BJS 202506 食品中碱性橙2等6种染料的测定

食品 补充 检验 方法

BJS202506代替 BJS201715

食品中碱性橙 2 等 6 种染料的测定

2025-09-29发布

国家市场监督管理总局发 布

BJS202506

前言

本方法代替 BJS201715《豆制品中碱性橙 2 的测定》。

本方法与 BJS201715相比 ,主要变化如下 :

— 方法名称改为 “食品中碱性橙 2 等 6种染料的测定 ”;

— 增加了水产品、肉制品、调味品、加工坚果与籽类等基质 ;

— 增加了碱性橙 21、碱性橙 22、碱性嫩黄、硫黄素 T 和酸性橙 Ⅱ ;

— 更改了方法的前处理方法及仪器参考条件 ;

— 增加了结果表述。

Ⅰ

1 范围

本方法规定了食品中碱性橙 2、碱性橙 21、碱性橙 22、碱性嫩黄、硫黄素 T 和酸性橙 Ⅱ 的液相色谱-串联质谱测定方法。

本方法适用于水产品、豆制品、肉制品、调味品、加工坚果与籽类等食品中碱性橙 2、碱性橙 21、碱性橙 22、碱性嫩黄、硫黄素 T、酸性橙 Ⅱ 的测定。

2 原理

试样经乙酸-乙酸铵溶液、乙腈超声提取 ,经分散固相萃取净化 ,采用液相色谱-串联质谱检测 ,基质匹配外标法定量。

3 试剂和材料

除非另有说明 ,本方法所用试剂均为分析纯 ,水为 GB/T 6682规定的一级水。

3. 1 试剂

3. 1. 1 乙腈(CH3CN) :色谱纯。

3. 1.2 甲酸(HCOOH) :色谱纯。

3. 1.3 氯化钠(NaCl)。

3. 1.4 乙酸铵(CH3COONH4) :色谱纯。

3. 1.5 冰乙酸(CH3COOH)。

3. 1.6 无水硫酸镁(MgSO4)。

3.2 试剂配制

3.2. 1 乙腈溶液(50+50,体积比) :量取 50 mL乙腈(3. 1. 1)和 50 mL水 ,混匀。

3.2.2 0. 1%甲酸溶液 :移取 0. 5 mL 甲酸(3. 1. 2) ,用水稀释至 500 mL,混匀。

3.2.3 含 0. 4%乙酸的 20 mmol/L乙酸铵溶液 :称取 0. 77 g 乙酸铵(3. 1. 4) ,加入适量水溶解 ,再加入2 mL 冰乙酸(3. 1. 5) ,用水稀释至 500 mL,混匀。

3.3 标准品

碱性橙 2、碱性橙 21、碱性橙 22、碱性嫩黄、硫黄素 T、酸性橙 Ⅱ标准品的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式和相对分子质量见附录 A,纯度均 ≥95% ,或经国家认证并授予标准物质证书的标准品。

3.4 标准溶液配制

3.4. 1 标准储备液 :称取碱性橙 2、碱性橙 21、碱性橙 22、碱性嫩黄、硫黄素 T、酸性橙 Ⅱ标准品(3. 3)各10 mg(精确至 0. 01 mg) ,分别用少量乙腈溶液(3. 2. 1)溶解 ,转移至 10 mL棕色容量瓶用乙腈(3. 1. 1)定容 ,摇匀 ,制成浓度为 1. 0 mg/mL标准储备液。 -18 ℃以下避光保存 ,有效期 6个月。

1

3.4.2 混合标准中间液 A:分别准确移取碱性橙 2 标准储备液 0. 2 mL,碱性橙 21、碱性橙 22、碱性嫩黄、硫黄素 T标准储备液各 0. 1 mL,酸性橙 Ⅱ标准储备液 0. 4 mL,置于同一 100 mL容量瓶中 ,用乙腈(3. 1. 1)定容至刻度 ,混匀。准确移取 1. 0 mL置于 10mL棕色容量瓶中 ,用乙腈定容至刻度 ,混匀 ,配制成浓度碱性橙 2 为 200 ng/mL,碱性橙 21、碱性橙 22、碱性嫩黄、硫黄素 T 为 100 ng/mL, 酸性橙 Ⅱ 为400 ng/mL 的混合标准中间液 A。0 ℃ ~4 ℃避光保存 ,有效期 1个月。

3.4.3 混合标准中间液 B:准确移取上述混合标准中间液 A(3. 4. 2)1. 0 mL置于 10 mL棕色容量瓶中 ,用乙腈定容至刻度 ,混匀 ,配制成浓度碱性橙 2 为 20ng/mL,碱性橙 21、碱性橙 22、碱性嫩黄、硫黄素 T为 10 ng/mL,酸性橙 Ⅱ 为 40 ng/mL 的混合标准中间液 B, 临用现配。

3.4.4 基质匹配混合标准工作溶液 :分别取混合标准中间液 B(3. 4. 3)和混合标准中间液 A(3. 4. 2)适量 ,用空白基质提取液(5. 3)稀释 ,配制成基质匹配混合标准工作溶液 ,其中碱性橙 2 浓度为 0. 4 ng/mL、 1. 0 ng/mL、2. 0 ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、30ng/mL,碱性橙 21、碱性橙 22、碱性嫩黄、硫黄素 T浓度均为 0. 2 ng/mL、0. 5 ng/mL、1. 0 ng/mL、5. 0 ng/mL、10ng/mL、15ng/mL,酸性橙 Ⅱ 为 0. 8 ng/mL、 2. 0 ng/mL、4. 0 ng/mL、20 ng/mL、40 ng/mL、60 ng/mL,或依需要配制适当浓度的基质匹配混合标准工作溶液 , 临用现配。

3.5 材料

3.5. 1 N-丙基乙二胺(PSA) :40 μm~ 100 μm。

3.5.2 十八烷基硅烷键合硅胶(C18) :40 μm~ 100 μm。

3.5.3 聚四氟乙烯滤膜 :0. 22 μm。

4 仪器和设备

4. 1 液相色谱-串联质谱仪 ,配有电喷雾离子源(ESI)。

4.2 天平 :感量分别为 0. 01 mg和 1 mg。

4.3 涡旋混合器。

4.4 超声波发生器 :≥40kHz。

4.5 离心机 :≥9000 r/min。

4.6 匀浆机。

4.7 组织捣碎机。

5 分析步骤

5. 1 试样制备和保存

水产品试样 :取具代表性的试样(鱼类水产品取鱼皮及肌肉 ,其他水产品取可食部分)约 200g,用匀浆机均质后 ,装入密封洁净容器中 , -18 ℃以下冷冻保存 ,备用。

豆制品、肉制品、固体或半固体调味品等试样 :取具代表性的试样约 200g,用匀浆机均质后 ,装入密封洁净容器中 ,于 -18℃以下冷冻保存 ,备用。

液体调味品等试样 :试样先充分搅拌均匀 ,再取具代表性的试样约 200 g,装入密封洁净容器中 , 于

-18 ℃以下冷冻保存 ,备用。

加工坚果与籽类试样 :取具代表性的试样(带壳试样不去壳)约 200g,经组织捣碎机捣碎 ,将其搅拌均匀 ,装入密封洁净容器中 ,于 -18℃以下冷冻保存 ,备用。

2

5.2 样品前处理

5.2. 1 提取

称取 1 g试样(精确至 0. 001 g)于 50 mL具塞离心管内 ,加入 2. 5 mL 乙酸-乙酸铵溶液(3. 2. 3) ,涡旋混匀 15 s,准确加入 10 mL乙腈(3. 1. 1) ,涡旋混匀 15 s,超声萃取 20 min(每超声 10 min时取出 ,涡旋混匀 1 min) ,静置分层 ,9000 r/min离心 10 min,取 6 mL上清液于 15 mL离心管内 ,加入约 0. 5 g氯化钠(3. 1. 3) ,于 -18℃以下冷冻 2 h,分层 ,取出后 9 000 r/min离心 5 min,取上清液 ,待净化。

5.2.2 净化

取上清液 1. 5 mL移入 2 mL离心管中 ,加入 10 mg PSA(3. 5. 1)、10 mg C18 (3. 5. 2)、50 mg无水硫酸镁(3. 1. 6) ,涡旋振荡 1 min,9000 r/min离心 5 min,取上清液过 0. 22μm 聚四氟乙烯滤膜(3. 5. 3) ,供液相色谱-串联质谱测定。

5.3 空白基质提取液的制备

分别准确称取适量与试样基质相同或相近的低于本方法检出限的阴性样品 1 g(精确至 0. 001 g) ,按试样同 法 (5. 2) 制备 , 混合 所有 制备 溶液 作为 空白 基质 提取 液 , 用于 基质 匹配 混合 标准 工作 溶液(3. 4. 4)制备。

5.4 仪器参考条件

5.4. 1 液相色谱参考条件如下 :

a) 色谱柱 :C18柱 ,3 μm ,2. 1 mm×150 mm ,或性能相当者 ;

b) 流动相 :A 为 0. 1%甲酸溶液(3. 2. 2) ,B为乙腈(3. 1. 1) ,梯度洗脱条件见表 1;

c) 流速 :0. 3 mL/min;

d) 柱温 :30 ℃ ;

e) 进样量 :5 μL。

表 1 液相色谱梯度洗脱条件

时间/min

流动相 A/%

流动相 B/%

0. 0

90. 0

10. 0

1. 0

7. 0

5. 0

95. 0

11. 0

14. 0

5.4.2 质谱参考条件如下 :

a) 离子源 : 电喷雾离子源(ESI源) ;

b) 监测方式 :多反应监测(MRM) ;

c) 扫描方式 :正离子扫描/负离子扫描 ;

d) 其他质谱参考条件见附录 B。

3

5.5 标准曲线的制作

将基质匹配混合标准工作溶液(3. 4. 4)分别注入液相色谱-串联质谱仪中 ,测定相应的峰面积 , 以基质匹配混合标准工作溶液中各组分的浓度为横坐标 , 以峰面积为纵坐标 ,绘制标准曲线。标准溶液各组分的典型色谱图见附录 C。

5.6 试样溶液的测定

5.6. 1 定性测定

在相同试验条件下 ,试样中待测物质的保留时间与标准溶液中对应的 保留 时间 偏差 在 ±2. 5%之内 ;且试样中被测组分定性离子的相对丰度与浓度接近的标准溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较 ,偏差不超过表 2规定的范围 ,则可判定为试样中检出对应的待测物。

表 2 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差

相对离子丰度/%

> 50

> 20~ 50

> 10~ 20

≤10

允许相对偏差/%

±20

±25

±30

±50

5.6.2 定量测定

将试样溶液注入液相色谱-串联质谱仪中 ,得到相应的峰面积 , 根据 标准 曲线 得到 待测 物的 浓度。试样溶液中各待测物的含量应在标准曲线范围内 ,若超出曲线浓度上限的试样 ,应根据测定浓度用相应空白基质提取液(5. 3)稀释后再测定。

5.7 空白试验

除不加试样外 ,均按试样同法处理。

6 结果计算

试样中各组分的含量按公式(1)计算 :

X … … … … … … … … … … ( 1 )

式中 :

X — 试样中被测组分的含量 ,单位为微克每千克(μg/kg) ;

ρ — 由标准曲线得出的试样溶液中被测组分的质量浓度 ,单位为纳克每毫升(ng/mL) ;

V — 提取溶剂的体积 ,单位为毫升(mL) ,本方法提取溶剂乙腈的体积为 10 mL;

f — 稀释倍数 ;

1 000— 换算系数 ;

m — 试样的取样量 ,单位为克(g)。

以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示 ,计算结果保留三位有效数字。

7 精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的 20%。

4

8 其他

当取样量为 1 g, 提取 溶液 体积 为 10 mL 时 , 本方 法碱 性橙 2 的检 出限为 2. 0 μg/kg, 定量 限为

4. 0 μg/kg;碱性橙 21、碱性橙 22、碱性嫩黄、硫黄素 T 的检出限均为 1. 0 μg/kg,定量限均为 2. 0 μg/kg;酸性橙 Ⅱ 的检出限为 4. 0 μg/kg,定量限为 8. 0 μg/kg。

9 结果表述

当各化合物的检测结果大于各自定量限时 ,可认为存在使用染料进行染色的可能 ,并应结合现场执法证据进行综合研判。

5

附录 A

(资料性)

标准品的中文名称、英文名称、CAS号、分子式和相对分子质量

标准品的中文名称、英文名称、CAS号、分子式和相对分子质量见表 A. 1。

表 A. 1 标准品的中文名称、英文名称、CAS号、分子式和相对分子质量

序号

中文名称

英文名称

CAS号

分子式

相对分子质量

碱性橙 2

Basic Orange2

532-82-1

C12 H12N4 · HCl

248. 71

碱性橙 21

Astrazon Orange G

3056-93-7

C22 H23ClN2

350. 88

碱性橙 22

Astrazon Orange

4657-00-5

C28 H27ClN2

426. 98

碱性嫩黄

Auramine

492-80-8

C17 H21N3

267. 37

硫黄素 T

ThioflavineT

2390-54-7

C17 H19ClN2 S

318. 86

6

酸性橙 Ⅱ

Acid Orange Ⅱ

633-96-5

C16 H11N2 NaO4S

350. 32

附录 B

质谱参考条件

质谱参考条件如下 :

b) 扫描方式 :正离子扫描/负离子扫描 ;

c) 检测方式 :多反应监测(MRM) ;

d) 电喷雾电压(IS) :4500V(ESI+)/-4 500V(ESI-) ;

e) 气帘气(CUR) :68. 95 kPa;

f) 雾化气(GS1) :310. 26kPa;

g) 辅助气(GS2) :310. 26kPa;

h) 离子源温度(TEM) :300 ℃。

6种染料监测离子对及质谱分析参数见表 B. 1。

表 B. 1 6 种染料监测离子对及质谱分析参数

化合物

扫描方式

离子对(m/z)

去簇电压/V

碰撞能量/eV

正离子

213. 1/77. 1*

54

30

213. 1/121. 2

315. 2/300. 2*

33

315. 2/285. 1

41

391. 2/376. 2*

74

39

391. 2/361. 0

51

268. 1/147. 1*

55

40

268. 1/252. 1

46

283. 1/267. 1*

76

47

283. 1/252. 3

60

负离子

326. 9/156. 0*

85

326. 9/170. 9

35

* 定量离子对。

注 : 本附录所列质谱条件仅供参考 , 当采用不同质谱仪器 时 ,仪器 参数 可能 存在 差异 ,测定 前应 将质 谱参 数优 化到最佳。

7

附录 C (资料性)典型图谱

空白黄鱼基质标准溶液多反应监测(MRM)色谱图见图 C. 1。

a) 碱性橙 2(213. 1/77. 1) b) 碱性橙 21(315.2/300. 2)

c) 碱性橙 22(391. 2/376. 2) d) 碱性嫩黄(268. 1/147. 1)

f) 酸性橙 Ⅱ (326. 9/156. 0)

e) 硫黄素 T(283. 1/267. 1)

图 C. 1 空白黄鱼基质标准溶液多反应监测(MRM)色谱图(碱性橙 2 浓度为 2. 0 ng/mL,碱性橙 21、

碱性橙 22、碱性嫩黄、硫黄素 T 浓度均为 1. 0 ng/mL,酸性橙 Ⅱ 为 4. 0 ng/mL)

本方法起草单位 :上海市食品药品检验研究院(潘颖、吕沈亮、陈燕、张泸文)、山东省食品药品检验研究院(刘艳明、张艳侠、赵慧男)。