BJS 202502 食品中普萘洛尔等25种β-受体阻滞剂类化合物的测定

食品 补充 检验 方法

BJS202502

食品中普萘洛尔等 25种 β-受体阻滞

剂类化合物的测定

2025-09-29发布

国家市场监督管理总局发 布

食品中普萘洛尔等25种 β-受体阻滞

1 范围

本方法规定了食品中吲哚 洛尔、阿普 洛尔、普萘 洛尔、氧烯 洛尔、阿替 洛尔、美托 洛尔、索他 洛尔、左布诺洛尔、喷布洛尔、卡替洛尔、艾司洛尔、卡拉洛尔、倍他洛尔、美替洛尔、纳多洛尔、噻吗洛尔、比索洛尔、拉贝洛尔、醋丁洛尔、贝凡洛尔、阿罗洛尔、塞利洛尔、奈必洛尔、卡维地洛、兰地洛尔的高效液相色谱-串联质谱测定方法。

本方法适用于饮料(含固体饮料)、代用茶、保健食品(口服液、片剂、胶囊) 中吲哚洛尔、阿普洛尔、普萘洛尔、氧烯洛尔、阿替洛尔、美托洛尔、索他洛尔、左布诺洛尔、喷布洛尔、卡替洛尔、艾司洛尔、卡拉洛尔、倍他洛尔、美替洛尔、纳多洛尔、噻吗洛尔、比索洛尔、拉贝洛尔、醋丁洛尔、贝凡洛尔、阿罗洛尔、塞利洛尔、奈必洛尔、卡维地洛、兰地洛尔的测定。

2 原理

试样经乙腈或乙醇提取 ,过滤膜后 ,采用高效液相色谱-串联质谱检测 ,外标法定量。

3 试剂和材料

除非另有说明 ,本方法所用试剂均为色谱纯 ,水为 GB/T 6682规定的一级水。

3. 1 试剂

3. 1. 1 甲酸(CH2 O2)。

3. 1.2 乙腈(C2 H3N)。

3. 1.3 乙醇(C2 H6 O) :分析纯。

3.2 试剂配制

3.2. 1 0. 1%甲酸水溶液 :移取甲酸(3. 1. 1)1 mL,加水稀释至 1 000 mL,混匀备用。

3.3 标准品

吲哚洛尔、阿普洛尔、盐酸普萘洛尔、盐酸氧烯洛尔、阿替洛尔、酒石酸美托洛尔、盐酸索他洛尔、盐酸左布诺洛尔、喷布洛尔、盐酸卡替洛尔、盐酸艾司洛尔、卡拉洛尔、倍他洛尔、美替洛尔、纳多洛尔、噻吗洛尔、富马酸比索洛尔、盐酸拉贝洛尔、盐酸醋丁洛尔、盐酸贝凡洛尔、阿罗洛尔、盐酸塞利洛尔、盐酸奈必洛尔、卡维地洛、兰地洛尔标准品 ,纯度 ≥97% ,或经国家认证并授予标准物质证书的标准品。其中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量见附录 A。

3.4 标准溶液的配制

3.4. 1 标准储备液(100μg/mL)

分别准确称取按纯度和含盐量折算后的吲哚洛尔、阿普洛尔、普萘洛尔、氧烯洛尔、阿替洛尔、美托

1

洛尔、索他洛尔、左布诺洛尔、喷布洛尔、卡替洛尔、艾司洛尔、卡拉洛尔、倍他洛尔、美替洛尔、纳多洛尔、噻吗洛尔、比索洛尔、拉贝洛尔、醋丁洛尔、贝凡洛尔、阿罗洛尔、塞利洛尔、奈必洛尔、卡维地洛、兰地洛尔标准品(3. 3)各 10 mg(精确至 0. 00001g) ,分别用乙腈(3. 1. 2)溶解并稀释至 100mL,摇匀 ,制成浓度为 100 μg/mL 的标准储备液 ,混匀。将溶液转移至试剂瓶中 , -18 ℃以下保存 ,有效期 6个月。

3.4.2 混合标准中间液(1μg/mL)

分别准确吸取各标准储备液(3. 4. 1)0. 2 mL,置于同一 20mL容量瓶中 ,用乙腈(3. 1. 2)稀释至刻度 ,摇匀 ,制成浓度为 1 μg/mL 的混合标准中间液 ,混匀。将溶液转移至试剂瓶中 , -18 ℃以下保存 ,有效期 1个月。

3.4.3 标准系列工作液

分别准确吸取混合标准中间液(1μg/mL)(3. 4. 2)适量 ,用空白基质提取液(5. 2. 3)稀释成各化合物质量浓度依次为 1. 0 ng/mL、5. 0 ng/mL、10. 0 ng/mL、50. 0 ng/mL、100. 0 ng/mL 的标准系列工作液 ,临用新制。或根据需要采用乙腈(液体饮料、口服液)(3. 1. 2)配制适当浓度的溶剂标准工作液。标准曲线系列工作溶液浓度或依实际需要适当调整。

3.5 材料

3.5. 1 微孔滤膜 :0. 22 μm ,有机系。

4 仪器和设备

4. 1 高效液相色谱-串联质谱仪 :配有电喷雾离子源(ESI)。

4.2 分析天平 :感量分别为 0. 001 g 和 0. 000 01 g。

4.3 离心机 :最高转速不低于 8 000 r/min。

4.4 超声波清洗仪 :功率 250W。

4.5 涡旋混合器。

5 分析步骤

5. 1 试样制备和保存

5. 1. 1 液体饮料、口服液、软胶囊

液体饮料、口服液取 50 g试样或全部试样(试样少于 50 g 时) ;含二氧化碳的液体样品通过超声去除二氧化碳 ;软胶囊取 10 g试样或全部试样(试样低于 10 g 时 ,胶囊取整粒 ,含胶囊壳) ,囊壳剪碎。搅拌均匀后装入洁净容器中 ,密封 ,置 4 ℃保存 ,备用。

5. 1.2 代用茶、固体饮料、片剂、硬胶囊

代用茶、固体饮料取 50 g试样或全部试样(试样低于 50 g 时) ;保健食品片剂、硬胶囊取 10 g试样或全部试样(试样低于 10 g 时 ,胶囊取整粒 ,含胶囊壳) ,胶囊壳剪碎。磨制成颗粒状或粉状 ,装入洁净容器中 ,密封 ,置 4 ℃保存 ,备用。

5.2 样品前处理

5.2. 1 液体饮料、口服液、软胶囊

准确称取 1 g(精确至 0. 001 g)试样于 10 mL具塞刻度试管中 ,加入 8 mL 乙腈(3. 1. 2) ,密塞 ,超声

2

提取 10 min,用乙腈(3. 1. 2)稀释至刻度。过 0. 22 μm 微孔滤膜 ,取滤液 ,待测定。

5.2.2 代用茶、固体饮料、片剂、硬胶囊

准确称取 1 g(精确 至 0. 001 g)试样 于离 心管 中 , 加入 4 mL 乙醇 (3. 1. 3) , 涡旋 2 min, 超声 提取10 min,8 000 r/min离心 5 min,上清液转移至 10 mL容量瓶中 ,残渣 用 4 mL 乙醇(3. 1. 3)重复 提取一次 ,合并两次上清液于同一容量瓶中 ,用乙醇(3. 1. 3)定容。过 0. 22 μm 微孔滤膜 ,取滤液 ,待测定。

5.2.3 空白基质提取液

称取与试样基质基本相同 或相 近的 阴性 基质 样品 , 按照 5. 2 的操 作步 骤进 行空 白基 质提 取液 的制备。

阴性基质样品中各待测化合物含量应在方法检出限以下。

5.3 仪器参考条件

5.3. 1 色谱参考条件如下。

a) 色谱柱 :C18色谱柱(2. 1 mm×100 mm ,1. 8 μm) ,或性能相当者。

b) 流动相 :A 为 0. 1%甲酸水溶液(3. 2. 1) ,B为乙腈(3. 1. 2) ,参考梯度洗脱程序见表 1。

c) 流速 :300 μL/min。

d) 柱温 :40 ℃。

e) 进样量 :2 μL。

表 1 参考梯度洗脱程序

时间/min

流动相 A/%

流动相 B/%

0

95

5

16

40

60

17

20

5.3.2 质谱参考条件如下。

a) 离子源 : 电喷雾离子源(ESI源)。

b) 干燥气、雾化气、鞘气、碰撞气等均为高纯氮气或其他合适气体 ,使用前应调节相应参数使质谱灵敏度达到检测要求 ,毛细管电压、干燥气温度、鞘气温度、鞘气流量、喷嘴电压、碰撞能量、碎裂电压等参数应优化至最佳灵敏度 ,母离子及碎片离子等参考信息见附录 B。

5.4 试样溶液的测定

5.4. 1 定性测定

将标准系列工作溶液和试样溶液分别注入高效液相色谱-串联质谱仪中测定。在相同试验条件下 ,试样中待测组分的色谱峰保留时间与标准工作液中的对应组分保留时间偏差在 ±2. 5%以内 ,且试样中待测组分定性离子对的相对离子丰度与浓度相近的标准工作液中对应组分的定性离子的相对丰度比较 ,偏差不超过表 2规定的范围 ,则可判定为试样中检出对应的待测组分。

3

表 2 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差

相对离子丰度/%

> 50

> 20~ 50

> 10~ 20

≤10

最大允许偏差/%

±20

±25

±30

±50

5.4.2 定量测定

将标准系列工作液(3. 4. 3)和试样溶液按仪器参考条件(5. 3)进行测定。 以标准系列工作液(3. 4. 3)的浓度为横坐标 , 以峰面积为纵坐标 ,绘制标准工作曲线 ,按外标法计算试样中目标成分的含量。试样中待测化合物的峰面积应在标准曲线范围内 ,超出标准曲线质量浓度上限的试样 ,应根据实际浓度用乙腈或空白基质提取液稀释至线性范围内再进行测定。

液体饮料基质中 25种标准物质检测谱图见附录 C。

5.5 空白试验

除不加试样外 ,均按 5. 2 的步骤操作。

6 结果计算

试样中各待测组分的含量按公式(1)计算 :

X f … … … … … … … … … … ( 1 )

式中 :

X — 试样中被测组分的含量 ,单位为毫克每千克(mg/kg) ;

ρ — 由标准曲线得到的试样溶液中各待测组分的质量浓度 ,单位为纳克每毫升(ng/mL) ;

ρ0 — 由标准曲线得到的空白溶液中各待测组分的质量浓度 ,单位为纳克每毫升(ng/mL) ;

V — 试样溶液定容体积 ,单位为毫升(mL) ;

m — 试样的质量 ,单位为克(g) ;

f — 稀释倍数。

计算结果保留三位有效数字。

7 精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的 15%。

8 其他

当取样量为 1 g,定容至 10 mL时 , 吲哚洛尔、阿普洛尔、普萘洛尔、氧烯洛尔、阿替洛尔、美托洛尔、索他洛尔、左布诺洛尔、喷布洛尔、卡替洛尔、艾司洛尔、卡拉洛尔、倍他洛尔、美替洛尔、纳多洛尔、噻吗洛尔、比索洛尔、拉贝洛尔、醋丁洛尔、贝凡洛尔、阿罗洛尔、塞利洛尔、奈必洛尔、卡维地洛、兰地洛尔的方法检出限均为 0. 005 mg/kg,定量限均为 0. 010 mg/kg。

4

9 结果表述

当各待测化合物的检测结果大于各自定量限时 , 可认为存在使用 β-受体阻滞剂的可能 ,并应结合现场执法证据进行综合研判。

附录 A

(资料性)

标准品的中文名称、英文名称、CAS号、分子式和相对分子质量

标准品的中文名称、英文名称、CAS号、分子式和相对分子质量见表 A. 1。

表 A. 1 标准品的中文名称、英文名称、CAS号、分子式和相对分子质量

序号

中文名称

英文名称

CAS号

分子式

相对分子质量

吲哚洛尔

Pindolol

13523-86-9

C14 H20N2 O2

248. 32

阿普洛尔

Alprenolol

13655-52-2

C15 H23NO2

249. 35

盐酸普萘洛尔

Propranololhydrochloride

318-98-9

C16 H21NO2 · HCl

295. 81

盐酸氧烯洛尔

Oxprenololhydrochloride

6452-73-9

C15 H23NO3 · HCl

301. 81

阿替洛尔

Atenolol

29122-68-7

C14 H22N2 O3

266. 34

6

酒石酸美托洛尔

Metoprololtartrate

56392-17-7

(C15 H25NO3) 2 · C4 H6 O6

684. 82

7

盐酸索他洛尔

Sotalolhydrochloride

959-24-0

C12 H20N2 O3 S · HCl

308. 82

8

盐酸左布诺洛尔

Levobunololhydrochloride

27912-14-7

C17 H25NO3 · HCl

327. 85

9

喷布洛尔

Penbutolol

36507-48-9

C18 H29NO2

291. 43

10

盐酸卡替洛尔

Carteololhydrochloride

51781-21-6

C16 H24N2 O3 · HCl

328. 84

11

盐酸艾司洛尔

Esmololhydrochloride

81161-17-3

C16 H25NO4 · HCl

331. 84

12

卡拉洛尔

Carazolol

57775-29-8

C18 H22N2 O2

298. 38

13

倍他洛尔

Betaxolol

63659-18-7

C18 H29NO3

307. 43

14

美替洛尔

Metipranolol

22664-55-7

C17 H27NO4

309. 40

15

纳多洛尔

Nadolol

42200-33-9

噻吗洛尔

Timolol

26839-75-8

C13 H24N4 O3 S

316. 42

富马酸比索洛尔

Bisoprololfumarate

104344-23-2

(C18 H31NO4) 2 · C4 H4 O4

766. 96

18

盐酸拉贝洛尔

Labetalolhydrochloride

32780-64-6

C19 H24N2 O3 · HCl

364. 87

19

盐酸醋丁洛尔

Acebutololhydrochloride

34381-68-5

C18 H28N2 O4 · HCl

372. 89

盐酸贝凡洛尔

Bevantololhydrochloride

42864-78-8

C20 H27NO4 · HCl

381. 89

21

阿罗洛尔

Arotinolol

68377-92-4

C15 H21N3 O2 S3

371. 54

22

盐酸塞利洛尔

Celiprololhydrochloride

57470-78-7

C20 H33N3 O4 · HCl

415. 96

23

盐酸奈必洛尔

Nebivololhydrochloride

152520-56-4

C22 H25F2 NO4 · HCl

441. 90

24

卡维地洛

Carvedilol

72956-09-3

C24 H26N2 O4

406. 48

25

兰地洛尔

Landiolol

133242-30-5

C25 H39N3 O8

509. 59

附录 B

质谱参考条件

质谱参考条件如下 :

a) 电离方式 : 电喷雾电离(ESI) ;

b) 检测方式 :多反应监测(MRM) ;

c) 扫描方式 :正离子模式 ;

d) 毛细管电压 :3 500V;

e) 干燥气流速 :7 L/min;

f) 干燥气温度 :300 ℃ ;

g) 鞘气流速 :11 L/min;

h) 鞘气温度 :350 ℃ ;

i) 定性离子对、定量离子对及其他质谱参数见表 B. 1。

表 B. 1 25种 β-受体阻滞剂质谱参数参考表

化合物名称

母离子(m/z)

子离子(m/z)

碰撞能量/eV

碎裂电压/V

249. 1

116. 1*

120

56. 1

37

250. 2

72. 1*

135

29

普萘洛尔

260. 1

140

33

氧烯洛尔

266. 2

116. 1

267. 1

145. 0*

74. 1

美托洛尔

268. 2

77. 1*

73

130

65

索他洛尔

273. 1

255. 1*

100

133. 1

左布诺洛尔

292. 2

236. 1*

180

卡替洛尔

293. 2

237. 1*

202. 0

表 B. 1 25种 β-受体阻滞剂质谱参数参考表 (续)

艾司洛尔

296. 2

299. 2

145

41

308. 2

85

55. 0

310. 2

191. 0*

254. 1*

317. 2

261. 1*

比索洛尔

326. 0

28

拉贝洛尔

329. 2

311. 2*

91. 1

49

醋丁洛尔

337. 2

56. 1*

160

贝凡洛尔

346. 2

165. 0*

80

150. 0

372. 1

316. 1*

298. 9

塞利洛尔

380. 2

74. 1*

155

251. 0

奈必洛尔

406. 2

151. 1*

36

44. 2

35

407. 2

100. 1*

170

224. 1

510. 2

157. 1*

195

143. 1

* 定量离子。

附录 C

液体饮料基质中 25种标准物质检测谱图

液体饮料基质中 25种 β-受体阻滞剂总离子流图见图 C. 1。液体饮料基质中 25种 β-受体阻滞剂的特征离子质量色谱图见图 C. 2。

标引序号说明 :

1 — 吲哚洛尔 ;

2 — 阿普洛尔 ;

3 — 普萘洛尔 ;

4 — 氧烯洛尔 ;

5 — 阿替洛尔 ;

6 — 美托洛尔 ;

7 — 索他洛尔 ;

8 — 左布诺洛尔 ;

9 — 喷布洛尔 ;

10— 卡替洛尔 ;

11— 艾司洛尔 ;

12— 卡拉洛尔 ;

13— 倍他洛尔 ;

 

14— 美替洛尔 ;

15— 纳多洛尔 ;

16— 噻吗洛尔 ;

17— 比索洛尔 ;

18— 拉贝洛尔 ;

19— 醋丁洛尔 ;

20— 贝凡洛尔 ;

21— 阿罗洛尔 ;

22— 塞利洛尔 ;

23— 奈必洛尔 ;

24— 卡维地洛 ;

25— 兰地洛尔。

图 C. 1 液体饮料基质中 25种标准物质总离子流图(10. 0 ng/mL)

a) 吲哚洛尔 b) 阿普洛尔

c) 普萘洛尔

e) 阿替洛尔

g) 索他洛尔

i) 喷布洛尔

d) 氧烯洛尔

f) 美托洛尔

h) 左布诺洛尔

j) 卡替洛尔

图 C.2 液体饮料基质中 25种 β-受体阻滞剂的特征离子质量色谱图(10. 0 ng/mL)

k) 艾司洛尔

l) 卡拉洛尔

m) 倍他洛尔

n) 美替洛尔

o) 纳多洛尔

q) 比索洛尔

s) 醋丁洛尔

p) 噻吗洛尔

r) 拉贝洛尔

t) 贝凡洛尔

图 C.2 液体饮料基质中 25种 β-受体阻滞剂的特征离子质量色谱图(10. 0 ng/mL) (续)

u) 阿罗洛尔

w) 奈必洛尔

y) 兰地洛尔

v) 塞利洛尔

x) 卡维地洛

本方法起草单位 :南京市食品药品监督检验院(胡紫艳、凌睿、曹玉、马志、金鑫、刘雯婷)、中国质量检验检测科学研究院(冯峰、张峰)、西安市食品药品检验所(李卓、张亚锋)、中国肉类食品综合研究中心(王娟强、郭超)。