T/CVMA 250-2025 猪伪狂犬病毒gE抗体竞争磁微粒化学发光检测方法 ,该文件为pdf格式 ,请用户放心下载!
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资源简介
《猪伪狂犬病毒gE抗体竞争磁微粒化学发光检测方法》（T/CVMA 250-2025）主要内容总结
1. 标准概述
- 标准编号：T/CVMA 250-2025
- 归口单位：中国兽医协会
- 适用范围：检测猪血清中伪狂犬病毒（PRV）gE抗体，用于疫病诊断和免疫监测。
- 技术原理：基于竞争法磁微粒化学发光技术，通过生物素标记抗原、吖啶酯（AE）标记抗体与待检血清竞争结合，发光强度与抗体含量成反比。
2. 规范性引用文件
- 包括GB/T 1.1-2020（标准起草规则）、GB/T 6682（实验室用水）、GB/T 18641（伪狂犬病诊断方法）、NY/T 541（兽医样品采集规范）等。
3. 关键试剂与耗材
- 核心试剂：
- 磁微粒工作液：链霉亲和素偶联磁珠。
- 抗原工作液：生物素标记的PRV-gE重组蛋白。
- AE抗体工作液：吖啶酯标记的PRV-gE单抗。
- 校准品：6个梯度（3.125~6400 U），其中100 U和1600 U兼作产品校准品。
- 质控品：阴性（≤50 U）和阳性（280~520 U）对照。
- 其他：化学发光底物、洗液、离心管等。
4. 检测流程
- 样本处理：
- 采集静脉血，析出血清后离心去除杂质，-20℃保存（运输需2~8℃冷藏）。
- 试剂准备：
- 稀释洗液，装载磁微粒、抗原、抗体工作液至全自动化学发光仪。
- 免疫反应：
- 混合样本、磁微粒、抗原和抗体工作液，37℃孵育15分钟。
- 清洗与检测：
- 磁分离清洗后加入发光底物，检测相对光单位（RLU）。
5. 结果计算与判定
- 标准曲线拟合：用6个校准品RLU值拟合四参数曲线（R²≥0.99）。
- 质控要求：质控品结果需在预设范围内（阴性≤50 U，阳性280~520 U）。
- 阴阳性判定：
- 阳性：抗体含量≥10 U；
- 阴性：<10 U。
6. 附录内容
- 附录A（试剂配制）：详细配方如20×洗液（含磷酸盐、NaCl、吐温-20）、校准品稀释液（含BSA）、PBS等。
- 附录B（工作液制备）：
- 磁微粒：链霉亲和素磁珠稀释40倍。
- 抗原：生物素标记PRV-gE蛋白。
- 抗体：吖啶酯标记PRV-gE单抗。
- 附录C（校准品制备）：
- 通过PRV-gE高免血清（抗体滴度≥1:4096）梯度稀释，ELISA法标定单位（10 U=阳性最大稀释滴度）。
- 附录D（质控品制备）：稀释高免血清至12.5 U和400 U，经5次检测确定质控范围。
7. 其他关键信息
- 专利声明：标准可能涉及专利，发布机构不承担识别责任。
- 起草单位：天津测易生物科技、内蒙古/辽宁/山东等省级动物疫控中心。
- 有效期：校准品和质控品-20℃保存可稳定36个月。
总结
该标准详细规范了PRV-gE抗体的磁微粒化学发光检测方法，涵盖试剂制备、操作步骤、结果判定及质量控制，适用于猪伪狂犬病的血清学诊断，具有高灵敏度和自动化优势。
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