — 试料溶液中克百威或 3一羟基克百威峰面积 ;

V — 提取液体积的数值 ,单位为毫升(mL) ;

AS — 基质匹配标准溶液中克百威或 3一羟基克百威峰面积 ;

m — 试料质量的数值 ,单位为克(g) ; f — 稀释因子 ,公式中为 2。

X总 =X克百 威 + 0 .93 × X3G羟基 克百 威 … … … … … … … … … … … … … (2)

式中 :

X总 — 试样中克百威总残留量的数值 ,单位为微克每千克(μg/kg) ;

X克百 威 — 试样中克百威残留量的数值 ,单位为微克每千克(μg/kg) ;

X3G羟基 克百 威 — 试样中 3一羟基克百威总残留量的数值 ,单位为微克每千克(μg/kg) ;

注 :计算结果不小于 1 μg/kg的保留 3 位有效数字 ,1 μg/kg以下保留至小数点后 2 位。

10 方法灵敏度、正确度和精密度

10 .1 灵敏度

本方法中克百 威和 3一羟基 克的 检出 限分 别为 0 .2 μg/kg和 2 μg/kg, 定量 限分 别为 0 .4 μg/kg和

4 μg/kg。

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GB 31657 .13—2026

10 .2 正确度

本方法克百威在 0 .4 μg/kg~ 2 μg/kg添加 浓度 水平 上的 回收 率为 60% ~ 120% ;3一羟基 克百 威在4 μg/kg~ 20 μg/kg添加浓度水平上的回收率为 60% ~ 120%。

10 .3 精密度

本方法批内相对标准偏差 ≤15% ,批间相对标准偏差 ≤20%。

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附录 A

(资料性)

克百威及其代谢物 3一羟基克百威基质(蜂蜜)匹配标准溶液特征离子质量色谱图

克百威及其代谢物 3一羟基克百威基质(蜂蜜)匹配标准溶液特征离子质量色谱图见图 A.1。

carbofuran F1 :MRM Of2 channels,ES+

5 . 31 222>165

1 709 1 .446e+004

t, min

carbofuran F1 :MRM Of2 channels,ES+

5 . 32 222. 00>123 . 00

1 454 1 . 192e+004

t, min 5 .20 5 .40 5 . 60 5 . 80 6 . 00 6 . 20 6 .40

sample Name: 20220616 - 19 20220616 - 19 smooth(Mn,3x4) fengmi-jizhibiao-0 . 1 - 1

% 100

3 -hydroxycarbofulran F2:MRM Of2 channels,ES+

1 . 88 238 . 1>181 . 1

2 520 1 . 703e+004

t, min

20220616 - 19 smooth(Mn,3x4) fengmi-jizhibiao-0 . 1 - 1

% 100

3 -hydroxycarbofulran F2:MRM Of2 channels,ES+

1 . 89 238 . 10>163 . 00

2 901 1 . 982e+004

t, min

1 .20 1 .40 1 . 60 1 . 80 2. 00 2 . 20 2.40 2. 60 2 . 80

图 A.1 克百威(0 .1 μg/L)及其代谢物 3 一羟基克百威(1 μg/L)基质(蜂蜜)匹配标准溶液特征离子质量色谱图