SC/T 7245-2025 细菌性肾病诊断方法 ,该文件为pdf格式 ,请用户放心下载!
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资源简介
水产行业标准 SC/T 7245-2025《细菌性肾病诊断方法》主要内容总结
1. 范围与适用性
- 适用范围：针对鲑肾杆菌（Renibacterium salmoninarum）引起的鲑科鱼类细菌性肾病（BKD），涵盖流行病学调查、诊断、检疫和监测。
- 适用对象：包括虹鳟、大麻哈鱼等鲑科鱼类，尤其关注养殖环境中的病例。
2. 规范性引用文件
- SC/T 7011.1：定义水生动物疾病术语。
- SC/T 7103：规定水生动物采样技术，用于无临床症状鱼的采样数量确定。
3. 术语与缩略语
- BKD：细菌性肾病（Bacterial Kidney Disease），由鲑肾杆菌感染导致。
- 关键缩略语：如PCR、DNA、CTAB等实验相关术语。
4. 诊断方法概述
诊断分为三部分：
- 临床症状观察：体色发黑、眼球突出，解剖可见肾脏、肝脏或脾脏的白色肉芽肿（直径2-4mm）。
- 组织印片检查：通过革兰氏染色镜检，观察革兰氏阳性短杆菌（形态一致，常成对或短链）。
- 套式PCR检测：分两轮扩增目标基因片段（第一轮383bp，第二轮320bp），结合测序验证。
5. 样品采集与处理
- 采样对象：鲑科鱼类，按体长分三类采集：
- ≥6cm：取肾脏、肝、脾脏。
- 4-6cm：取所有内脏。
- ≤4cm：整鱼（去卵黄囊）。
- 保存与运输：鲜活样品需立即检测；冰鲜或冷冻样品需低温运输。
6. 组织印片检查步骤
- 制片：取病变组织断面轻印于载玻片。
- 染色：革兰氏染色（结晶紫-碘液-乙醇脱色-番红复染）。
- 镜检：油镜下观察，若发现大量革兰氏阳性小杆菌，判为疑似BKD。
7. 套式PCR检测流程
- DNA提取：
- 使用CTAB法裂解组织，乙醇沉淀DNA。
- 需设置阳性、阴性和空白对照。
- PCR扩增：
- 第一轮：引物F1/R1扩增383bp片段。
- 第二轮：若第一轮无产物，用F2/R2扩增320bp片段（模板需稀释）。
- 电泳分析：1-2%琼脂糖凝胶电泳，观察目标条带。
- 测序验证：阳性产物需测序，与参考序列一致性＞98%确认。
8. 结果判定标准
- 疑似病例：符合以下任一条件：
- 典型临床症状；
- 组织印片阳性；
- PCR阳性（任一阶段）。
- 确诊病例：PCR阳性且符合临床症状或组织印片阳性。
- 阴性判定：无临床症状且PCR阴性。
9. 试剂与仪器
- 关键试剂：CTAB溶液、革兰氏染色液、PCR引物（F1/R1、F2/R2）。
- 仪器设备：PCR仪、电泳系统、高速离心机、显微镜等。
10. 附录内容
- 试剂配制：详细步骤如CTAB溶液、电泳缓冲液等。
- 疾病背景：BKD的病原特征、流行特点（低温易发、垂直传播）、地理分布（全球性，我国2015年首次报道）。
- PCR扩增序列：提供靶基因片段及引物位置信息。
11. 质量控制
- 对照设置：实验需包含阳性、阴性及空白对照，确保检测有效性。
- 重复性与灵敏度：套式PCR设计提高检测灵敏度，减少假阴性。
总结：该标准系统规范了BKD的诊断流程，结合临床症状、病原镜检和分子检测，确保结果的准确性，适用于水产养殖病害防控和检疫工作。
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