SC/T 3064-2025 海藻及其制品中L-岩藻糖的测定 液相色谱法

水产行业标准 SC/T 3064-2025

《海藻及其制品中L-岩藻糖的测定液相色谱法》主要内容总结

​一、适用范围​

1. ​样品类型​：鲜海藻、盐渍海藻、干海藻及岩藻多糖。
2. ​检测目标​：L-岩藻糖含量，通过液相色谱法测定。

​二、原理​

1. ​水解​：样品中岩藻多糖在酸性条件（1 mol/L硫酸）下110℃水解2小时，生成游离L-岩藻糖。
2. ​衍生化​：水解液经1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）衍生化，生成具有紫外吸收的衍生物。
3. ​检测​：采用液相色谱-紫外检测器（250 nm）或二极管阵列检测器，外标法定量。

​三、试剂与材料​

1. ​关键试剂​：
   • 色谱纯甲醇、乙腈；
   • 1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）、L-岩藻糖标准品（≥98%）；
   • 硫酸、氢氧化钠、磷酸二氢钾等缓冲液。
2. ​溶液配制​：
   • 1 mol/L硫酸溶液、0.1 mol/L磷酸二氢钾缓冲液（pH 6.8-7.0）；
   • 0.5 mol/L PMP-甲醇溶液（现配现用）；
   • 标准储备液（1.0 mg/mL）及中间液（100 μg/mL）。

​四、仪器设备​

1. ​液相色谱仪​：配备C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）、紫外检测器。
2. ​辅助设备​：分析天平（0.01 mg精度）、涡旋混合器、恒温水浴锅、离心机（≥4000 r/min）。
3. ​耗材​：具塞消化管（耐压玻璃试管）、0.22 μm针式滤器。

​五、样品前处理​

1. ​鲜海藻/盐渍海藻​：
   • 称取1-2 g样品，加5 mL硫酸溶液水解，中和后定容至25 mL。
2. ​干海藻/岩藻多糖​：
   • 称取0.1 g（干海藻）或0.02 g（岩藻多糖），加2 mL硫酸溶液水解，中和后定容。
3. ​保存条件​：鲜样-18℃保存，干样常温干燥保存。

​六、衍生化步骤​

1. ​反应体系​：取1 mL水解液，加入NaOH和PMP-甲醇溶液，70℃反应70分钟。
2. ​萃取净化​：冰乙酸中和后，用三氯甲烷萃取3次，水相经0.22 μm滤膜过滤。

​七、液相色谱条件​

1. ​色谱柱​：C18柱，40℃柱温，流速1.0 mL/min。
2. ​流动相​：50 mmol/L磷酸二氢钾缓冲液（pH 6.8-7.0）:乙腈=65:35（等度洗脱）。
3. ​检测波长​：250 nm，进样量20 μL。

​八、定量分析​

1. ​标准曲线​：配制10-500 μg/mL系列标准溶液，衍生化后进样，以峰面积-浓度绘制曲线。
2. ​计算​： X=C×V×fm×104X = \frac{C \times V \times f}{m \times 10^4}X=m×104C×V×f​
   • XXX：L-岩藻糖含量（g/100 g）；
   • CCC：试液浓度（μg/mL）；VVV：定容体积（mL）；fff：稀释倍数；mmm：样品质量（g）。

​九、方法性能​

1. ​灵敏度​：
   • 鲜/盐渍海藻：检出限0.025 g/100 g，定量限0.100 g/100 g；
   • 干海藻：检出限0.250 g/100 g，定量限1.00 g/100 g；
   • 岩藻多糖：检出限0.025 g/100 g，定量限0.100 g/100 g。
2. ​精密度​：平行测定结果绝对差值≤10%。

​十、附录与图谱​

1. ​附录A​：提供L-岩藻糖标准品及典型样品的液相色谱图（图A.1、A.2），用于保留时间对照。
2. ​安全提示​：涉及强酸、强碱及有机溶剂操作需防护，实验废弃物按规范处理。

​关键注意事项​

• ​衍生化条件​：PMP需现配现用，严格控制反应温度和时间。
• ​pH调节​：水解液中和至pH 4.5-9.0，衍生后萃取需彻底去除三氯甲烷残留。
• ​色谱维护​：流动相需过滤脱气，避免色谱柱堵塞或基线漂移。

此标准首次发布，适用于海藻制品中L-岩藻糖的精确测定，为质量控制及市场监管提供技术依据。