NY/T 4512-2025 非洲菊疫病抗性鉴定技术规程 ,该文件为pdf格式 ,请用户放心下载!
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资源简介
以下是《NY/T 4512-2025 非洲菊疫病抗性鉴定技术规程》的详细内容总结:
一、标准核心内容
1. 适用范围
- 适用于非洲菊(Gerbera jamesonii Bolus)种质对隐地疫霉(Phytophthora cryptogea)引起疫病的抗性鉴定与评价。
2. 鉴定程序
包括5个阶段(见图1流程):
- 鉴定前准备
- 接种体制备
- 抗性测定
- 抗性评价
- 鉴定后材料处理
二、技术操作细则
1. 鉴定前准备
- 仪器设备:超净工作台、高压灭菌锅、恒温培养箱等。
- 培养基与试剂:
- 10% V8培养基:V8蔬菜汁100mL、CaCO₃ 0.2g、琼脂20g、去离子水900mL(121℃灭菌20min)。
- 10% V8培养液:V8蔬菜汁100mL、CaCO₃ 1g,离心后取上清稀释(1:9),灭菌备用。
- 土壤浸出液:园土500g + 水500mL,静置过滤后0.22μm膜除菌。
2. 接种体制备
- 病原分离与纯化:
- 病样采集:典型病株(茎基部水浸状褐变,见图A.1),4℃保存。
- 表面消毒:75%酒精浸2-3s + 2%次氯酸钠浸3min,灭菌水洗3次。
- 分离培养:病健交界组织接种10% V8平板,25-28℃培养5天。
- 纯化鉴定:单孢分离,形态学确认(菌丝无隔、孢子囊椭圆形,图A.2-A.3),科赫法则验证致病性。
- 接种体繁殖:
- 菌丝丛培养:活化菌株切块接种V8培养液,25-28℃黑暗培养3天。
- 孢子囊诱导:换灭菌水+土壤浸出液3-5滴,25-28℃黑暗培养3-5天(每12-24h换水)。
- 游动孢子悬浮液:4℃冷激15min→20-26℃放置30min释放孢子,调浓度至(1.0~1.5)×10⁵个/mL。
3. 抗性测定
- 温室条件:温度15-30℃、光照20-50klx。
- 材料要求:
- 对照品种:抗病对照(DI≤10)、感病对照(DI>50)。
- 待测材料:NY/T 1592优级苗,每份3重复×30株,随机排列。
- 定植操作:
- 基质:泥炭:园土=1:3(V/V),90-105℃蒸汽消毒30min。
- 栽植:10-15cm花盆,1株/盆,深度2-3cm,20-25℃/15-20℃(昼/夜)。
- 接种方法:
- 时期:定植后11-15天。
- 操作:根际灌注游动孢子悬浮液4mL/株,覆膜保湿48h。
- 病情调查:
- 时间:接种后15-20天(感病对照DI>50时有效)。
- 病情分级(表B.1):
级别 症状描述 0级 无症状 1级 ≤50%叶片萎蔫 2级 >50%叶片萎蔫但未全萎蔫 3级 全叶片萎蔫+部分干枯 4级 植株枯死 - 病情指数(DI)计算:
DI = \frac{\sum (s \times n)}{N \times S} \times 100
(s:病级值;n:该级株数;N:总株数;S:最高病级值4)
4. 抗性评价
- 有效性判定:感病对照DI>50且抗病对照DI≤10时有效。
- 评价标准(表1):
病情指数(DI) 抗性级别 0 高抗(HR) 0< DI ≤10 抗(R) 10< DI ≤25 中抗(MR) 25< DI ≤50 感(S) DI >80 高感(HS) - 记录要求:按附录C表格填写鉴定结果(含种质信息、病级株数、DI值等)。
5. 鉴定后处理
- 植物材料:集中焚烧。
- 基质:90-105℃蒸汽消毒30min。
- 病原物:121℃高压灭菌60min。
三、追溯与档案管理
- 记录内容:
- 病样采集信息(时间/地点/症状照片)。
- 培养基配制、病原分离、接种体繁殖过程。
- 定植、接种操作及环境参数。
- 病情调查原始数据与DI计算结果。
- 保存期限:≥24个月,建议信息化管理。
四、附录关键信息
- 附录A(资料性):
- 病害症状(图A.1):茎基部水浸状褐变,根部腐烂,白色霉层。
- 病原形态:孢子囊椭圆形(34-64×17-36μm),无乳突(图A.3)。
- 传播途径:土壤中卵孢子经雨水/灌溉水传播。
- 附录B(规范性):
- 病情分级图示(图B.1)及DI计算公式。
- 附录C(资料性):
- 抗性鉴定结果记录表示例。
五、参考文献
- 郑小波《疫霉菌及其研究技术》(1997)
- Dictionary of the Fungi(10th Ed., 2008)
总结:本标准系统规范了非洲菊疫病抗性鉴定的全流程操作,从病原分离、接种体制备到温室抗性测定和分级评价,强调标准化操作与可追溯性,为品种抗病性评价提供技术依据。
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