资源简介
ICS65. 020 CCS B 60
中华人民共和国林业行业标准
LY/T 3494—2026
食用林产品检测技术
Detection technology ofedible forestproducts
2026-06-03发布 2026-09-01实施
国家 林业 和草 原局 发布
LY/T3494—2026
目次
前言 Ⅲ
1 范围 1
2 规范性引用文件 1
3 术语和定义 1
4 原理 1
5 试剂 1
5. 1 试剂 1
5. 2 试剂配制 1
5. 3 标准品 2
5. 4 标准溶液配制 2
6 仪器设备 2
7 样品预处理 2
8 多糖提取 2
8. 1 脂肪含量较高样品 2
8. 2 其他样品 2
9 淀粉干扰判断 3
10 提取液酶解 3
11 测定 3
12 结果计算 3
13 精密度 4
14 检出限和定量限 4
15 范围 5
16 规范性引用文件 5
17 术语和定义 5
18 原理 5
19 试剂和材料 5
19. 1 试剂 5
19. 2 试剂配制 5
19. 3 标准物质 5
19. 4 标准溶液配制 6
20 仪器设备 6
21 样品预处理 6
21. 1 试样制备 6
Ⅰ
LY/T3494—2026
21. 2 试样提取 6
22 分析计算 6
22. 1 色谱条件 6
22. 2 标准曲线的绘制 6
22. 3 样品测定 6
22. 4 结果计算 7
23 精密度 7
24 检出限和定量限 7
附录 A(资料性) 羟基 α 山椒素典型高效液相色谱图 8
25 范围 9
26 规范性引用文件 9
27 术语和定义 9
28 原理 9
29 试剂和材料 9
29. 1 试剂 9
29. 2 试剂配制 9
29. 3 标准物质 10
29. 4 标准溶液配制 10
30 仪器设备 10
31 分析步骤 11
31. 1 试样制备 11
31. 2 样品提取 11
31. 3 测定 11
32 结果计算 12
33 重复性 12
34 检出限和定量限 12
35 范围 13
36 规范性引用文件 13
37 术语和定义 13
38 原理 13
39 试剂和材料 13
39. 1 试剂 13
39. 2 试剂配制 13
39. 3 标准品 14
39. 4 标准溶液配制 14
40 仪器设备 14
41 分析步骤 14
Ⅱ
LY/T3494—2026
41. 1 试样制备 14
41. 2 仪器参考条件 14
41. 3 定性确证 15
41. 4 定量测定 15
42 分析结果的表述 15
43 精密度 16
44 定量限 16
附录 A 单个脂肪酸甲酯标准品的分子式及 CAS号 17
附录 B(资料性附录) 38种脂肪酸甲酯标准溶液参考色谱图 19
附录 C 脂肪酸定量限 20
Ⅲ
LY/T3494—2026
前言
本文件按照 GB/T 1. 1—2020《标准化工作导则第 1部分 :标准化文件的结构和起草规则》和 GB/ T 20001. 4—2015《标准编写规则第 4部分 :试验方法标准》的规定起草。
LY/T XXX—XXX《食用林产品检测技术》为系列标准 ,包括以下部分 :
— 第 1部分 :《食用林产品中粗多糖测定分光光度法》
— 第 2部分 :《花椒中花椒酰胺含量的测定高效液相色谱法》
— 第 3部分 :《油茶籽中茶皂素含量的测定分光光度法》
— 第 4部分 :《木本油料中脂肪酸及其反式脂肪酸的测定气相色谱质谱法》
请注意本文件的某些内容可能涉及专利 ,本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由国家林业和草原局提出并归口。
本文件第 1部分起草单位 : 中国林业科学研究院亚热带林业研究所 ,浙江农林大学 , 四川省林业科学研究院。
本文件第 1部分主要起草人 :倪张林 ,莫润宏 ,黄伊嘉 ,刘文婷 ,王志坤 ,郑渝川 ,汤富彬。
本文件第 2部分起草单位 : 中国标准化研究院 , 中国林业科学研究院亚热带林业研究所 , 利和 味道(青岛)食品产业股份有限公司。
本文件第 2部分主要起草人 :席兴军 ,倪张林 ,孟玲玲 ,屈明华 ,张永昌 ,孙西丽。
本文件第 3部分起草单位 : 中国林业科学研究院亚热带林业研究所杭州市富阳区食品安全检验检测中心。
本文件第 3部分主要起草人 :方学智 ,杜孟浩 ,倪张林 ,罗凡 ,魏祯倩 ,胡立松 ,袁新跃。
本文件第 4部分起草单位 : 中国 林业 科学 研究 院亚 热带 林业 研究 所 , 广西 壮族 自治 区林 业科 学研究院。
本文件第 4部分主要起草人 :钟冬莲 ,沈丹玉 ,李正翔 ,倪张林 ,栾洁 ,刘文婷 ,汤富彬。
Ⅴ
LY/T3494—2026
食用林产品检测技术
第 1 部分食用林产品中粗多糖的测定
1 范围
本文件规定了食用林产品中粗多糖的分光光度法测定方法。
本文件适用于竹笋、食用菌、坚果、浆果、林源药材和木本油料等食用林产品中粗多糖测定。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中 , 注日 期的 引用 文件 ,仅该日期对应的版本适用于本文件 ;不注日期的引用文件 ,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4 原理
多糖在浓硫酸的作用下 ,先水解成单糖 ,并迅速脱水生成糖醛衍生物 ,与苯酚反应生成的橙黄色溶液在 490 nm 处有特征吸收 ,根据吸光度的大小来测定多糖的含量。
5 试剂
除非另有规定 ,仅使用分析纯试剂 ,试验用水应符合 GB/T 6682中规定的二级水。
5. 1 试剂
5. 1. 1 硫酸(H2SO4)。
5. 1. 2 苯酚(C6 H6 O)。
5. 1. 3 无水乙醇(C2 H6 O)
5. 1. 4 石油醚(CnH2n+2)(30~ 60℃)。
5. 1. 5 冰乙酸(CH3COOH)。
5. 1. 6 三水乙酸钠(CH3COONa · 3H2 O)。
5. 1. 7 碘化钾(KI)。
5. 1. 8 碘 (I2)。
5. 1. 9 高峰氏淀粉酶 :酶活力 ≥100U/mg。
5. 2 试剂配制
1
5. 2. 1 乙酸乙酸钠溶液(0. 2 mol/L,pH=4. 8) : 准确称取 27. 22 g 三水乙酸钠(5. 1. 6) ,加入 900 mL
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水溶解 ,用冰乙酸(5. 1. 5)调节 pH 至 4. 8,用水定容至 1 000 mL。
5. 2. 2 乙醇溶液(80+20) :取 800 mL无水乙醇(5. 1. 3) ,用水定容至 1 000 mL。
5. 2. 3 苯酚溶液(50g/L) :准确称取 5. 00 g苯酚(5. 1. 2)于 100 mL水中 ,溶解。现用现配。
5. 2. 4 碘试剂(碘化钾碘试剂) :称取 3. 6 g碘化钾(5. 1. 7)溶于 20 mL水中 ,加入 1. 3 g 碘 (5. 1. 8) ,溶解后加水定容 100 mL。
5. 2. 5 淀粉酶溶液(5g/L) :称取高峰氏淀粉酶(5. 1. 9)0. 5 g,加 100 mL水溶解。 临用现配。
5. 3 标准品
葡萄糖(C6 H12O6) :有证标准物质。
5. 4 标准溶液配制
葡萄糖标准储备溶液(100mg/L) :称取 0. 0100 g葡萄糖(5. 3)于 100mL容量瓶中 ,加水溶解 ,定容混匀。 临用现配。
分别吸取 0 mL、0. 2 mL、0. 4 mL、0. 6 mL、0. 8 mL、1. 0 mL 的标准葡萄糖标准储备溶液置于 10mL具塞试管中 ,用蒸馏水补至 1. 0 mL。 向试液中加入 1. 0 mL苯酚溶液(5. 2. 3) ,然后快速加入 5. 0 mL硫酸 (5. 1. 1) ,静置 10 min。充分混合后将试管放置于 30℃水浴中反应 20 min,490 nm 测吸光度。 以葡萄糖质量浓度为横坐标 , 吸光度值为纵坐标 ,制定标准曲线。
6 仪器设备
6. 1 可见分光光度计。
6. 2 高速离心机 ,10 000 r/min。
6. 3 电子天平 ,感量 0. 000 1 g。
6. 4 恒温水浴锅 :控温精度 ±0. 5℃。
6. 5 超声波清洗器 ,超声功率 >250W。
6. 6 索氏抽提仪。
7 样品预处理
对于脂肪含量较高的样品(如核桃、油茶籽等) ,称取 2 g~ 5 g(精确至 0. 001 g)样品于定量滤纸包裹 ,用索氏抽提法 ,加石油醚(5. 1. 4) 回流 4 h 除去脂肪。残留物待进一步提取。
8 多糖提取
8. 1 脂肪含量较高样品
将 7 中残 留物 全部 转入 50 mL 离心 管 , 加入 乙醇 溶液 (5. 2. 2) 25 mL, 超声 提取 15 min 后 , 8000 r/min离心 5 min,倾去上清液 ,重复操作 2 次。用 100 mL纯水将样品洗至 200 mL烧杯 ,记录总重。样品置于沸水浴提取 2 h,期间用玻璃棒搅拌。取出冷却至室温 ,称量 ,用纯水补足失重 ,过滤。
8. 2 其他样品
新鲜样品称取试样 2 g~ 5 g(精确至 0. 001g) ,干制样品称取试样 0. 2 g~0. 5 g(精确至 0. 0001 g) ,于 50 mL离心管 ,其余步骤按照 8. 1 自 “加入乙醇溶液(5. 2. 2) ”起依法操作。
2
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9 淀粉干扰判断
取滤液 4 mL于 10 mL试管中 ,加 0. 5 mL碘试剂(5. 2. 4) ,摇匀 ,观察是否有显色反应 ,若溶液呈蓝色 ,则证明存在淀粉干扰。若无淀粉干扰 ,可直接测定。
10 提取液酶解
若验证存在淀粉干扰 ,取滤液 15mL至 25mL 比色管中 ,加 1 mL 的淀粉酶溶液(5. 1. 3) ,加 0. 5 mL乙酸钠缓冲液(5. 2. 1) ,盖上塞子 , 于 60℃水浴保温 1 h,期间用碘试剂判断 淀粉 干扰 , 待淀 粉完 全酶 解后 ,再加热煮沸 5 min,用水定容至 25 mL。
11 测定
取滤液或酶解液 2 mL于 15 mL塑料离心管 ,加 8 mL无水乙醇(5. 3)充分摇匀 , 10 000 r/min离心3 min。弃去清液 ,再分别用 10 mL乙醇溶液(5. 2. 2)清洗 2 次 (与无水乙醇清洗方式一致) ,不溶物即为粗多糖。用水溶解并定容至 10 mL,此液体为待测液 , 吸取 1. 00 mL待测液于 10 mL具塞试管中 ,按标准曲线测定(5. 4)步骤操作。 以相应试剂为空白。在 490 nm 处测定试样吸光度 ,用标准曲线计算测定液中粗多糖的含量。
12 结果计算
样品中无淀粉干扰时多糖含量 X(g/100g)按式(1)计算 :
X … … … … … ( 1 )
式中 :
m1 — 从标准曲线上查得试样上机液中含糖量 ,单位为微克(μg) ;
m2 — 试样质量 ,单位为克(g) ;
V1 — 试样定容体积 ,单位为毫升(mL) ;
V2 — 分取试液体积 ,单位为毫升(mL) ;
V3 — 醇沉后粗多糖定容体积 ,单位为毫升(mL) ;
V4 — 比色时移取样液体积 ,单位为毫升(mL) ;
10-6— μg换算成 g 的换算系数 ;
100 —g/g换算成 g/100 g 的换算系数 ;
0. 9 — 葡萄糖换算成葡聚糖的校正系数。
样品中有淀粉干扰时多糖含量 X(g/100g)按式(2)计算 :
X … … … … … ( 2 )
式中 :
m1 — 从标准曲线上查得试样上机液中含糖量 ,单位为微克(μg) ;
m2 — 试样质量 ,单位为克(g) ;
V1 — 试样定容体积 ,单位为毫升(mL) ;
3
LY/T3494—2026
V2 — 分取样液用于酶解体积 ,单位为毫升(mL) ;
V3 — 酶解液定容体积 ,单位为毫升(mL) ;
V4 — 分取酶解后样液体积 ,单位为毫升(mL) ;
V5 — 醇沉后粗多糖定容体积 ,单位为毫升(mL) ;
V6 — 比色时移取样液体积 ,单位为毫升(mL) ;
10-6— μg换算成 g 的换算系数 ;
100 —g/g换算成 g/100 g 的换算系数 ;
0. 9 — 葡萄糖换算成葡聚糖的校正系数。
计算结果保留 3位有效数字。
13 精密度
在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10%。
14 检出限和定量限
当试样称样量为 2 g,本方法检出限为 0. 3 g/100 g,定量限为 1 g/100 g。
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食用林产品检测技术
第 2 部分花椒中花椒酰胺含量的测定
15 范围
本文件规定了花椒中花椒酰胺类物质总量的高效液相色谱测定方法。
本文件适用于花椒中花椒酰胺类物质总量的测定。
16 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中 , 注日 期的 引用 文件 ,仅该日期对应的版本适用于本文件 ;不注日期的引用文件 ,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法
17 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
18 原理
花椒中花椒酰胺类物质主要包括羟基 α 山椒素、羟基 β 山椒素、羟基 γ 山椒素和羟基 ε 山椒素。试样中的花椒酰胺类物质经甲醇提取后 ,通过 C18反相色谱柱进行分离 ,利用配备二极管阵列检测器 (DAD)的高效液相色谱仪在 270 nm 波长处进行检测。 以羟基 α 山椒素为标准品 ,采用峰面积外标法定量分析试样中上述四种花椒酰胺类物质的含量。
19 试剂和材料
除非另有规定 ,仅使用分析纯试剂 ,试验用水应符合 GB/T 6682中规定的一级水。
19. 1 试剂
19. 1. 1 乙腈(C2 H3N) :色谱纯。
19. 1. 2 甲醇(CH3 OH) :色谱纯。
19. 1. 3 冰乙酸(CH3COOH)。
19. 2 试剂配制
冰乙酸溶液(1+99) :取 10 mL冰乙酸(19. 1. 3) ,用水定容至 1 L。
19. 3 标准物质
羟基 α 山椒素(C16 H25NO2) ,CAS号 : 83883 10 7,纯度 ≥98%。
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19. 4 标准溶液配制
19. 4. 1 羟基 α 山椒 素储 备液 : 准确 称取 羟基 α 山椒 素 (19. 3) 10 mg(精确 至 0. 1 mg) , 用甲 醇(19. 1. 2)溶解 ,并定容至 10 mL,此储备液的浓度为 1 000 μg/mL。
19. 4. 2 羟基 α 山椒素标准曲线 :分别准确移取 0. 05 mL、0. 1 mL、0. 2 mL、0. 3 mL、0. 4 mL、1. 0 mL羟基 α 山椒素储备液(19. 4. 1)于 6个 10mL 的容量瓶中 ,用甲醇(19. 1. 2)稀释 ,定容至 10mL,得到浓度为 5 μg/mL、10 μg/mL、20 μg/mL、30 μg/mL、40 μg/mL、100 μg/mL 的工作溶液。
20 仪器设备
20. 1 高效液相色谱仪 ,配有 DAD检测器。
20. 2 分析天平 ,感量 0. 000 1 g。
20. 3 恒温水浴锅 :控温精度 ±0. 5℃。
20. 4 超声波清洗器 ,超声功率 240 500W。
20. 5 高速粉碎机 ,转速大于 3 000 rpm。
21 样品预处理
21. 1 试样制备
干花椒 :取去除杂质后的干花椒 100 g,用高速粉碎机粉碎后过 40 目筛 ,混匀备用 ;鲜花椒 :取去除杂质后的鲜花椒粒 200 g,经组织捣碎机捣碎后 ,混匀备用。
21. 2 试样提取
称取干样 1 g或鲜样 5 g(精确至 0. 001g)置于具塞烧瓶中 ,加甲醇(19. 1. 2)50mL,室温超声萃取两次 ,每次 15 min,冷却至室温 ,转移至 100 mL容量瓶 , 甲醇定容 ,移取上清液 10 mL 于 50 mL容量瓶定容 ,经 0. 22 μm 滤膜过滤 ,待测。
22 分析计算
22. 1 色谱条件
a) 色谱柱 : C18硅胶色谱柱 ,4. 6× 250 mm ,5. 0 μm ,或性能相当的色谱柱。
b) 流动相 : 乙腈 ∶ 1%冰醋酸水溶液(40 ∶ 60,V/V)。
c) 流速 :1. 0 mL/min。
d) 柱温 :40℃。
e) 进样量 :20 μL。
f) 检测波长 :270 nm。
22. 2 标准曲线的绘制
按测定条件(22. 1)对系列对照品工作溶液(19. 4. 2)进行测定 , 以色谱峰峰面积响应值为纵坐标 ,对应工作溶液的浓度为横坐标 ,绘制标准曲线。
22. 3 样品测定
按照测定条件(22. 1)对样品溶液进行测定 ,通过比较上机液中花椒酰胺的保留时间与标准色谱图进
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LY/T3494—2026
行定性分析。计算上机液中 4种花椒酰胺类物质特征峰的总面积 ,根据标准曲线查得相应的羟基 α 山椒素浓度 , 以此作为试样中花椒酰胺类物质的总量。样品溶液的响应值应处于仪器测定的线性范围内 ,若供试样品溶液超出线性范围 ,则需用甲醇稀释后重新测定。
22. 4 结果计算
样品中花椒酰胺总含量 ,按公式(1)计算。
X … … … … … … … … … … ( 1 )
式中 :
X— 试样中花椒酰胺总含量 ,单位为毫克每克(mg/g) ;
C— 试样溶液中花椒酰胺的峰面积对应的质量浓度 ,单位为微克每毫升(μg/mL) ;
V— 试样定容体积 ,单位为毫升(mL) ;
T— 试样稀释倍数 ;
m— 试样的称样量 ,单位为克(g) ;
计算结果保留 3位有效数字。
23 精密度
在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10%。
24 检出限和定量限
当试样称样量为 1 g,定容体积为 100 mL时 ,本方法检出限为 0. 01 mg/g,定量限为 0. 03 mg/g。
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附录 A
(资料性)
羟基 α 山椒素典型高效液相色谱图
图 1 羟基 α 山椒素典型高效液相色谱图
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食用林产品检测技术
第 3 部分油茶籽中茶皂素的测定
25 范围
本文件规定了油茶籽中茶皂素的可见分光光度计测定方法。
本文件适用于油茶籽中茶皂素含量的测定。
26 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中 , 注日 期的 引用 文件 ,仅该日期对应的版本适用于本文件 ;不注日期的引用文件 ,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
27 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
28 原理
采用香草醛浓硫酸分光光度法测定总皂苷含量。皂苷在强氧化性酸的作用下脱氢 ,再与香草醛加成显色 ,形成特征的紫红色化合物 ,在一定浓度范围内 , 吸光度与皂苷类化合物的含量成正比。
29 试剂和材料
29. 1 试剂
除非另有规定 ,仅使用分析纯试剂 ,试验用水应符合 GB/T 6682中规定的二级水。
29. 1. 1 无水乙醇(C2 H5 OH)。
29. 1. 2 甲醇(CH3 OH)
29. 1. 3 香草醛(C8 H8 O3)。
29. 1. 4 冰醋酸(CH3COOH)。
29. 1. 5 硫酸(H2SO4)。
29. 1. 6 石油醚(Cn H2n+2) :沸程为 30℃ ~ 60℃。
29. 1. 7 AB 8 大孔树脂 :纯度 ≥98%。
29. 1. 8 无水氧化铝。
29. 1. 9 丙酮(C3 H6 O) :色谱纯。
29. 1. 10 浓盐酸 (HCl) :质量分数为 36% ~ 38%。
29. 2 试剂配制
29. 2. 1 乙醇溶液(70% ,v/v) :量取 700 mL无水乙醇 ,用水溶解 ,定容至 1 000 mL。
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29. 2. 2 硫酸溶液(77% ,v/v) :量取 200 mL水 ,缓慢加入 770 mL浓硫酸 ,边加边搅拌 ,如果溶液温度过高 ,要等温度下降后分次加入 ,加完硫酸后 ,待温度降到室温 ,加水定容至 1 000 mL。
29. 2. 3 乙醇溶液(85% ,v/v) :量取 850 mL无水乙醇 ,用水溶解 ,定容至 1 000 mL。
29. 2. 4 香草醛乙醇溶液(8% ,w/v) :精确称取 8 g(精确至 0. 000 1 g)香草醛 ,用无水乙醇溶解 ,定容至100 mL。
29. 3 标准物质
29. 3. 1 标准物质制备
取 1 kg粉碎的油茶籽饼 ,加入 70%乙醇溶液(29. 2. 1)于 80℃浸提 2 h,过滤、浓缩后过 AB 8 大孔吸附树脂(29. 1. 7) ,85%乙醇(29. 2. 3)洗脱 ,浓缩、烘干 ,得淡黄色油茶皂素粗品 ;称取油茶皂素 15 g,加入 150 mL 甲醇(29. 1. 2) ,70℃水温浴 10 min,滤去不溶物。然后加入 300 mL丙酮(29. 1. 9)溶液 ,静置沉淀 1 h。过滤 ,在沉淀物再加入 150 mL 甲醇 ,滤去不溶物 ,再加入 300 mL丙酮(29. 1. 9)溶液 ,静置沉淀 1 h,反复操作三次后 ,将沉淀物真空干燥 , 即可得纯化的油茶皂素样品作为测定的标准样品。
29. 3. 2 标准物质定值
利用差重法测定茶皂素标准物质的纯度 :称取粉碎均匀的固体试样 3 g(精确至 0. 001g)置于三角烧瓶中 ,加 20 mL蒸馏水溶解后 ,加浓盐酸(29. 1. 10)25 mL,接冷凝回流装置 在 100℃下水 解 2 h。 冷却后 ,过滤沉淀并水洗至中性 ,将沉淀与滤纸在 60℃烘至恒重。将滤纸与沉淀物放入索氏提取器 , 70℃ ~ 80℃丙酮(29. 1. 9)提取 5 h~ 6 h,蒸馏除去丙酮 ,接收瓶与提取物放入烘箱中 ,105±2℃至恒重 ,称量。
油茶皂素含量按公式(2)进行计算 :
C … … … … … … … ( 2 )
式中 :
C — 皂素含量 ,单位为百分之( %) ;
W1 — 恒重后的接收瓶与提取物重量 ,单位为克(g) ;
W2 — 接收瓶重量 ,单位为克(g) ;
W3 — 样品重量 ,单位为克(g) ;
1223. 54— 油茶皂素理论平均分子量 ;
602 — 油茶皂素水解物理论平均分子量。
29. 4 标准溶液配制
称取油茶皂素标准物质 0. 25 g(精确至 0. 001 g) ,用 70%乙醇(6. 1)溶解 ,并定容到 50 mL容量瓶中 ,摇匀 , 即得油茶皂素标准溶液。
30 仪器设备
30. 1 可见分光光度计。
30. 2 分析天平 ,感量 0. 001 g。
30. 3 电热恒温水浴锅 :0℃ ~ 100℃。
30. 4 玻璃层析柱 :10 mm×4. 0 cm(内径 ×长度)。
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30. 5 鼓风干燥箱。
30. 6 超声波清洗器。
30. 7 索氏提取仪。
31 分析步骤
31. 1 试样制备
油茶籽在测定前先用石油醚脱脂。
31. 1. 1 固体试样
称取粉碎均匀的固体试样 5 g(精确至 0. 000 1 g) , 于 100 mL烧杯中 , 加入 30 mL 70%乙醇 溶液(29. 2. 1) ,超声提取 30min,过滤 ,滤液全部转移至 50mL容量瓶中 ,用 70%乙醇溶液(29. 2. 1)定容至刻度 ,备用。
31. 1. 2 液体试样
精确吸取 5. 0 mL液体试样于 50mL容量瓶中 ,用 70%乙醇溶液(29. 2. 1)定容 ,摇匀 ,备用。 当稀释后的试样基质较复杂时 ,需过滤至澄清液备用。
31. 2 样品提取
31. 2. 1 树脂的预处理
取适量树脂于烧杯中 ,使用无水乙醇(29. 1. 1)浸泡至覆盖树脂(29. 1. 7)2. 5 cm~ 5 cm ,缓慢搅拌树脂 1 min以充分混合 ,静置 2 h后倒出乙醇 ,并用蒸馏水冲洗至无醇味 ,重复 1 次 ,备用。
31. 2. 2 样品纯化
精确吸取 2. 0 mL制备的试样加入 5 g 活化后的树脂中 ,摇匀后静置 30 min。将加样后的树脂移入层析柱中 ,再加 2 g无水氧化铝(29. 1. 8) ,用 30 mL水洗柱 ,弃去洗脱液 ,再用 30 mL70%乙醇溶液(29.
2. 1)洗脱 ,收集洗脱液于蒸发皿中 ,于 60℃水浴挥干。
31. 3 测定
31. 3. 1 仪器条件
可见分光光度计的测定波长 :545 nm ,采用 1 cm 比色皿测定。
31. 3. 2 标准曲线的制作
准确量取油茶皂素标准溶液 0. 1、0. 3、0. 5、0. 7、0. 9 mL分别置于蒸发皿中 , 于 60℃水浴挥干 ,加入8%香草醛溶液(29. 2. 4)2 mL,转动蒸发皿 ,使残渣溶解后移入 10 mL具塞试管中 , 于冰水中加入 77%硫酸溶液(29. 2. 2)8 mL,摇匀 ,于 60℃水浴显色 30 min,然后置于冰水浴中冷却 10 min,取出试管置于室温下直至温度与室温持平 , 以试剂空白为参比 ,在 30 min 内在可见分光光度计上测得吸光度 ,并以吸光度对浓度值绘制标准曲线。
31. 3. 3 试样溶液的测定
准确加入 8%香草醛溶液(29. 2. 4)2 mL于样品的蒸发皿中 ,转动蒸发皿 ,使残渣溶解后移入 10 mL具塞试管中 ,于冰水中加入 77%硫酸溶液(29. 2. 2)8 mL,摇匀 , 于 60℃水浴显色 30 min,然后置于冰水浴中冷却 10 min,取出试管置于室温下直至温度与室温持平 , 以试剂空白为参比 ,在 30 min 内在可见分
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光光度计上测得吸光度。
32 结果计算
试样中油茶皂苷的含量用质量分数 X 表示 ,单位为百分率( %) ,按公式(3)计算 :
X … … … … … … … … ( 3 )
式中 :
M1— 由标准曲线计算得出的待测液中油茶皂苷的质量 ,单位为毫克(mg) ;
V1— 制备试样的体积 ,单位为毫升(mL) ;
M2— 样品的质量 ,单位为克(g) ;
V2— 纯化试样的体积 ,单位为毫升(mL)。
计算结果保留至小数点后两位。
33 重复性
在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10%。
34 检出限和定量限
当试样称样量为 5 g,油茶籽、饼粕及溶液中检出限分别为 150 mg/kg、150 mg/kg、100 mg/kg。
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食用林产品检测技术
第 4 部分木本油料中脂肪酸及其反式脂肪酸的测定
35 范围
本文件规定了采用气相色谱质谱法测定木本油料油脂中脂肪酸及反式脂肪酸组成及含量的方法。本文件适用于木本油料油脂中脂肪酸及其反式脂肪酸含量的测定。
36 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中 , 注日 期的 引用 文件 ,仅该日期对应的版本适用于本文件 ;不注日期的引用文件 ,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 5491 粮食、油料检验扦样、分样法
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
37 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
38 原理
木本油料油脂在碱性条件下与甲醇进行酯交换反应生成脂肪酸甲酯 ,并在强极性固定相毛细管色谱柱上分离 顺式 脂肪 酸甲 酯和 反式 脂肪 酸甲 酯 , 用气 相色 谱质 谱联 用仪 (GC MS)进行 测定 , 内标 法定量。
39 试剂和材料
除非另有说明 ,本方法所用试剂均为分析纯 ,水为 GB/T 6682规定的一级水。
39. 1 试剂
39. 1. 1 异辛烷(C8 H18) :色谱纯
39. 1. 2 甲醇(CH3 OH) :色谱纯
39. 1. 3 氢氧化钾(KOH)
39. 1. 4 硫酸氢钠(NaHSO4)
39. 2 试剂配制
氢氧化钾甲醇溶液(2 mol/L) :称取 13. 1 g 氢氧化钾(29. 1. 3)溶于 100 mL 甲醇中 ,可轻微加热溶解 ,冷却至室温后 ,过滤 , 即得澄清溶液。
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39. 3 标准品
39. 3. 1 37种混合脂肪酸甲酯标准品
39. 3. 2 十一碳酸甲酯标准品(C12 H24O2 ,CAS号 :1731 86 8)。
39. 3. 3 顺 5,11,14 二十碳三烯酸甲酯标准品(C21 H36O2 ,CAS号 :7019 85 4)
39. 4 标准溶液配制
39. 4. 1 37种混合脂肪酸甲酯标准工作溶液 :取出 1. 00 mL脂肪酸甲酯混合标液(39. 3. 1)至 10 mL容量瓶中 ,用异辛烷定容 ,贮存于 -18℃以下冰箱 ,有效期为 3个月。
39. 4. 2 十一碳酸甲酯内标溶液(1mg/mL) :准确称取 0. 025g(精确至 0. 1 mg)十一烷酸甲酯(39. 3. 2)至烧杯中 , 加入 异辛 烷溶 解 , 转入 25 mL 容量 瓶中 , 用异 辛烷 定容 至刻 度。 在 -18℃冰箱 中可 保存3个月。
39. 4. 3 顺 5,11,14 二十碳三烯酸甲酯标准工作液(1mg/mL) :准确称取 0. 010g(精确至 0. 1 mg)顺5,11,14 二十碳三烯酸甲酯(39. 3. 3)至烧杯中 ,加入异辛烷溶解 ,转入 10 mL容量瓶中 ,用异辛烷定容至刻度。在 -18℃冰箱中可保存 3个月。
39. 4. 4 38种脂肪酸甲酯混合标淮溶液(0. 5 mg/mL) :将 37种混合脂肪酸甲酯标准工作液(39. 4. 1)与顺 5,11,14 二十碳三烯酸甲酯标准工作液(39. 4. 3)按体积比 1 ∶ 1混合。
40 仪器设备
40. 1 气相色谱质谱联用仪 :气相色谱质谱 ,EI源。
40. 2 分析天平 :感量 0. 1 mg。
40. 3 旋涡振荡器。
40. 4 具塞试管 :10 mL和 50 mL。
40. 5 微孔滤膜 :孔径 0. 22 μm 有机滤膜。
41 分析步骤
41. 1 试样制备
称取 10 mg油脂 ,精确至 0. 1 mg,置于 50 mL具塞试管中 ,加入 1 mL十一碳酸甲酯(39. 4. 2)作为内标 ,用异辛烷溶解并定容至刻度 ,分取 4 mL样品溶液至 10mL 比色管中 ,加入 0. 2 mL氢氧化钾甲醇溶液(39. 2) ,涡旋混匀 1 min,静置至澄清。加入 1 g硫酸氢钠(39. 1. 4) , 涡旋混匀 1 min, 中和过量的氢氧化钾 ,静置澄清后 ,上清液经 0. 22 μm 有机滤膜过滤 ,滤液作为试样待测液。
41. 2 仪器参考条件
41. 2. 1 色谱条件
a) 毛细管色谱柱 : (88% 氰丙基)芳基聚硅氧烷强极性固定相 ,柱长 100 m , 内径 0. 25 mm ,膜厚
0. 2 μm。
b) 载气 :高纯氦气 99. 999%。
c) 载气流速 :1. 2 mL/min。
d) 进样口温度 :240℃。
e) 程序升温 :初始温度 140℃ ,保持 5 min, 以 1. 8℃/min的速率升至 250℃ ,保持 10 min。
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f) 进样量 :1 μL
g) 分流比 :20 ∶ 1
41. 2. 2 质谱条件
a) 检测方式 :选择离子监测方式(SIM) ,监测离子 :m/z= 55,67,74,79。
b) 电离方式 : 电子轰击电离源(EI源 , 电子能量 70 eV)
c) 离子源温度 :230℃ ,传输线温度 :250℃。
41. 3 定性确证
样品测定时 ,如果检出的色谱峰的保留时间与标准品相一致 ,并且在扣除背景后的样品质谱图中 ,所选择的离子均出现 ,而且所选择的离子丰度与标准品的离子丰度相一致(相对丰度 >50% ,允许 ±10%偏差 ;相对丰度介于 20% ~ 50% , 允许 ±15% ; 相对 丰度 介于 10% ~ 20% , 允许 ±20%偏差 ; 相对 丰度 ≤ 10% ,允许 ±50%偏差) ,则可判断样品中存在目标化合物。
41. 4 定量测定
将脂肪酸标准测定液和试样待测液分别注入气相色谱质谱仪中 ,根据标准溶液色谱峰响应面积 ,采用内标法定量测定。
42 分析结果的表述
试样中单个脂肪酸甲酯含量按式(1)计算 :
Xi … … … … … … … … ( 1 )
式中 :
Xi — 试样脂肪酸甲酯 i含量 ,单位为克每百克(g/100g) ;
Fi — 脂肪酸甲酯 i的响应因子 ;
Ai — 试样测定液中各脂肪酸甲酯 i的峰面积 ;
AC11 — 试样中加入的内标物十一碳酸甲酯峰面积 ;
ρC11 — 十一碳酸甲酯浓度 ,单位为毫克每毫升(mg/mL) ;
VC11 — 试样中加入十一碳酸甲酯的体积 ,单位为毫升(mL) ;
m — 试样的质量 ,单位为毫克(mg) ;
100 — 将含量转换为每 100 g试样中含量的系数。
脂肪酸甲酯 i的响应因子按式(2)计算 :
Fi … … … … … … … … ( 2 )
式中 :
Fi — 脂肪酸甲酯 i的响应因子 ;
ρsi — 混标中各脂肪酸甲酯 i的浓度 ,单位为毫克每毫升(mg/mL) ;
AC11 — 混标中十一碳酸甲酯的峰面积 ;
Asi — 脂肪酸甲酯 i的峰面积 ;
ρc11 — 混标中十一碳酸甲酯的浓度 ,单位为毫克每毫升(mg/mL)。
结果保留 3位有效数字。
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43 精密度
在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10%。
44 定量限
参见附录 C。
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附录 A
单个脂肪酸甲酯标准品的分子式及 CAS号单个脂肪酸甲酯标准品的分子式及 CAS号见表 A. 1。
表 A. 1 单个脂肪酸甲酯标准品的分子式及 CAS号
序号
脂肪酸甲酯
脂肪酸简称
分子式
CAS号
1
丁酸甲酯
C4 ∶ 0
C5 H10 O2
623 42 7
2
己酸甲酯
C6 ∶ 0
C7 H14O2
106 70 7
3
辛酸甲酯
C8 ∶ 0
C9 H18O2
111 11 5
4
癸酸甲酯
C10 ∶ 0
C11 H22 O2
110 42 9
5
十一碳酸甲酯
C11 ∶ 0
C12 H24O2
1731 86 8
6
十二碳酸甲酯
C12 ∶ 0
C13 H26O2
111 82 0
7
十三碳酸甲酯
C13 ∶ 0
C14 H28O2
1731 88 0
8
十四碳酸甲酯
C14 ∶ 0
C15 H30 O2
124 10 7
9
顺- 9-十四碳一烯酸甲酯
C14 ∶ 1
C15 H28O2
56219 06 8
10
十五碳酸甲酯
C15 ∶ 0
C16 H32 O2
7132 64 1
11
顺 10 十五碳一烯酸甲酯
C15 ∶ 1
C16 H30 O2
90176 52 6
12
十六碳酸甲酯
C16 ∶ 0
C17 H34O2
112 39 0
13
顺- 9-十六碳一烯酸甲酯
C16 ∶ 1
C17 H32 O2
1120 25 8
14
十七碳酸甲酯
C17 ∶ 0
C18 H36O2
1731 92 6
15
顺 10 十七碳一烯酸甲酯
C17 ∶ 1
C18 H34O2
75190 82 8
16
十八碳酸甲酯
C18 ∶ 0
C19 H38O2
112 61 8
17
反- 9-十八碳一烯酸甲酯
C18 ∶ 1n9t
C19 H36O2
1937 62 8
18
顺- 9-十八碳一烯酸甲酯
C18 ∶ 1n9c
C19 H36O2
112 62 9
19
反 ,反 9,12 十八碳二烯酸甲酯
C18 ∶ 2n6t
C19 H34O2
2566 97 4
20
顺 ,顺 9,12 十八碳二烯酸甲酯
C18 ∶ 2n6c
C19 H34O2
112 63 0
21
二十碳酸甲酯
C20 ∶ 0
C21 H42 O2
1120 28 1
22
顺 ,顺 ,顺 6,9,12 十八碳三烯酸甲酯
C18 ∶ 3n6
C19 H32 O2
16326 32 2
23
顺 11 二十碳一烯酸甲酯
C20 ∶ 1
C21 H40 O2
2390 09 2
24
顺 ,顺 ,顺 9,12,15 十八碳三烯酸甲酯
C18 ∶ 3n3
C19 H32 O2
301 00 8
25
二十一碳酸甲酯
C21 ∶ 0
C22 H44O2
6064 90 0
26
顺 ,顺 11,14 二十碳二烯酸
C20 ∶ 2
C21 H38O2
61012 46 2
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表 A. 1 单个脂肪酸甲酯标准品的分子式及 CAS号(续)
序号
脂肪酸甲酯
脂肪酸简称
分子式
CAS号
27
顺 ,顺 ,顺 8,11,14 二十碳三烯酸甲酯
8c,11c,14c C20 ∶ 3n6
C21 H36O2
21061 10 9
28
二十二碳酸甲酯
C22 ∶ 0
C23 H46O2
929 77 1
29
顺 11,14,17 二十碳三烯酸甲酯
C20 ∶ 3n3
C21 H36O2
55682 88 7
30
顺 13 二十二碳一烯酸甲酯
C22 ∶ 1n9
C23 H44O2
1120 34 9
31
顺 5,11,14-二十碳三烯酸甲酯
5c,11c,14c C20 ∶ 3n6
C21 H36O2
7019 85 4
32
二十三碳烯酸甲酯
C23 ∶ 0
C24 H48O2
2433 97 8
33
顺 5,8,11,14 二十碳四烯酸甲酯
C20 ∶ 4n6
C21 H36O2
2566 97 8
34
顺 13,16 二十二碳二碳烯酸甲酯
C22 ∶ 2
C23 H42 O2
61012 47 3
35
二十四碳酸甲酯
C24 ∶ 0
C25 H50 O2
2442 47 6
36
顺 5,8,11,14,17 二十碳五烯酸甲酯
C20 ∶ 5
C21 H32 O2
2734 47 6
37
顺 15 二十四碳一烯酸甲酯
C24 ∶ 1
C25 H48O2
2733 88 2
38
顺 4,7,10,13,16,19 二十二碳六烯酸甲酯
C22 ∶ 6n3
C23 H34O2
2566 90 7
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附录 B
(资料性附录)
38种脂肪酸甲酯标准溶液参考色谱图
38种脂肪酸甲酯标准溶液参考色谱图见图 B. 1
说明 : 图中38分别对应以下化合物:
1 . C4 : 0 ; 2 . C6 : 0; 3 . C8 : 0 ; 4 . C1O : 0 ; 5 . C11 : 0 ; 6 . C12 : 0 ; 7 . C13 : 0 ; 8 . C14 : 0 ; 9 . C14 : l ; 10 . C15 : 0 ; 11 . C15 : l ; 12 . C16 : 0 ; 13 . C16 : 1 ; 14 . C17 : 0 ; 15 . C17 : 1 ; 16 . C18 : 0 ; 17 . C18 : 1ngt ; 18 . C18 : 1ngc ;
19 . C18 : 2n6t ; 20 . C18 : 2n6C ; 21 . C20 : 0 ; 22 . C18 : 3n6 ; 23 . C20 : 1 ; 24 . C18 : 3n3 ; 25 . C21 : 0 ;
26 . C20 : 2 ; 27 . 8C , 1lc , 14C-C20 : 3n6 ; 28 . C22 : 0 ; 29 . C20 : 3n3 ; 30 . C22 : 1 ; 31 . 5C , 1lc, 14C-C20 : 3n6 ; 32 . C23 : 0 ; 33 . C20 : 4n6 ; 34 . C22 : 2 35 . C24 : 0 36 . C20 : 5 ; 37 . C24 : l ; 38 . C22 : 6
图 B. 1 38种脂肪酸甲酯标准溶液参考色谱图
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附录 C脂肪酸定量限
脂肪酸定量限见表 C. 1
表 C. 1 脂肪酸的定量限
序号
脂肪酸甲酯
定量限(g/100g)
1
丁酸甲酯
0. 000 1
2
己酸甲酯
0. 000 1
3
辛酸甲酯
0. 000 1
4
癸酸甲酯
0. 000 1
5
十一碳酸甲酯
0. 000 2
6
十二碳酸甲酯
0. 000 1
7
十三碳酸甲酯
0. 000 2
8
十四碳酸甲酯
0. 000 1
9
顺- 9-十四碳一烯酸甲酯
0. 000 3
10
十五碳酸甲酯
0. 000 2
11
顺 10 十五碳一烯酸甲酯
0. 000 3
12
十六碳酸甲酯
0. 000 1
13
顺- 9-十六碳一烯酸甲酯
0. 000 3
14
十七碳酸甲酯
0. 000 2
15
顺 10 十七碳一烯酸甲酯
0. 000 3
16
十八碳酸甲酯
0. 000 1
17
反- 9-十八碳一烯酸甲酯
0. 000 3
18
顺- 9-十八碳一烯酸甲酯
0. 000 2
19
反 ,反 9,12 十八碳二烯酸甲酯
0. 000 2
20
顺 ,顺 9,12 十八碳二烯酸甲酯
0. 000 2
21
二十碳酸甲酯
0. 000 1
22
顺 ,顺 ,顺 6,9,12 十八碳三烯酸甲酯
0. 000 2
23
顺 11 二十碳一烯酸甲酯
0. 000 2
24
顺 ,顺 ,顺 9,12,15 十八碳三烯酸甲酯
0. 000 3
25
二十一碳酸甲酯
0. 000 2
26
顺 ,顺 11,14 二十碳二烯酸
0. 000 2
27
顺 ,顺 ,顺 8,11,14 二十碳三烯酸甲酯
0. 000 2
20
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表 C. 1 脂肪酸的定量限(续)
序号
脂肪酸甲酯
定量限(g/100g)
28
二十二碳酸甲酯
0. 000 1
29
顺 11,14,17 二十碳三烯酸甲酯
0. 000 2
30
顺 13 二十二碳一烯酸甲酯
0. 000 2
31
顺 5,11,14-二十碳三烯酸甲酯
0. 000 2
32
二十三碳烯酸甲酯
0. 000 2
33
顺 5,8,11,14 二十碳四烯酸甲酯
0. 000 2
34
顺 13,16 二十二碳二碳烯酸甲酯
0. 000 2
35
二十四碳酸甲酯
0. 000 2
36
顺 5,8,11,14,17 二十碳五烯酸甲酯
0. 000 1
37
顺 15 二十四碳一烯酸甲酯
0. 000 3
38
顺 4,7,10,13,16,19 二十二碳六烯酸甲酯
0. 000 3
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