BJS 202505 调味品、豆制品、肉制品等食品中红2G、二甲基黄、 二乙基黄的测定

食品 补充 检验 方法

BJS202505

调味品、豆制品、肉制品等食品中红 2G、二甲基黄、二乙基黄的测定

2025-09-29发布

国家市场监督管理总局发 布

调味品、豆制品、肉制品等食品中

红 2G、二甲基黄、二乙基黄的测定

1 范围

本方法规定了调味品、豆制品、肉制品、水产制品中红 2G、二甲基黄、二乙基黄的液相色谱-串联质谱测定方法。

本方法适用于香辛料、固体 复合 调味 料、半固 体复 合调 味料、豆制 品、肉制 品、水产 制品 中红 2G、二甲基黄、二乙基黄的测定。

2 原理

试样中的二甲基黄、二乙基黄用乙腈超声提取 ,提取液经基质分散萃取填料净化 ,液相色谱-串联质谱仪测定 ,外标法定量 ;试样中的红 2G用氨水-乙醇溶液提取 , 提取液经固相萃取小柱净化 ,液相色谱-串联质谱仪测定 ,外标法定量。

3 试剂和材料

除另有规定外 ,本方法所用试剂均为分析纯 ,水为 GB/T 6682规定的一级水。

3. 1 试剂

3. 1. 1 无水乙醇(C2 H5 OH)。

3. 1.2 氨水(NH4 OH) :含量 25. 0% ~ 28. 0%。

3. 1.3 甲醇(CH3 OH)。

3. 1.4 乙腈(CH3CN) :色谱纯。

3. 1.5 乙酸铵(CH3COONH4) :色谱纯。

3. 1.6 无水硫酸镁(MgSO4)。

3. 1.7 氯化钠(NaCl)。

3. 1. 8 甲酸(CHOOH) :色谱纯。

3.2 试剂配制

3.2. 1 氨水乙醇溶液 :量取氨水(3. 1. 2)20 mL,再加入无水乙醇(3. 1. 1)70 mL,用水稀释至 100 mL。

3.2.2 氨水甲醇溶液 :量取氨水(3. 1. 2)2 mL,用甲醇(3. 1. 3)稀释至 100 mL。

3.2.3 10 mmol/L乙酸铵溶液 :称取乙酸铵(3. 1. 5)0. 770 8 g,用水溶解并稀释至 1 000 mL。

3.2.4 50%乙酸铵乙腈溶液 :量取乙酸铵溶液(3. 2. 3)50 mL,用乙腈(3. 1. 4)稀释至 100 mL。

3.2.5 5%甲醇水溶液 :取甲醇(3. 1. 3)5 mL,用水稀释至 100 mL。

3.2.6 10 mmol/L乙酸铵水溶液(含 0. 1%甲酸) :称取乙酸铵(3. 1. 5)0. 770 8 g,加适量的水溶解 ,再加入 1 mL 甲酸(3. 1. 8) ,用水定容至 1 000 mL。

3.3 标准品

二甲基黄、二乙基黄和红 2G 标准品 :纯度均不小于 95. 0% ,或经国家认证并授予标准物质证书的

1

标准品。标准品的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量见附录 A。

3.4 标准溶液配制

3.4. 1 二甲 基黄 标准 储备 液 (500 μg/mL) : 准确 称取 二甲 基黄 标准 品 10 mg(精确 至 0. 01 mg)置于20 mL 容量瓶中 ,用乙腈(3. 1. 4)溶解定容至刻度 ,配制成 500 μg/mL 的标准储备液 ,0 ℃ ~ 4 ℃避光保存 ,有效期 6个月。

3.4.2 二乙 基黄 标准 储备 液 (500 μg/mL) : 准确 称取 二乙 基黄 标准 品 10 mg(精确 至 0. 01 mg)置于20 mL 容量瓶中 ,用乙腈(3. 1. 4)溶解定容至刻度 ,配制成 500 μg/mL 的标准储备液 ,0 ℃ ~ 4 ℃避光保存 ,有效期 6个月。

3.4.3 红 2G标准储备液(500μg/mL) :准确称取红 2G标准品 10 mg(精确至 0. 01 mg)置于 20 mL容量瓶中 ,用水溶解后用乙腈(3. 1. 4)定容至刻度 ,配制成 500μg/mL 的标准储备液 ,0 ℃ ~4 ℃避光保存 ,有效期 6个月。

3.4.4 二甲基黄和二乙基黄混合标准中间溶液 :分别精密量取二甲基黄标准储备液(3. 4. 1)和二乙基黄标准储备液(3. 4. 2)各 0. 08 mL,置于同一 100 mL容量瓶中 ,用乙腈(3. 1. 4)定容至刻度 ,混匀 ,制成浓度为 400 ng/mL 的二甲基黄和二乙基黄混合标准中间溶液 ,0 ℃ ~4 ℃避光保存 ,有效期 6个月。

3.4.5 红 2G标准中间溶液 :精密量取红 2G标准储备液(3. 4. 3) 1 mL,置于 100 mL容量瓶中 ,用乙腈(3. 1. 4)定容至刻度 ,混匀 ,制成浓度为 5 μg/mL 的红 2G 标准中间溶液 ,0 ℃ ~ 4 ℃避光保存 ,有效期6个月。

3.4.6 二甲基黄和二乙基黄基质标准系列工作溶液 :称取空白基质 2 g共 6份 ,置于 50mL聚丙烯离心管中 ,分别精密加入二甲基黄和二乙基黄混合标准中间溶液(3. 4. 4)10 μL、20 μL、40 μL、80 μL、100 μL和 120 μL, 按 5. 3. 1 同法 操作 , 制成 浓度 为 2 ng/mL、4 ng/mL、8 ng/mL、16 ng/mL、20 ng/mL 和24ng/mL 的二甲基黄和二乙基黄基质标准系列工作溶液或依仪器响应情况配制适当浓度的标准系列工作液。

3.4.7 红 2G基质标准系列工作溶液 :称取空白基质 2 g共 6 份 ,置于 50 mL 聚丙烯离心管中 ,分别精密加入红 2G标准中间溶液(3. 4. 5)10μL、20μL、40μL、80μL、100μL和 120μL,按 5. 3. 2 同法操作 ,制成浓度为 25 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL、200 ng/mL、250ng/mL和 300 ng/mL 的红 2G基质标准系列工作溶液或依仪器响应情况配制适当浓度的标准系列工作液。

3.5 材料

3.5. 1 QuEChERS净化粉末(1g/15 mL) :EMR-Lipid增强型去脂分散粉末或其他等效产品。使用前加入 2 mL水涡旋混匀活化。

3.5.2 PWAX弱阴离子固相萃取柱(150 mg/6 mL)或其他等效柱。使用前依次用 6 mL 甲醇、6 mL水进行活化。

3.5.3 微孔滤膜(PTFE) :0. 22 μm ,有机系。

4 仪器和设备

4. 1 液相色谱-串联质谱仪 :配电喷雾离子源(ESI)。

4.2 分析天平 :感量分别为 0. 001 g 和 0. 01 mg。

4.3 涡旋振荡器。

4.4 超声仪。

2

4.5 离心机 :转速不低于 10 000 r/min。

4.6 氮气浓缩仪。

4.7 组织匀浆机。

5 分析步骤

5. 1 试样的制备和保存

5. 1. 1 香辛料、固体复合调味料、半固体复合调味料、豆制品、肉制品和水产制品取约 200 g,粉碎均匀后平均分装入两个洁净容器中 , 密封 ,并标识 ; 豆制品、肉制品和水产制品置于 - 18 ℃冷冻 保存 ,香辛料、固体复合调味料、半固体复合调味料置于室温保存。

5. 1.2 香辛料粉混合均匀后 ,平均分装入两个洁净容器中 ,密封 ,并标识 ,置于室温保存。

5.2 空白样品基质的选择和确定

选择与试样基质相同或相近的阴性样品作为空白基质。

5.3 样品前处理

5.3. 1 二甲基黄和二乙基黄测定试样溶液的制备

提取 :准确称取试样 2 g(精确至 0. 001g)置于 50mL聚丙烯离心管中 ,加入 10mL乙腈 ,涡旋混匀1 min,超声提取 10 min,10 000 r/min离心 10 min,上清液转移至 20 mL容量瓶中 ;残渣再加入 5 mL乙腈 ,重复提取一次 ,上清液转移至同一容量瓶中 ,用乙腈定容至刻度 ,混匀 ,待净化。

净化 :精密吸取 10 mL 提取 液加 入装 有 QuEChERS净化 粉末 (3. 5. 1) 的离 心管 中 , 涡旋 1 min, 3 700 r/min离心 5 min,取上清液加入装有 1. 5 g无水硫酸镁和 0. 5 g 氯化钠的离心管中 ,涡旋 1 min, 3 700 r/min离心 5 min,取上清液至氮吹管中 ,40 ℃氮气浓缩至近干 ,精密加入 1 mL 50%乙酸铵乙腈溶液(3. 2. 4)复溶 ,过微孔滤膜(3. 5. 3) ,供液相色谱-串联质谱仪分析。

5.3.2 红 2G测定试样溶液的制备

提取 :准确称取试样 2 g(精确至 0. 001 g)置于 50 mL 聚丙烯离心管中 ,加入氨水乙醇溶液(3. 2. 1) 10 mL,涡旋混匀 1 min,超声 10 min,10 000 r/min离心 10 min,上清液转移至 20 mL容量瓶中 ;残渣再加入 5 mL氨水乙醇溶液(3. 2. 1) ,重复提取一次 ,上清液转移至同一容量瓶中 ,氨水乙醇溶液(3. 2. 1)定容至刻度 ,混匀 ,待净化。

净化 :精密吸取 10 mL提取液至氮吹管中 ,60 ℃吹至约 1 mL,加入 10 mL 5%甲醇溶液(3. 2. 5)溶解残渣 ,作为待净化液 ;待净化液以低于 1. 0 mL/min 的流速通过活化后的固相萃取小柱(3. 5. 2) ,依次用 6 mL水和 6 mL 甲醇淋洗小柱 ,弃去淋洗液。用 10 mL氨水甲醇溶液(3. 2. 2)洗脱 ,分两次加入 , 收集洗脱液。40 ℃氮气浓缩至近干 ,精密加入 1 mL 50%乙酸铵乙腈溶液(3. 2. 4)复溶 ,过微孔滤膜(3. 5. 3) ,供液相色谱-串联质谱仪分析。

5.4 仪器参考条件

5.4. 1 二甲基黄和二乙基黄色谱参考条件如下 :

a) 色谱柱 :C18色谱柱(3. 0 mm×150 mm ,1. 8 μm) ,或性能相当者 ;

b) 流动相 :A相为 10 mmol/L乙酸铵水溶液(含 0. 1%甲酸) ,B相为乙腈 ;

c) 流速 :0. 3 mL/min;

3

d) 柱温 :40 ℃ ;

e) 进样体积 :2 μL;

f) 流动相梯度洗脱程序见表 1。

表 1 二甲基黄和二乙基黄流动相梯度洗脱程序

时间/min

流动相 A/%

流动相 B/%

0. 00

15

85

6. 50

10

90

7. 00

9. 00

5.4.2 红 2G色谱参考条件如下 :

b) 流动相 :A相为 10 mmol/L乙酸铵水溶液 ,B相为乙腈 ;

f) 流动相梯度洗脱程序见表 2。

表 2 红 2G流动相梯度洗脱程序

3. 00

75

25

5. 00

71

29

8. 00

8. 10

10. 00

5.4.3 质谱参考条件如下 :

a) 离子源 : 电喷雾离子源(ESI源) ;

b) 扫描方式 :正离子模式和负离子模式 ;

c) 检测方式 :多反应监测(MRM) ;

二甲基黄、二乙基黄、红 2G质谱参考条件见附录 B。

5.5 标准曲线的制作

将二甲基黄和二乙基黄基质标准系列工作溶液(3. 4. 6)和红 2G基质标准系列工作溶液(3. 4. 7)分别注入液相色谱-串联质谱仪中 ,测定相应的峰面积 , 以基质标准系列工作液中各化合物的浓度为横坐标 ,以峰面积为纵坐标 ,绘制标准曲线。标准溶液的色谱图见附录 C。

4

5.6 试样溶液的测定

5.6. 1 定性测定

将二甲基黄和二乙基黄基质标准系列工作溶液(3. 4. 6)和试样溶液(5. 3. 1)以及红 2G基质标准系列工作溶液(3. 4. 7)和试样溶液(5. 3. 2)分别注入液相色谱-串联质谱仪中 ,记录基质标准系列工作溶液和试样溶液中各化合物的保留时间 ,在相同条件下 ,试样溶液和基质标准系列工作溶液中待测组分的色谱峰相对保留时间偏差在 ±2. 5%以内 ,并且其定性离子与浓度相当的标准溶液中相应的定性离子相对丰度相比 ,偏差不超过表 3规定的范围 ,则可判定试样中检出对应的被测化合物。

表 3 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差

相对离子丰度/%

> 50

> 20~ 50

> 10~ 20

≤10

允许的最大偏差/%

±20

±25

±30

±50

5.6.2 定量测定

将二甲基黄和二乙基黄基质标准系列工作溶液(3. 4. 6)和试样溶液(5. 3. 1)以及红 2G基质标准系列工作溶液(3. 4. 7)和试样溶液(5. 3. 2)分别注入液相色谱-串联质谱仪中 ,用标准曲线计算试样溶液中各待测组分浓度。试样溶液中各待测组分的响应值应在线性范围内 ,若超出线性范围 ,应用空白基质溶液将试样溶液中待测组分稀释至线性范围内。

5.7 空白试验

除不加试样外 ,均按 5. 3 步骤操作。

6 结果计算

试样中各待测组分的含量按式(1)计算 :

X … … … … … … … … … … ( 1 )

式中 :

X — 试样中待测组分的含量 ,单位为微克每千克(μg/kg) ;

ρ — 由标准曲线得到的试样溶液中被测组分的浓度 ,单位为纳克每毫升(ng/mL) ;

V3 — 待测溶液的定容体积 ,单位为毫升(mL) ;

V1 — 提取溶液的定容体积 ,单位为毫升(mL) ;

V2 — 提取溶液的分取体积 ,单位为毫升(mL) ;

m — 试样的质量 ,单位为克(g)。

以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示 ,计算结果保留三位有效数字。

7 精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的 15%。

5

8 其他

当称样量为 2 g 时 ,试样中二甲基黄和二乙基黄的检出限为 1. 0 μg/kg,定量限为 2. 0 μg/kg;红 2G的检出限为 15μg/kg,定量限为 25μg/kg。

9 判定规则

本方法测定的样品中不应检出红 2G、二甲基黄、二乙基黄 , 即测得含量不超过定量限。

6

附录 A

(资料性)

标准品的中文名称、英文名称、CAS号、分子式和相对分子质量

标准品的中文名称、英文名称、CAS号、分子式和相对分子质量见表 A. 1。

表 A. 1 标准品的中文名称、英文名称、CAS号、分子式和相对分子质量

序号

中文名称

英文名称

CAS号

分子式

相对分子质量

二甲基黄

SolventYellow 2

60-11-7

C14 H15N3

225. 29

二乙基黄

SolventYellow 56

2481-94-9

C16 H19N3

253. 34

红 2G

AcidRed 1

3734-67-6

C18 H13N3 Na2 O8S2

509. 42

7

附录 B

质谱参考条件

二甲基黄和二乙基黄质谱参考条件如下 :

a) 毛细管电压 :正离子 :3. 0 kV;

b) 干燥气温度 :200 ℃ ;

c) 干燥气流量 :11 L/min;

e) 鞘气温度 :250 ℃ ;

d) 雾化气压力 :20 psi(1psi= 6. 895 kPa) ;

f) 鞘气流量 :11 L/min;

g) 碰撞气为高纯氮气 ,干燥气、雾化气、鞘气等均为氮气或其他合适气体 ,母离子、子离子、碎裂电压和碰撞能量见表 B. 1。

表 B. 1 二甲基黄和二乙基黄多反应监测(MRM)条件

化合物

母离子(m/z)

子离子(m/z)

碎裂电压/V

碰撞能量 CE/eV

226. 1

120. 2

380

35

77. 1a

254. 2

162. 2

20

32

a 定量离子。

红 2G质谱参考条件如下 :

a) 毛细管电压 :负离子 :3. 0 kV;

d) 雾化气压力 :20 psi;

g) 碰撞气为高纯氮气 ,干燥气、雾化气、鞘气等均为氮气或其他合适气体 ,母离子、子离子、碎裂电压和碰撞能量见表 B. 2。

表 B.2 红 2G 多反应监测(MRM)条件

463. 9

358. 9a

28

344. 0

30

8

附录 C

二甲基黄、二乙基黄、红 2G标准溶液多反应监测(MRM)色谱图

二甲基黄、二乙基黄、红 2G标准溶液多反应监测(MRM)色谱图见图 C. 1、图 C. 2。

a) 二甲基黄

b) 二乙基黄

图 C. 1 二甲基黄和二乙基黄(20ng/mL)标准溶液多反应监测(MRM)色谱图

9

图 C.2 红 2G(100ng/mL)标准溶液多反应监测(MRM)色谱图

本方法起草单位 : 四川省食品检验研究院(余晓琴、闵宇航、吴宇、刘斯琪、苏燕、杨诗嘉、李澍才)。