NY/T 4511-2025 香石竹枯萎病抗性鉴定技术规程 ,该文件为pdf格式 ,请用户放心下载!
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好的，这份《NY/T 4511-2025 香石竹枯萎病抗性鉴定技术规程》的主要内容可以详细总结如下：
1. 标准核心目标：
* 建立一套标准化的程序，用于鉴定和评价香石竹(Dianthus caryophyllus L.)种质对由尖孢镰刀菌石竹专化型(Fusarium oxysporum f.sp. dianthi)引起的枯萎病的抗性水平。
2. 适用范围：
* 适用于所有香石竹种质资源对该特定枯萎病的抗性鉴定与评价。
3. 核心鉴定程序（5个阶段）：
* 鉴定前准备：
* 设备： 超净工作台、高压灭菌锅、恒温培养箱、恒温摇床、生物显微镜、血球计数板等。
* 培养基制备：
* 马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)： 用于病原菌分离、纯化、活化及保存。配方：200g马铃薯，20g葡萄糖，20g琼脂，定容至1000mL，121℃灭菌20min。
* 牛肉酵母膏液体培养基(PDBY)： 用于病原菌接种体（分生孢子悬浮液）的繁殖。配方：200g马铃薯，20g葡萄糖，24g牛肉浸膏，5g酵母浸膏，定容至1000mL，121℃灭菌20min。
* 接种体制备：
* 病原物分离和纯化：
* 病样采集： 采集典型香石竹枯萎病症状（植株下部叶片变枯黄至稻草色、枝叶扭曲枯萎、维管束褐变）的病株样品，低温保存。
* 表面消毒： 病健交界处切小块，75%酒精浸2-3s，2%次氯酸钠浸泡3min，灭菌水清洗3次。
* 分离培养： 消毒后茎块接种PDA平板，25-28℃培养5天。
* 纯化鉴定： 观察菌落形态（白色菌丝，中央浅粉色）和分生孢子形态（小型孢子卵圆/长椭圆；大型孢子镰刀形；厚垣孢子球形）。采用单孢分离法纯化。通过形态学特征确认为尖孢镰刀菌石竹专化型，并用科赫法则验证致病性。纯化菌株在PDA斜面上培养7天后4±1℃保存。
* 接种体繁殖：
* 取保存菌株在PDA上活化7天。
* 切取菌丝块接种于PDBY培养液（100mL接种3块），25-28℃、120r/min摇床培养7天。
* 培养液过滤，滤液用灭菌水稀释，血球计数板计数，调整分生孢子悬浮液浓度至(1.0~1.5)×10⁶个/mL。
* 抗性测定：
* 温室条件： 温度15-30℃，光照20-50klx。
* 材料准备：
* 对照品种： 必需设置。抗病对照(DI ≤ 10)，感病对照(DI > 50)。病情指数(DI)计算公式：DI = [Σ(病情级别数值 × 该级植株数) / (调查总株数 × 最高病情级别数值)] × 100。
* 鉴定材料： 符合NY/T 1589优级苗标准。每份材料设3个重复，每重复不少于30株，随机排列。
* 定植：
* 基质： 泥炭:园土 = 1:3 (V/V)。
* 消毒： 蒸汽高温消毒 (90-105℃保持30min)。
* 方法： 株行距(12-15)cm×(15-20)cm，栽植深度2-3cm，定植后浇透水。温度：白天20-25℃，夜间15-20℃。
* 接种：
* 时期： 定植后第11-15天。
* 方法： 接种前1天浇透水。用移液器吸取制备好的孢子悬浮液，沿茎基部灌注根际土壤，每株5mL。接种后立即用塑料薄膜覆盖植株，保湿48小时。
* 接种后管理： 置于25-30℃，光照12-14小时，光照强度30-40klx的温室中，保持土壤最大持水量的60%-70%。
* 病情调查：
* 时间： 接种后60-65天。若感病对照DI>50，可适当调整时间。
* 病情级别划分： 分为6级 (0级到5级)，依据地上部症状严重度划分：
* 0级：无症状。
* 1级：基部叶片轻微发黄。
* 2级：基部叶片发黄、干枯。
* 3级：一侧枝条弯曲或枯死。
* 4级：所有枝条表现弯曲、枯萎症状。
* 5级：植株枯萎、死亡。
* 方法： 调查每份材料每个重复的所有植株，记录单株病情级别。
* 病情指数计算： 按上述DI公式计算每个重复的病情指数，最终取3个重复的平均值作为该鉴定材料的DI。
* 抗性评价：
* 鉴定有效性判别： 当抗病对照和感病对照的病情指数达到预期水平（抗病DI≤10, 感病DI>50），且与实际抗性相符时，该批次鉴定结果有效。
* 抗性评价标准： 根据鉴定材料的平均病情指数(DI)进行分级评价：
| 病情指数(DI) | 抗性评价(级别) |
| :----------- | :------------- |
| DI = 0 | 免疫(I) |
| 0 < DI ≤ 10 | 高抗(HR) |
| 10 < DI ≤ 25 | 抗病(R) |
| 25 < DI ≤ 50 | 中抗(MR) |
| 50 < DI ≤ 75 | 感病(S) |
| DI > 75 | 高感(HS) |
* 记录： 使用附录C提供的表格记录鉴定结果。
* 鉴定后材料处理：
* 所有植物材料：集中焚烧。
* 基质：蒸汽高温消毒处理(90-105℃保持30min)。
* 病原培养物、接种体：高压蒸汽灭菌(121℃保持60min)。
4. 追溯要求：
* 需详细记录病样采集、培养基制备、病原物分离纯化、接种体制备、植物定植、接种操作、病情调查、抗性评价等全过程的具体方法和数据。
* 保留照片、原始数据记录等证据。
* 所有记录保存时间不少于24个月。
* 鼓励采用信息化手段管理记录以便追溯。
5. 附录内容（重要补充信息）：
* 附录A (资料性): 详细描述了香石竹枯萎病的典型症状（附图）、病原菌的分类地位（真菌界...镰刀菌属）、形态特征（菌落形态、孢子类型及尺寸附图）以及传播途径（土壤/病残体存活，伤口侵入，水流/气流/繁殖材料传播）。
* 附录B (规范性): 提供了病情指数(DI)的计算公式、病情分级标准及对应的症状描述（文字描述及图示附表）、病情级别判定表（症状描述与级别对应表）。这是计算DI和划分病级的唯一依据。
* 附录C (资料性): 提供了标准的抗性鉴定结果记录表格式，用于系统记录种质信息、重复、各级病株数、计算的病情指数及最终抗性评价等级。
6. 规范性引用文件：
* NY/T 1589 香石竹切花种苗等级规格 (用于鉴定材料选择)
* LY/T 2066-2012 香石竹鲜切花设施栽培技术规程 (用于定植操作参考)
7. 参考文献：
* 引用了相关栽培技术规程、抗性评价研究论文及真菌分类学权威著作，为标准提供了科学依据。
核心要点提炼：
该标准通过严格规定从病样采集、病原纯化、孢子悬浮液制备、温室接种条件、定植管理、接种方法、保湿要求、病情分级标准、调查时间到最终抗性评价等级划分的每一步操作细节和参数，建立了一套标准化、可重复、可追溯的香石竹枯萎病抗性鉴定体系。其核心在于确保接种的有效性和一致性（标准化的接种体浓度、接种方法、环境控制），以及评价的客观性和准确性（明确的病情分级标准、DI计算公式、抗性等级阈值）。附录提供了关键的病害背景知识和技术细节支撑。追溯要求保证了鉴定过程的透明度和结果的可信度。
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