《快速核酸检测仪检测技术规程》主要内容总结

一、标准概述

《快速核酸检测仪检测技术规程》是由中国出入境检验检疫协会发布的团体标准，规定了快速核酸检测仪的技术要求和使用规范。该标准于2025年6月12日发布并实施，适用于基于等温及控温基因扩增技术的快速核酸检测仪的使用及性能测定。

二、术语定义

标准明确了以下关键术语：

1. ​​快速核酸检测仪​​：基于PCR或等温核酸扩增技术，整合从细胞裂解、核酸提取扩增到产物分析的全部步骤，检测时间一般少于1小时的一体化设备。
2. ​​聚合酶链反应(PCR)​​：通过温度变化循环程序进行靶核酸片段体外扩增，同时实时采集荧光信号进行分析的过程。
3. ​​等温核酸扩增​​：在恒温条件下使用链置换DNA聚合酶实现核酸扩增的方法，包括环介导等温扩增等多种技术。
4. ​​微流控芯片​​：以硅、玻璃、金属或高分子聚合物为基材，具有微管道、微阀等功能单元的生物芯片。

三、分类和方法原理

快速核酸检测仪可按以下方式分类：

1. 按核酸提取和扩增集成形式

• ​​提取扩增一体式​​：使用一步法免提取核酸释放剂，在同一体系中进行核酸提取和扩增
• ​​提取扩增分开式​​：先在核酸提取模块提取核酸，再通过重力或离心将核酸加入扩增体系

2. 按核酸扩增方式

• ​​变温型核酸扩增​​：利用PCR原理进行核酸扩增
• ​​等温型核酸扩增​​：通过等温扩增原理进行核酸扩增

四、仪器要求

1. 仪器组成

包括硬件结构、软件、配套试剂和耗材三部分。

2. 仪器性能

使用前需进行性能验证，验证结果应满足附录A的要求。性能指标包括：

• 温度偏差：±0.5℃
• 温度波动度(等温型)：±0.5℃
• 平均升温速率：变温型≥1.5℃/s
• 平均降温速率(基于实时荧光PCR技术)：≥1.5℃/s
• 平均温度过冲量：≤1℃
• 温度持续时间相对偏差：±10%

五、实验室要求

1. 需评估生物因子的危害程度，符合生物安全要求
2. 对于核酸提取和扩增一体化的设备，样本制备区、扩增和产物分析区可合并
3. 涉及多次开盖操作且样本量大时，仍需设置3个物理分隔区域
4. 实验室应具有良好的通风

六、样本处理

1. 样本类型选择

• 呼吸道病原体：上呼吸道标本(口咽拭子、鼻咽拭子等)或下呼吸道样本(痰、肺泡灌洗液等)
• 其他部位病原体：血液、脑脊液、宫颈标本等

2. 样本采集和预处理

• 应使用试剂厂家配套的采样容器和保存液
• 标本采集方法与常规核酸检测要求一致
• 需严格遵循产品说明书规定的运输温度、时间、接收标准和保存条件

七、分析步骤

1. 开机检查仪器状态
2. 根据检测项目设定程序
3. 样本前处理(部分机型可直接加样)
4. 上机检测
5. 结果判断

八、质量控制

1. 室内质量控制

• 每次开机先测试弱阳性和阴性质控品
• 开机检测达24h或连续检测50个样本后，需再次检测弱阳性质控品

2. 室间质量控制

• 应参加国家级或省级室间质量评价
• 无相关评价活动时可采用实验室比对方式

九、结果报告

1. 应结合原始扩增曲线、熔解曲线等后台数据进行综合判断
2. 检测限≤500拷贝/mL时：
   • 阴性结果可直接报告，注明"快速核酸检测"
   • 阳性结果需用1-2种更灵敏的常规核酸检测试剂复检
3. 报告应准确、及时、信息完整

十、生物安全要求

1. 应在符合国家和地方生物安全法规的前提下开展工作
2. 操作者需正确穿戴个人防护用品
3. 阳性样本废弃物需灭菌后按生物安全要求处理
4. 需降低气溶胶形成、溢出和暴露风险

十一、性能验证方法

标准附录A详细规定了物理性能和检测性能的验证方法：

1. 物理性能验证

包括温度偏差、温度波动度、平均升温/降温速率、平均温度过冲量、温度持续时间相对误差等指标的测量方法和计算公式。

验证设备需使用无线温度数据采集仪，测量范围0-120℃，分辨率0.01℃，最大允许误差±0.1℃。

2. 检测性能验证

包括：

• ​​阳性符合率​​：使用阳性质控品检测，判断是否为阳性
• ​​阴性符合率​​：使用阴性质控品检测，判断是否为阴性
• ​​检出限检查​​：将标准物质稀释到宣称检出限浓度进行检测
• ​​样本检测重复性​​：计算变异系数(CV)
• ​​特异性​​：验证与可能交叉反应的核酸物质的影响

标准还提供了变温型和等温型快速核酸检测仪的控温程序示例，以及测量点分布示意图。