资源简介
食品 补充 检验 方法
BJS202504
食品中酚丁、双丙酚丁、双酚沙丁、
双酚沙丁醋酸酯和酚丁双环丙甲酸
酯的测定
2025-09-29发布
国家市场监督管理总局发 布
1 范围
本方法规定了食品中酚丁、双丙酚丁、双酚沙丁、双酚沙丁醋酸酯和酚丁双环丙甲酸酯的高效液相色谱-串联质谱测定方法。
本方法适用于糖果、果冻、蜜饯、果蔬汁饮料、固体饮料、饼干、代用茶中酚丁、双丙酚丁、双酚沙丁、双酚沙丁醋酸酯和酚丁双环丙甲酸酯的测定。
2 原理
试样经 0. 1%甲酸-20%水-甲醇溶液提取定容 ,采用高效液相色谱-串联质谱仪检测 ,外标法定量。
3 试剂和材料
除非另有说明 ,本方法所用试剂均为色谱纯 ,水为 GB/T 6682规定的一级水。
3. 1 试剂
3. 1. 1 乙腈(C2 H3N)。
3. 1.2 甲醇(CH4 O)。
3. 1.3 甲酸(CH2 O2)。
3. 1.4 乙酸铵(C2 H7 O2N)。
3.2 试剂配制
3.2. 1 0. 1%甲酸-水溶液 : 吸取甲酸(3. 1. 3)1 mL,用水稀释并定容至 1 000 mL,混匀备用。
3.2.2 0. 1%甲酸-甲醇溶液 : 吸取甲酸(3. 1. 3)1 mL,用甲醇(3. 1. 2)稀释并定容至 1 000 mL,混匀备用。
3.2.3 0. 1%甲酸-20%水-甲醇溶液 :量取甲醇(3. 1. 2)800 mL,加入甲酸(3. 1. 3)1 mL,用水稀释并定容至 1 000 mL,混匀备用。
3.2.4 乙酸铵-甲酸-水溶液(5 mmol/L) :称取乙酸铵(3. 1. 4)0. 385 g,用 0. 1%甲酸-水溶液(3. 2. 1)溶解并定容至 1 000 mL,混匀备用。
3.3 标准品
酚丁、双酚沙丁、双酚沙丁醋酸酯、双丙酚丁和酚丁双环丙甲酸酯标准品 ,纯度 ≥98%或经国家认证并授予标准物质证书的标准品 ,见附录 A。
3.4 标准溶液配制
3.4. 1 标准储备溶液(1mg/mL) :称取标准品各 10 mg(精确至 0. 000 1 g) ,加入适量甲醇(3. 1. 2)充分
1
溶解后分别转移至 10mL容量瓶中 ,用甲醇(3. 1. 2)定容至刻度 ,配制成浓度均为 1 mg/mL 的标准储备溶液。 -18 ℃及以下密封避光保存 ,有效期 3个月。
3.4.2 混合标准中间溶液(10μg/mL) :分别准确移取各标准储备液 1. 0 mL于 100 mL容量瓶中 ,用甲醇 (3. 1. 2)稀释并定容 ,配制成浓度为 10 μg/mL 的混合标准中间溶液。0 ℃ ~ 4 ℃密封避光保存 ,有效期 1个月。
3.4.3 标准系列工作溶液 :分别准确吸取混合标准中间溶液适量 ,用空白基质提取液(5. 2. 3)稀释 ,配制成浓度分别为 2. 0 ng/mL、5. 0 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL 和 50 ng/mL 的基质标准系列工作溶液 ,现配现用。
3.5 材料
3.5. 1 有机相微孔滤膜 :0. 22 μm ,尼龙或聚四氟乙烯材质。
4 仪器和设备
4. 1 高效液相色谱-串联质谱仪 ,配电喷雾离子源(ESI)。
4.2 分析天平 :感量分别为 0. 001 g 和 0. 000 1 g。
4.3 超声波振荡仪。
4.4 恒温水浴装置。
4.5 离心机 :转速不低于 4 000 r/min。
4.6 涡旋混合器。
4.7 高速粉碎机。
5 分析步骤
5. 1 试样制备和保存
取 100g试样(当试样低于 100g 时取全部试样) ,果蔬汁饮料、固体饮料充分混匀 ,饼干、代用茶、糖果充分粉碎混匀 , 蜜饯 样品 去核 , 剪碎 至 2 mm 以下 , 果冻 样品 充分 搅碎 至浆 状。 制备 好的 试样 于0 ℃ ~4 ℃密封保存。
5.2 试样处理
5.2. 1 蜜饯、果蔬汁饮料、固体饮料、饼干、代用茶
称取 1. 0 g(精确至 0. 001 g)样品于 50 mL具塞离心管中 ,加入 40 mL 0. 1%甲酸-20%水-甲醇溶液(3. 2. 3) ,超声提取 15min,冷却至室温 ,4000 r/min离心 5 min,上清液全部转移至 50mL容量瓶中 ,用0. 1%甲酸-20%水-甲醇溶液(3. 2. 3)定容至刻度并摇匀 ,提取液经微孔滤膜过滤 ,待测。
5.2.2 糖果、果冻
称取 1. 0 g(精确至 0. 001 g)样品于 50 mL具塞离心 管中 , 加入 8 mL 0. 1%甲酸-水溶 液 (3. 2. 1) , 70 ℃ ~80 ℃水浴至样品溶解(水浴 过程 中注 意振 摇) , 冷却 至室 温 , 加入 32 mL 0. 1%甲酸-甲醇 溶液(3. 2. 2) ,超声提取 15min,冷却至室温 ,4000 r/min离心 5 min,上清液全部转移至 50mL容量瓶中 ,用0. 1%甲酸-20%水-甲醇溶液(3. 2. 3)定容至刻度并摇匀 ,提取液经微孔滤膜过滤 ,待测。
5.2.3 空白基质提取液
选取空白基质样品 ,按照 5. 2. 1 或 5. 2. 2操作步骤进行空白基质提取液的制备。
2
5.3 仪器参考条件
5.3. 1 色谱条件如下。
a) 色谱柱 :高强度硅胶颗粒三键键合 C18色谱柱 (2. 1 mm×100 mm ,1. 8 μm) ,或性能相当者。
b) 流动相 :A 为 5 mmol/L乙酸铵-甲酸-水溶液(3. 2. 4) ,B 为乙腈(3. 1. 1) , 流动相梯度洗脱程序见表 1。
表 1 流动相梯度洗脱程序
时间/min
流动相 A/%
流动相 B/%
0
80
20
1. 5
6. 5
5
95
9
9. 01
11
c) 流速 :0. 3 mL/min。
d) 柱温 :40 ℃。
e) 进样量 :1 μL。
5.3.2 质谱条件如下。
a) 离子源 : 电喷雾离子源(ESI)。
b) 扫描方式 :正离子扫描。
c) 监测方式 :多反应监测模式(MRM)。
d) 离子喷雾电压(IS) :5 000 V。
e) 雾化气压力(GS1) :345 kPa。
f) 辅助气压力(GS2) :310kPa。
g) 气帘气(CUR) :241 kPa。
h) 碰撞气(CAD) :62kPa。
i) 离子源温度(TEM) :550 ℃。
j) 其他质谱参数见表 2。
表 2 待测物离子对、碰撞能量和去簇电压参考值
化合物
离子对(m/z)
碰撞能量/eV
去簇电压/V
酚丁
318. 1/224. 1*
21
83
318. 1/196. 1
45
双酚沙丁
334. 1/240. 1*
16
75
334. 1/212. 1
42
双酚沙丁醋酸酯
418. 1/240. 1*
25
92
418. 1/282. 1
14
3
表 2 待测物离子对、碰撞能量和去簇电压参考值 (续)
双丙酚丁
430. 2/224. 1*
32
111
430. 2/280. 1
17
酚丁双环丙甲酸酯
454. 2/224. 1*
26
114
454. 2/292. 1
19
* 定量离子对。
5.4 标准曲线的制作
将标准系列工作溶液(3. 4. 3)分别注入高效液相色谱-串联质谱仪中 ,测定相应的峰面积 , 以标准系列工作溶液中各化合物的质量浓度为横坐标 , 以对应化合物色谱峰的峰面积为纵坐标 ,绘制标准曲线。标准溶液的色谱图见附录 B。
5.5 试样溶液的测定
5.5. 1 定性测定
按仪器参考条件测定试样溶液和标准系列工作溶液 ,记录试样和标准系列工作溶液中各化合物的色谱保留时间和定量离子与定性离子的相对离子丰度。 当试样中化合物色谱峰保留时间与标准系列工作溶液中的保留时间相对偏差不大于 2. 5% ,且定量离子与定性离子的相对离子丰度与浓度相当标准溶液中相对离子丰度(k)偏差不超过表 3规定的范围 ,则可确定试样中检出相应化合物。
表 3 相对离子丰度的最大允许偏差
相对离子丰度 k/%
k>50
20
10
k≤10
最大允许偏差/%
±20
±25
±30
±50
5.5.2 定量测定
将试样溶液按仪器参考条件进行测定 ,得到相应的样品溶液的色谱峰面积。根据标准曲线得到待测物的浓度。试样溶液中待测物的响应值均应在标准曲线的线性范围之内 ,超出线性范围时应根据目标物含量用空白基质提取液(5. 2. 3)进行适当倍数稀释后再进行分析。
5.6 空白试验
除不加试样外 ,均按 5. 2 步骤操作。
6 结果计算
试样中各待测组分的含量按式(1)计算 :
X … … … … … … … … … … ( 1 )
式中 :
X — 试样中各待测组分的含量 ,单位为毫克每千克(mg/kg) ;
4
ρ — 由标准曲线得到的试样溶液中各待测组分的质量浓度 ,单位为纳克每毫升(ng/mL) ;
V — 定容体积 ,单位为毫升(mL) ;
f — 试样溶液的稀释倍数 ;
1 000— 换算系数 ;
m — 试样的质量 ,单位为克(g)。
以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示 ,计算结果保留三位有效数字。
7 精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的 15%。
8 其他
当取样量为 1. 0 g、定容体积为 50mL时 ,酚丁、双丙酚丁、双酚沙丁、双酚沙丁醋酸酯和酚丁双环丙甲酸酯的检出限均为 0. 05 mg/kg,定量限均为 0. 10 mg/kg。
9 判定规则
本方法测定的样品中不应检出酚丁、双丙酚丁、双酚沙丁、双酚沙丁醋酸酯和酚丁双环丙甲酸酯 , 即测得含量不超过定量限。
附录 A
(资料性)
标准品的中文名称、英文名称、CAS号、分子式、相对分子质量和化学结构式
标准品的中文名称、英文名称、CAS号、分子式、相对分子质量和化学结构式见表 A. 1。
表 A. 1 标准品的中文名称、英文名称、CAS号、分子式、相对分子质量和化学结构式
中文名称
英文名称
CAS号
分子式
相对分子质量
化学结构式
Oxyphenisatine
125-13-3
C20 H15NO3
317. 34
Bisoxatin
17692-24-9
C20 H15NO4
333. 34
Bisoxatin acetate
14008-48-1
C24 H19NO6
417. 41
Oxyphenisatin
dipropionate
2943075-86-1
C26 H23NO5
429. 47
dicyclopropanecarb-
oxylate
2943075-87-2
C28 H23NO5
453. 49
6
附录 B
标准溶液色谱图
标准溶液色谱图见图 B. 1 和图 B. 2。
标引序号说明 :
1— 酚丁 ;
2— 双酚沙丁 ;
3— 双酚沙丁醋酸酯 ;
4— 双丙酚丁 ;
5— 酚丁双环丙甲酸酯。
图 B. 1 标准溶液总离子流色谱图(质量浓度 2. 0 ng/mL)
a) 酚丁(318. 1/224. 1) b) 酚丁(318. 1/196. 1)
c) 双酚沙丁(334. 1/240. 1) d) 双酚沙丁(334. 1/212. 1)
图 B.2 各化合物液相色谱-质谱/质谱多反应监测色谱图(质量浓度 2. 0 ng/mL)
7
8
e) 双酚沙丁醋酸酯(418. 1/240. 1)
f) 双酚沙丁醋酸酯(418. 1/282. 1)
g) 双丙酚丁(430. 2/224. 1)
h) 双丙酚丁(430.2/280. 1)
i) 酚丁双环丙甲酸酯(454. 2/224. 1)
j) 酚丁双环丙甲酸酯(454. 2/292. 1)
图 B.2 各化合物液相色谱-质谱/质谱多反应监测色谱图(质量浓度 2. 0 ng/mL) (续)
本方法起草单位 :武汉食品化妆品检验所(江小明、侯靖、许晴、管卓龙、毛燕妮、邱肖依、伊鋆、卢跃鹏、涂凤琴)、中国质量检验检测科学研究院(王秀娟、吴玉杰、姚美伊)。
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