SC/T 7243-2025 对虾玻璃苗弧菌病诊断方法 ,该文件为pdf格式 ,请用户放心下载!
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资源简介
对虾玻璃苗弧菌病诊断方法总结（SC/T 7243-2025）
一、范围与适用性
- 适用范围：针对致玻璃苗弧菌（Vibrio spp. causing TPV）引起的对虾玻璃苗弧菌病（TPV），适用于流行病学调查、诊断、检疫及监测。
- 适用对象：凡纳对虾、中国对虾、斑节对虾等易感品种的仔虾（P5～P7阶段）。
二、规范性引用文件
- 包括GB/T 1.1-2020、GB 4789.7（副溶血性弧菌检验）、SC/T 7103-2008（采样技术）等，需结合使用。
三、术语与定义
- TPV：由携带沙门氏菌质粒毒力基因（SpvB）和艰难梭菌杀虫毒素B基因（TcdB）的弧菌引起的细菌性疫病。
- 玻璃苗：仔虾因肝胰腺坏死导致体色通透、半透明的临床症状。
四、临床症状
- 典型症状：
- 空肠空胃，肝胰腺颜色变淡。
- 仔虾从头胸甲至腹节体色透明（见图B.1）。
- 发病急，3天内死亡率可达90%以上。
五、样品采集与处理
- 采样对象：优先选择濒死虾或具典型症状个体。
- 采样要求：
- 组织病理学检测：取肝胰腺和中肠组织，4%多聚甲醛（PFA）固定后转70%乙醇保存。
- qPCR检测：取肝胰腺、胃、中肠等组织，保存于-20℃或95%乙醇。
- 细菌分离：按GB 4789.7进行副溶血性弧菌培养。
六、组织病理学检测
- 流程：固定→脱水→透明→浸蜡→包埋→切片（3μm）→染色（HE法）→封片→观察。
- 病理特征：
- 早期：肝胰腺B细胞出现细菌定殖，中肠上皮部分脱落。
- 中期：细菌侵染F细胞和R细胞，肝胰腺上皮脱落，中肠细胞圆化。
- 后期：肝胰腺小管上皮大量脱落，血细胞浸润；中肠基底膜塌陷（图B.2～B.7）。
七、荧光定量PCR检测
- 检测靶基因：SpvB和TcdB基因（双通道检测）。
- 引物与探针：
- SpvB通道：FAM标记探针（FAM-TAMRA）。
- TcdB通道：VIC标记探针（VIC-BHQ1）。
- 判定标准：
- 阳性：Ct值≤35，且扩增曲线呈“S”形。
- 可疑：35<Ct<40需复检。
- 阴性：Ct≥40或无扩增。
八、综合判定
- 疑似病例（满足以下任一条）：
- 临床症状符合TPV。
- 组织病理学显示典型病变。
- qPCR检测阳性。
- 确诊病例：临床症状/病理学异常 + qPCR阳性。
- 阴性病例：无临床症状、病理学阴性 + qPCR阴性。
九、病原与流行病学
- 病原特征：
- 弧菌属（如副溶血弧菌、溶藻弧菌）携带187kbp毒力质粒，含SpvB和TcdB基因。
- 质粒可水平转移，对抗生素耐药性强。
- 传播：水平传播为主，标粗、淡化环节高发。
十、附录关键内容
- 试剂配方：固定液、染色液、乙醇梯度等详细配制方法（附录A）。
- 病理学图谱：感染各阶段肝胰腺和中肠的显微图像（图B.2～B.7）。
- 易感宿主：凡纳对虾、斑节对虾、中国对虾等。
十一、实施信息
- 发布日期：2025年1月9日。
- 实施日期：2025年5月1日。
- 归口单位：全国水产标准化技术委员会水产养殖病害防治分技术委员会。
注：本标准为对虾育苗及养殖中TPV的诊断提供了标准化流程，结合临床症状、组织病理学和分子检测技术，确保诊断的准确性与时效性。
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