中 华 人 民 共 和 国 医 药 行 业 标 准
YY/T 0954—2026代替 YY/T 0954—2015
无源外科植入物 Ⅰ 型胶原蛋白植入剂
Nonactive surgical implants—Type Ⅰ collagen implants
2026⁃03⁃09 发布 2027⁃03⁃01 实施
国家药品监督管理局 发 布
前 言
.
草 。
相比
双美
物科技有限公司 、斐缦(长春)医药生物科技有限责任公司 、无锡贝迪生物工程股份有限公司 、福州市大福瑞生物科技有限公司 。
本文件主要起草人：柯林楠 、付步芳 、陈丹丹 、李崇崇 、刘振齐 、林育德 、王书晗 、彭俊 、张其清 、宋磊 、
朱佳珣 、陆金婷 、张瑗 、孙淑娟 。
本文件于 2015 年首次发布，本次为第一次修订 。
引 言
本文件应用于无源外科植入物时 ，除了一级标准中的要求外 ，还针对外科植入物的基本原则提供了相应方法 。
应用于临床使用胶原蛋白植入剂时 ，本文件也提供了验证方法 ，无源外科植入物有三个等级的标准，如下所述(一级为最高)：
一级：无源外科植入物的通用要求;
二级：无源外科植入物的特殊要求;
三级：无源外科植入物的专用要求 。
本文件是三级标准，包含胶原蛋白植入剂的专用要求 。
一级标准(即 YY/T 0640)包含所有适用于无源外科植入物的要求 。这也表明 ，二级标准和三级标准中还另有要求 。
为了满足所有的要求，标准实施应从最低水平开始 。
无源外科植入物 Ⅰ型胶原蛋白植入剂
1 范围
本文件规定了注射型胶原蛋白植入剂(以下简称植入剂)的专用要求 ，它是以组织提取 、纯化后的Ⅰ 型胶原蛋白为原料制备的 。
本文件规定了植入剂技术要求 ，描述了相应的检验方法 。本文件对产品预期性能 、设计属性 、材料 、设计评价 、检验方法 、临床评价 、上市后跟踪 、制造 、包装和由制造商提供的信息作了具体说明 。 同时考虑了植入剂的安全性因素 。
本文件所规定的植入剂适用于在临床用于皮肤的真皮层和/或皮下注射 ，以消除或减轻各种原因引起的皮肤皱纹和凹陷 。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件 。
GB 15811—2016 一次性使用无菌注射针
GB/T 16886(所有部分) 医疗器械生物学评价
GB/T 36988—2018 组织工程用人源组织操作规范指南
GB/T 44353.1 动物源医疗器械 第 1 部分：风险管理应用
GB/T 44353.2 动物源医疗器械 第 2 部分：来源 、收集与处置的控制
YY/T 0513.1—2019 同种异体修复材料 第 1 部分：组织库基本要求
YY/T 0640—2016 无源外科植入物 通用要求
YY/T 0771.3 动物源医疗器械 第 3 部分：病毒和传播性海绵状脑病(TSE)因子去除与灭活的确认
YBB00062004 预灌封注射器用硼硅玻璃针管
YBB00072004 预灌封注射器用氯化丁基橡胶活塞
YBB00082004 预灌封注射器用溴化丁基橡胶活塞
YBB00112004 预灌封注射器组合件(带注射针)
中华人民共和国药典 2025 年版 四部
3 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件 。
3.1
Ⅰ 型胶原蛋白 type Ⅰ collagen
由编码 α 链的 COL1A1 基因和 COL1A2 基因表达的 ，哺乳动物组织中含量最丰富的胶原蛋白 ，属于纤维型胶原蛋白 。
注 1 ：Ⅰ 型胶原蛋白的肽链由重复出现的甘氨酸_X_Y(脯氨酸经常占 X 位 ，羟脯氨酸占据 Y 位)氨基酸序列组成 。
Ⅰ 型胶原蛋白富含甘氨酸(Gly)、L_丙氨酸(L_Ala)、L_脯氨酸(L_Pro)和 4_羟脯氨酸(4_Hypro)，硫含量较低 。
注 2：胶原蛋白具有 3 条α 链形成的三螺旋 。加热情况下(例如60 ℃以上)胶原蛋白 α 链三螺旋结构会不可逆变性成单一的 α 链和某些链和条带(即明胶)。
注 3：常与 Ⅰ 型胶原蛋白伴随的有Ⅲ 型胶原和Ⅴ 型胶原 ，此外还有非胶原类蛋白如弹性蛋白以及其他结构性分子(氨基多糖类 、脂蛋白及糖蛋白复合物等)。
3.2
Ⅰ 型胶原蛋白植入剂 type Ⅰ collagen implant
在无菌条件下，将纯化的 Ⅰ 型胶原蛋白原料均匀分散于缓冲液中配成产品标示浓度的胶原蛋白悬浮液后，充填于预灌封注射器中制成的产品 。
3.3
杂蛋白 protein impurity
在胶原蛋白纯化过程中残留的除 Ⅰ 型胶原蛋白外的其他蛋白质 。
注：主要包括(但不限于)：弹性蛋白 、未正确排列的胶原分子 、宿主细胞污染物 、细胞培养污染物 、酶制剂等 。可能与 Ⅰ 型胶原伴随的Ⅲ型胶原不作为杂蛋白考虑，虽然它的存在可能不会对产品质量产生不利影响，但应评估和控制批次间的一致性 。
3.4
胶原蛋白降解 collagen degradation
胶原蛋白在化学 、物理及生物因素的作用下 ，发生水解和/或酶解反应 ，最终导致胶原蛋白化学键断裂的过程 。
4 预期性能
YY/T 0640—2016 第 4 章的要求适用 。
5 设计属性
YY/T 0640—2016 第 5 章的要求适用 。
为了达到预期性能的要求，设计属性要考虑由于材料降解造成的影响 。
6 材料
6.1 YY/T 0640—2016 第 6 章的要求适用 。
6.2 所采用的胶原蛋白原料应进行有效控制以满足相关质量标准要求 。考虑原料来自动物和/或人体 ，会 产 生 携 带 病 毒 的 风 险 ，应 按 照 GB/T 44353.1、GB/T 44353.2、YY/T 0771.3、YY/T 0513.1— 2019、GB/T 36988—2018 进行管理 。
6.3 预灌封注射器器件及注射针，应评估 GB 15811—2016、YBB00062004、YBB00072004、YBB00082004、 YBB00112004 的适用性，注射器件应逐批检验，合格方可入厂 。
7 设计评价
7.1 设计评价通则
7.1.1 YY/T 0640—2016 第 7 章适用 。
7.1.2 在设计和制造胶原蛋白植入剂的时候，应注意以下问题：
a) 不能危及患者的身体健康及生命安全 、临床状况;
b) 胶原蛋白植入剂用于美容 ，使使用者或患者达到美学和心理效果 ，要考虑使用过程中的杂质所带来的风险或者副作用，应控制这些风险在最低限 。
7.2 临床前评价
7.2.1 临床前评价通则
胶原蛋白植入剂的临床前评价应符合 YY/T 0640—2016 中 7.2 的规定 。
根据试验的要求，所有测试样品应是最终灭菌后的器械或者组分 。
样品数量的选择应符合本文件的要求 。
注：本文件中对临床前评价 、已经验证的测试方法反映了当前的技术发展水平 。
7.2.2 外观
应为白色 、乳白色或微黄色黏稠状液体，无肉眼可见的异物 。
7.2.3 装量
每支装量应不少于标示装量的 93% ，平均装量应不少于标示装量 。
7.2.4 渗透压
植入剂渗透压摩尔浓度应在标示范围内 。
7.2.5 化学特性
7.2.5.1 Ⅰ型胶原蛋白鉴别
经 SDS_聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS_PAGE 法)分析 ，样品的电泳条带与 Ⅰ 型胶原蛋白对照品进行比较，其电泳条带应一致 。
注：交联胶原蛋白植入剂建议评估其适用性 。
7.2.5.2 胶原蛋白含量
应为标示量的 80%~120% 。
7.2.5.3 杂蛋白分析
植入剂中杂蛋白总量应在总蛋白的 1% 以下 。
注 1：当任意一种杂蛋白含量超过 1% 时，进行定性定量分析 。
注 2：交联胶原蛋白植入剂建议评估其适用性 。
7.2.5.4 pH
植入剂 pH 应在 6.0~8 .0 范围内 。
7.2.5.5 重金属总量和微量元素
7.2.5.5.1 重金属总量(以铅计)：
植入剂重金属总量(以铅计)应不大于 10 μg/g(质量分数)。
7.2.5.5.2 微量元素
砷应不大于 1 μg/g(质量分数);铬 、镉 、铜 、铁 、汞 、镍 、铅 、钼总量应不大于 50 μg/g(质量分数)。
7.2.5.6 添加剂
如在生产过程中加入添加剂，如交联剂等，制造商应按照 GB/T 16886.17 的要求，建立并规定有害添加剂许可限量要求及检验方法 。
7.2.6 热变性温度
在规定的升温速率下，植入剂热变性温度应在标示范围内 。
7.2.7 推挤力
在规定的推挤速度下，最大推挤力 、最小推挤力和平均推挤力均应在标称数值范围内 。
7.2.8 生物学性能
7.2.8.1 无菌
Ⅰ 型胶原蛋白植入剂应无菌 。
7.2.8.2 细菌内毒素含量
植入剂浸提液的细菌内毒素含量应小于 0.5 EU/mL 。
7.2.8.3 生物学评价
应按照 GB/T 16886.1 的要求对植入剂进行生物学评价 。
8 试验方法
8.1 外观
按照《中华人民共和国药典》2025 年版
8.2 装量
按照《中华人民共和国药典》2025 年版
8.3 渗透压
按照《中华人民共和国药典》2025 年版8.4 Ⅰ型胶原蛋白鉴别
四部 0904 可见异物检查法规定的方法进行 。
四部 0942 最低装量检查法规定的方法进行 。
四部 0632 渗透压摩尔浓度测定法进行 。
用 3% 的 乙 酸 或 0.01 mol/L 的 盐 酸 将 Ⅰ 型 胶 原 蛋 白 对 照 品 和 样 品 分 别 稀 释 成 胶 原 蛋 白 浓 度 为
1 mg/mL 的溶液 。按照《中华人民共和国药典》2025 年版 四部 0541 电泳法第五法“SDS⁃聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS⁃PAGE 法)”规定的方法进行 ，用 SDS⁃PAGE 法 ，分离胶浓度为 6%~7 .5% ，浓缩胶浓度为 4%~4 .5% ，加样量为 20 μL 。
注 1：若胶原蛋白样品是水溶性的，用超纯水或其他适宜的溶剂来溶解 。
注 2：实验室通过适当调整分离胶和浓缩胶的浓度范围，以保证达到分离效果 。
8.5 胶原蛋白含量
按照附录 A 的方法进行 。
8.6 杂蛋白分析
按照附录 B 的方法进行 。
8.7 pH
按照《中华人民共和国药典》2025 年版 四部 0631 pH 值测定法规定的方法进行 。
8.8 重金属总量和微量元素
8.8.1 重金属总量(以铅计)
按《中华人民共和国药典》2025 年版 四部 0821 重金属检查法第二法进行 。
8.8.2 微量元素
按照附录 C 的方法进行 。
8.9 添加剂
根据使用添加剂的不同，制造商应首先选用《中华人民共和国药典》的方法，如果《中华人民共和国药典》无检验方法或检验方法不适用，所使用的方法应经过验证确保可靠 。
8.10 热变性温度
按照附录 D 的方法进行 。
8.11 推挤力
将产品取出 ，室温平衡 1 h 后检测 ，安装包装内配套的注射针 ，推挤注射器排除前端少量空气 ，然后安装在力学测试设备上 ，测试温度为室温 ，设置推挤速度 ，测试距离设置为满量程 ，按规定方法测试推挤力，记录推挤速度，并记录推挤力曲线平台区的最大推挤力 、最小推挤力和平均推挤力数值 。
8.12 无菌
按照《中华人民共和国药典》2025 年版 四部 1101 无菌检查法规定的方法进行 。
8.13 细菌内毒素含量
样品按照 0.2 g/mL 细菌内毒素检查用水的比例 ，在 37 ℃±1 ℃ , 120 r/min 的条件下浸提 1 h 后 ，浸提液按照《中华人民共和国药典》2025 年版 四部 1143 细菌内毒素检查法规定的方法进行 。
8.14 生物学评价
按照 GB/T 16886(所有部分)进行 。
9 临床评价
YY/T 0640—2016 中 7.3 适用 。
临床评价遵循国家医疗器械临床评价技术指导原则 。 临床评价是为了评估局部并发症发生的频率和概率 。应明确临床评价的认可标准 ，以便为风险/效益评估提供植入物在安全 、性能方面的证据 。应对足够数量的患者进行较长时间的随访记录，准确分析结果，得出植入物的临床数据 。
制造商提供的临床数据应由下面两方面获得：
a) 按照适当的程序，对植入剂植入后产生的疑问，有预期的进行临床研究;
b) 文献 ，以往的临床研究结果或植入剂使用经验的资料(这些植入剂与将要评价的植入剂具有类似设计参数和性能特征)。
采用文献数据或者得到使用其他产品的数据时，应遵循以下准则：
——在关键设计参数和性能特征方面，被评价的产品与其他报告中的产品的等同性要进行论证 。 ——所有的数据应来源于严格的临床试验 、对照试验和病例记录 。 临床数据出自有丰富经验和知
识的专家，并进行了严格的评估 。这些数据应出版在同行综述性杂志中 。单独案例汇总或者来源于缺乏事实根据的观点不能作为临床评价的证据 。
10 上市后跟踪
应符合 YY/T 0640—2016 中 7.4 的规定 。
11 制造
应符合 YY/T 0640—2016 中第 8 章的规定 。
12 包装
应符合 YY/T 0640—2016 中第 10 章的规定 。
13 由制造商提供的信息
13.1 通则
应符合 YY/T 0640—2016 中第 11 章及 13.2~13 .7 的规定 。
13.2 植入剂材料
制造商应给出植入剂材料说明 。
13.3 标称容量
应注明植入剂标称容量 。
13.4 有关预期寿命的信息
制造商应按照预先设计提供器械预期持续效能的相关信息 。这些相关信息包括对植入剂实际寿命有重要影响因素的指征 。
注：实际上，不可能精确预知植入剂的实际寿命，这种预测仅仅是设计要求 。
13.5 告知患者的信息
一份关于要求医生保证能够向患者提供以下描述的最少信息的声明;以下信息应该在手术前由使用者告知患者，一些相关告知的内容还应该在手术后以适当的方式提供(例如填写在患者卡上)：
a) 产品名称或商品名，制造商地址;
b) 植入剂的描述，包括类型 、主要的化学成分;
c) 追溯用的制造商识别卡(例如序列号和/或批号)等;
d) 实际注射量;
e) 预期寿命，按照 13.4 表述;
f) 术 前 警 告“ 注 射 植 入 剂 的 过 程 为 不 可 逆 过 程 ，一 旦 注 射 通 过 任 何 方 法 都 不 可 能 取 出 这 些 植入剂”;
g) 预期效果;
h) 预期风险信息包括所有潜在的局部并发症，例如过敏反应 、炎性反应 、流动或者位移至非预期部位，还应该说明其他潜在的影响健康的全身反应;
i) 副作用，例如疼痛 、感染 、外形不满意(不对称 、移位 、瘢痕)等;
j) 需要向外科医生咨询医疗随访事宜;
k) 提示患者当怀疑有并发症发生的时候应向医生咨询 。
附 录 A
(规范性)
胶原蛋白含量测定
A.1 方法一 氨基酸分析仪法
A.1.1 原理
羟 脯 氨 酸 是 胶 原 蛋 白 中 含 有 的 特 异 性 氨 基 酸 ，且 含 量 比 较 稳 定 。将 试 样 在 110 ℃ 和 c(HCl) = 6 mol/L 盐酸作用下 ，水解成单一氨基酸 ，再用氨基酸分析仪测定样品中羟脯氨酸的含量 ，可计算出样品中胶原蛋白的含量 。
注：羟脯氨酸含量也能使用经过验证的高效液相色谱仪法或紫外-可见分光光度计法进行测试 。
A.1.2 仪器与试剂
A.1.2.1 仪器
A.1.2.1.1 天平 。
A.1.2.1.2 氨基酸分析仪 。
A.1.2.1.3 旋转蒸发仪或浓缩器 。
A.1.2.1.4 恒温箱或水解炉 。
A.1.2.2 试剂
A.1.2.2.1 L一羟脯氨酸对照品：国家标准品 。
A.1.2.2.2 盐酸溶液，c(HCl)= 6 mol/L：将优级纯盐酸与水等体积混合 。
A.1.2.2.3 洗脱用柠檬酸钠缓冲液：按仪器使用说明书配制 。
A.1.2.2.4 茚三酮溶液：按仪器使用说明书配制 。
A.1.3 L一羟脯氨酸对照品溶液制备
A.1.3.1 L一羟脯氨酸对照品储备液：取 L一羟脯氨酸对照品适量于 100 mL 容量瓶中 ，精密称定 ，加水溶解并稀释至刻度 。
A.1.3.2 L一羟脯氨酸对照品溶液：精密量取 L一羟脯氨酸对照品储备液，加水稀释至刻度 。
A.1.4 样品制备
取样品适量置于水解管中 ，精密称定 ，加入 6 mol/L HCl 适量 ，充氮封管 。110 ℃水解 22 h~24 h，冷却 ，置旋转蒸发仪瓶或浓缩器中 ，60 ℃减压蒸发至干 。用水洗涤蒸发瓶 ，转移洗涤液至容量瓶中 ，加水定容至刻度，制得供试液 。供试液与对照品溶液中 L一羟脯氨酸浓度相对偏差应在±10% 内 。
A.1.5 测定
对照品溶液 、供试液用 0.2 μm 的膜过滤后 ，分别注入氨基酸分析仪进行测定 。记录对照品溶液 、供试液中羟脯氨酸的峰面积 。
A.1.6 结果与计算
样品中胶原蛋白含量按式(A .1)进行计算 。
X = C st n × k …………………………( A .1 )
式中：
X ——样品中胶原蛋白含量，单位为毫克每毫升(mg/mL);
C st ——对照品中 L⁃羟脯氨酸的质量浓度，单位为毫克每毫升(mg/mL);
A sa ——供试液中羟脯氨酸的峰面积;
A st ——对照品溶液中羟脯氨酸的峰面积;
n ——样品稀释倍数;
k ——换算系数，由制造商提供经验证的数据 。
注：本方法为仲裁法
A.2 方法二 天狼星红染色法
A.2.1 原理
天狼星红与胶原蛋白特异性结合 ，经氢氧化钠溶液洗脱 、离心后获得红色复合物 ，在 540 nm 波长条件下测定吸光度，确定样品中胶原蛋白含量 。
A.2.2 仪器与试剂
A.2.2.1 仪器
A.2.2.1.1 分光光度计或酶标仪 。
A.2.2.1.2 离心机 。
A.2.2.2 试剂
天狼星红胶原蛋白测定试剂盒(包括含有天狼星红的苦味酸溶液的染色剂;0.5 mol/L 的氢氧化钠碱性反应试剂 ;溶解在 0.5 mol/L 的醋酸溶液中的质量浓度为 1 mg/mL 的胶原蛋白标准品)。 以上试剂也可自行配制 。
A.2.3 测定
按照试剂盒操作说明书制备胶原蛋白标准品系列溶液 、供试液后，分别对它们进行测定，绘制胶原蛋白标准品吸光度值⁃浓度标准曲线，根据标准曲线求得样品中胶原蛋白含量 。
附 录 B (规范性)杂蛋白分析
B.1 原理
利用胶原蛋白具有其他蛋白质所没有的三股螺旋结构 ，配合特异性的胶原蛋白酶作用 ，通过考马斯亮蓝对牛血清白蛋白(BSA)染色极限的确定，检测胶原蛋白样品中所含杂蛋白总量 。
B.2 仪器与试剂
B.2.1 仪器
B.2.1.1 天平 。
B.2.1.2 电泳仪 。
B.2.1.3 垂直板电泳槽和制胶模具 。
B.2.1.4 影像分析系统 。
B.2.2 试剂
B.2.2.1 胶原酶 。
B.2.2.2 牛血清白蛋白(BSA)。
B.2.2.3 十二烷基硫酸钠(SDS)。
B.2.2.4 三羟甲基氨基甲烷(Tris)。
B.3 溶液配制
B.3.1 胶原酶消化液配制：使用胶原酶说明书推荐的溶剂溶解配制胶原酶溶液 ，例如 ，用 20 mmol /L NaH2PO4 溶 液(pH 7.4，内 含 0.1 mmol /L CaCl2)溶 解 胶 原 酶 ，配 成 含 适 当 活 性 单 位 的 胶 原 酶 消 化 液(例如 1.25 UI)。
B.3.2 样品缓冲液配制：分别量取 0.5 mol /L Tris⁃HCl 2.5 mL、甘油 2.0 mL、10%SDS 4.0 mL、0.1%溴酚蓝 0.5 mL，超纯水定容至 10 mL。
B.3.3 电泳缓冲液配制：分别称取 Tris 15.1 g、甘氨酸 72.0 g、SDS 5.0 g，溶于超纯水中，定容至 1 000 mL，使用前稀释 5 倍 。
B.3.4 考马斯亮蓝染色液配制：称取考马斯亮蓝 R250 1 g，加入甲醇 200 mL、冰乙酸 50 mL、水 250 mL，混匀 。
B.3.5 考马斯亮蓝脱色液配制：取甲醇 400 mL、冰乙酸 100 mL 与水 500 mL，混匀 。
B.3.6 分离胶浓度：6%~7.5%。
B.3.7 浓缩胶浓度：4%~4.5%。
B.4 测定
B.4.1 考马斯亮蓝对 BSA 的染色极限分析
B.4.1.1 BSA 溶液配制：用超纯水将 BSA 稀释成梯度浓度溶液 。
B.4.1.2 SDS⁃PAGE 分析：取各浓度 BSA 溶液 20 μL 上样 。上样完毕后把电泳槽的电极接入电泳仪中，调好电压，开始电泳 。观察溴酚蓝的蓝线下降到电泳槽的金属丝以下时，停止电泳 。取下胶片加入
适量的考马斯亮蓝染色液 ，晃染 2 h 或过夜 ，之后以脱色液进行晃动脱色至凝胶底色几乎无色 ，其间更换 2 次去离子水，用影像分析系统对脱色后的胶片进行分析，确定考马斯亮蓝对 BSA 的染色极限 。
B.4.2 样品中杂蛋白分析
B.4.2.1 样品 A：用 3% 的乙酸或 0.01 mol/L 的盐酸溶解样品，使胶原蛋白的质量浓度为 1 mg/mL 。
注：若胶原蛋白样品是水溶性的，可用超纯水作为溶剂来溶解 。
B.4.2.2 样品 B：用胶原蛋白酶消化液溶解样品 ，使胶原蛋白的质量浓度为 1 mg/mL(与样品 A 中胶原蛋白的浓度相同)，于 37 ℃水浴作用 4 h。
B.4.2.3 样品 C：取超纯水加胶原蛋白酶消化液，使胶原蛋白酶的浓度与样品 B 中的浓度相同 。
B.4.2.4 上样分析：将上述样品与样品缓冲液等体积混合(若溶液变成微黄色 ，需用 1 mol/L NaOH 调成蓝色)后，置于 100 ℃水浴中 3 min 取出进行 SDS_PAGE 电泳 。样品和 BSA(取染色极限量)上样体积均为 20μL 。上样完毕后按 B .4.1.2 进行电泳 、染色和脱色 。脱色后的胶片即可用影像分析系统进行扫描分析 。
B.5 结果计算
B.5.1 杂蛋白总量计算
B.5.1.1 当 VB -VC≤VL 时，按式(B .1)计算：
X …………………………( B .1 )
式中：
X ——样品中杂蛋白总量，% ;
C0 ——BSA 染色极限，单位为微克 (μg);
Csam ——样品上样浓度，单位为微克每微升 (μg/μL)[即毫克每毫升(mg/mL)];
20 ——样品上样体积，单位为微升 (μL)。
B.5.1.2 当 VB -VC>VL 时，按式(B .2)计算：
X )
式中：
X ——样品中杂蛋白总量，% ;
VB ——样品 B 所有条带的光密度之和;
VC ——样品 C 所有条带的光密度之和;
C0 ——BSA 染色极限，单位为微克 (μg);
VL ——BSA 染色极限的光密度;
Csam ——样品上样浓度，单位为微克每微升 (μg/μL)[即毫克每毫升(mg/mL)];
20 ——样品上样体积，单位为微升 (μL)。
B.5.2 胶原蛋白纯度按式(B .3)计算：
P =100% - X ………………………………( B .3 )式中：
P ——胶原蛋白纯度，% ;
X ——样品中杂蛋白总量，% 。
附 录 C (规范性)
微量元素分析
C.1 原理
样品经硝酸消化，制成供试品溶液，用原子吸收分光光度计 、电感耦合等离子体原子发射光谱或电感耦合等离子体质谱测定铬 、镉 、铜 、铁 、镍 、铅 、钼 、砷 、汞的含量 。
C.2 试剂
硝酸：优级纯 。
C.3 标准溶液配制
C.3.1 混合标准工作液
铬 、镉 、铜 、铁 、镍 、铅 、钼 、砷 、汞采用经国家认证并授予标准物质证书的单元素或多元素标准溶液，用体积分数 1% 的硝酸溶液稀释配制 1 mg/mL 储备液 。 临用前用体积分数 1% 的硝酸溶液逐级配成所需的浓度混合标准工作液系列 。
C.3.2 内标使用液
采 用 经 国 家 认 证 并 授 予 标 准 物 质 证 书 的 元 素 标 准 溶 液 ，用 体 积 分 数 1% 的 硝 酸 溶 液 稀 释 配 制1 mg/mL 内标标准储备液 。临用前用体积分数 1% 的硝酸溶液配制合适浓度的内标使用液 。
注：内标的选择考虑以下因素：待测样品中不含有该元素;与待测元素质量数接近;电离能与待测元素接近 。
C.4 供试液制备
取样品适量精密称定，至烧杯中，加 10 mL 硝酸，在电热板上加热至溶液澄清，控制温度，敞口排酸至近干，加体积分数为 1% 的硝酸溶液适量，加热至近沸，放冷，将溶液转移至容量瓶中，用体积分数为1% 的硝酸溶液洗涤烧杯数次，将洗涤液并入容量瓶中，用体积分数为 1% 的硝酸溶液稀释至刻度 。
C.5 测定
C.5.1 原子吸收分光光度法
取 C .3.1 制备的混合标准工作溶液 、C .4 制备的供试液，按《中华人民共和国药典》2025 年版 四部0406 原子吸收分光光度法规定的方法进行 。
C.5.2 电感耦合等离子体原子发射光谱法
取 C .3.1 制备的混合标准工作溶液 、C .4 制备的供试液，按《中华人民共和国药典》2025 年版 四部0411 电感耦合等离子体原子发射光谱法规定的方法进行 。
C.5.3 电感耦合等离子体质谱法测定
取 C .3.1 制备的混合标准工作液 、C .3.2 制备的内标使用液及 C .4 制备的供试液 ，按《中华人民共和国药典》2025 年版 四部 0412 电感耦合等离子体质谱法规定的方法进行 。
附 录 D
(规范性)
热变性温度测定
D.1 原理
胶原蛋白的三股螺旋结构是由三条多肽链通过氢键来维持的 ，氢键受热会被破坏 ，氢键的多少直接反应在热变性温度上，测定胶原蛋白的热变性温度，可作为胶原蛋白的结构表征 。
D.2 仪器
差示扫描量热仪(DSC)。
D.3 测定
将样品直接放入测试铝盘中 ，按《中华人民共和国药典》2025 年版 四部 0661 热分析法中差示扫描量热法进行，设定好升温速率和温度范围，进行扫描，记录样品的吸收峰值对应的温度值 。
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