ICS 67.180.10 CCS B47
GH
中 华 人 民 共 和 国 供 销 合 作 行 业 标 准
GH/T 1531—2026
蜂蜜中二羟基丙酮含量的测定 高效液相色
谱法
Determination of Dihydroxyacetone in Honey—HPLC Method
2026 - 03 - 19 发布 2026 - 07 - 01 实施
中华全国供销合作总社 发 布
前 言
本文件按照GB/T 1.1-2020《标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由中华全国供销合作总社提出。
本文件由全国蜂产品标准化技术委员会(SAC/TC601)归 口。
本文件起草单位：秦皇岛海关技术中心、上海冠生园蜂制品有限公司、北京百花蜂业科技发展有限公司、南京天嘉检测服务有限公司、中国蜂产品协会、秦皇岛市抚宁区农业农村局、河北工程大学、中国农业科学院农产品加工研究所。
本文件主要起草人：崔宗岩、李建勋、戴丽丽、闵才良、乔江涛、黄学者、祖铁红、王锦媛、刘彩萍、陈梅、王燕、谭丽蕊、孙国峰、贾光群、刘晓茂。
蜂蜜中二羟基丙酮含量的测定 高效液相色谱法
1 范围
本文件规定了蜂蜜中二羟基丙酮含量测定的高效液相色谱法。
本文件适用于蜂蜜中二羟基丙酮含量的测定。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4 原理
蜂蜜样品溶于水后，其中的二羟基丙酮经 2,4-二硝基苯肼衍生，微孔滤膜过滤，高效液相色谱-紫外检测法测定，外标法定量。
5 试剂
除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T 6682规定的一级水。
5.1 试剂和标准品
5.1.1 乙腈(C2H3N)：色谱纯。
5.1.2 冰乙酸(C2H4O2)：色谱纯。
5.1.3 氢氧化钠(NaOH)。
5.1.4 磷酸(H₃PO₄) ：纯度≥85%。
5.1.5 2,4-二硝基苯肼(C6H6N4O4)：CAS 号：119-26-6。
5.1.6 二羟基丙酮(C3H6O3)：CAS 号：96-26-4 ，纯度≥98%。
5.2 溶液配制
5.2.1 氢氧化钠溶液(2 mol/L)：称取 8.0 g 氢氧化钠(5. 1.3)，置于 200 mL 烧杯中，加入适量水溶解，冷却后转移至 100 mL 容量瓶中，用水定容。
5.2.2 2,4-二硝基苯肼溶液(3 mg/mL)：称取 0.30 g 2,4-二硝基苯肼(5. 1.5)，转移至 100 mL 容量瓶
中，加入乙腈(5. 1. 1)溶解，加入磷酸(5. 1.4)1.5 mL ，用乙腈定容。
5.2.3 二羟基丙酮标准储备溶液(1.0 mg/mL)：称取 0.01 g 二羟基丙酮标准物质(5. 1.6，精确至 0. 1 mg)，转移至 10 mL 容量瓶中，加水溶解并定容，摇匀，置于冰箱 2℃~8℃保存，有效期 6 个月。
5.2.4 二羟基丙酮系列标准工作溶液：精密量取二羟基丙酮标准储备溶液(5.2.3)适量，用水稀释分别配制成浓度为 2 μg/mL 、5 μg/mL 、10 μg/mL、20 μg/mL 、50 μg/mL 、100 μg/mL、200 μg/mL 、500 μg/mL的标准工作溶液，用于绘制标准工作曲线(实际操作可根据样品含量适当调整标准工作溶液浓度，一般不少于 5 个浓度点)。标准工作溶液现用现配。
5.2.5 0. 1%乙酸溶液：量取 1 mL 冰乙酸(5. 1.2)至 1000 mL 容量瓶中，用水定容。
6 仪器和材料
6.1 高效液相色谱仪：配紫外检测器。
6.2 分析天平：感量 0.01 g 和 0.01 mg。
6.3 pH 计。
6.4 有机相过滤膜：0.22 µm。
6.5 容量瓶：10 mL ，100 mL ，1000 mL。
7 试样制备与保存
对无结晶的蜂蜜样品，将其搅拌均匀;对有结晶的样品，在密闭情况下，置于不超过 60 ℃的水浴中温热，振荡，待样品全部融化后搅匀，冷却至室温。分出 200 g 作为试样，置于样品瓶中，密封，并做上标记。试样于室温下保存。
8 测定步骤
8.1 样品前处理
称取 0.5 g 试样(精确至 0.01 g)置于 10 mL 试管中，加入 5 mL 水，涡旋使试样完全溶解，再加入
2.5 mL 2,4-二硝基苯肼溶液(5.2.2)，混匀后于室温下衍生 15 min ，用 2 mol/L 氢氧化钠溶液(5.2. 1)调节 pH 至 6.0±0.5 ，转移至 10 mL 容量瓶中并用乙腈定容，混匀。用 0.22 μm 滤膜过滤，供高效液相色谱仪测定。
8.2 测定
8.2.1 液相色谱参考条件
a) 色谱柱：C18 色谱柱( 150 mm ×4.6 mm ，3 μm)，或性能相当者;
b) 流动相：A 为乙腈，B 为 0. 1%乙酸溶液，梯度洗脱条件见表 1;
c) 流速：0.8 mL/min;
d) 柱温：40 ℃ ;
e) 检测波长：371 nm;
f) 进样量：10 µL。
表 1 梯度洗脱条件
8.2.2 标准曲线制备与液相色谱测定
分别精密移取二羟基丙酮系列标准工作溶液(5.2.4)各 500 μL 至 10 mL 试管中，按照 8. 1 所述条件进行衍生化，按照 8.2 所述实验条件进行液相色谱检测。以二羟基丙酮衍生物峰面积为纵坐标，标准工作溶液浓度为横坐标绘制标准工作曲线。
样品溶液中二羟基丙酮衍生物的响应值应在标准工作曲线的线性范围内，样品溶液与衍生后的标准工作溶液等体积进样进行测定。在上述色谱条件下，二羟基丙酮衍生物的参考保留时间为 7.0 min ，色谱图参见附录图 A. 1。
8.3 空白试验
除不称取样品外，均按上述步骤进行。
9 结果计算
按照色谱工作站自动计算或按式(1)计算：
式中：
X—样品中二羟基丙酮的含量，单位为毫克每千克(mg/kg);
C—从标准工作曲线上得到的二羟基丙酮溶液浓度，单位为微克每毫升 (μg/mL);
V—样品溶液等效体积，单位为毫升(mL);
m—所称试样的质量，单位为克(g)。
计算结果应扣除空白值; 目标物含量≥ 10.0 mg/kg 时，计算结果保留 3 位有效数字;含量<10.0
mg/kg 时，计算结果保留 2 位有效数字。
10 定量限
本文件中二羟基丙酮的定量限为 2.0 mg/kg。
11 精密度
两次平行测定的绝对差值不超过其算术平均值的 10%。
附 录 A
(资料性)
二羟基丙酮衍生物的液相色谱-紫外检测色谱图
二羟基丙酮衍生物的液相色谱-紫外检测色谱图见图A. 1。
图A. 1 二羟基丙酮衍生物的液相色谱-紫外检测色谱图(标准溶液浓度为200 μg/mL)
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