SN/T 5648-2024 动物源食品中苯并烯氟菌唑残留量的测定 液相色谱-质谱质谱法

ICS67.050
CCS C53
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN/T5648—2024
动物源食品中苯并烯氟菌唑残留量的测定
液相色谱-质谱/质谱法
Determination of benzovindiflupyr foodstuffs of animal-origin—
LC-MS/MS method
2024-12-31发布2025-07-01实施
中华人民共和国海关总署发布

前 言
本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定
起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。
本文件起草单位:中华人民共和国广州海关、中华人民共和国杭州海关。
本文件主要起草人:李菊、王岚、陈捷、吴舒悦、谢文、席静、黎天勇、陈文锐、李敏青、陈姿竹。
Ⅰ
SN/T5648—2024

动物源食品中苯并烯氟菌唑残留量的测定
液相色谱-质谱/质谱法
1 范围
本文件规定了动物源食品中苯并烯氟菌唑残留量测定的液相色谱-质谱/质谱法。
本文件适用于牛肉、鸡肉、罗非鱼、鸡肝、鸡蛋、蜂蜜、牛奶、猪脂肪、猪肠衣、蜂王浆和蜂胶等动物源
食品中苯并烯氟菌唑残留量的测定。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文
件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于
本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4 方法提要
试样中的苯并烯氟菌唑用酸性乙腈(蜂胶用乙腈)提取,经固相萃取柱净化,采用液相色谱-质谱/质
谱仪测定,外标法定量。
5 试剂和材料
除非另有规定,仅使用分析纯试剂,试验用水应符合GB/T 6682中规定的一级水。
5.1 乙腈:色谱纯。
5.2 甲醇:色谱纯。
5.3 乙酸:色谱纯。
5.4 甲酸:色谱纯。
5.5 氢氧化钙。
5.6 甲酸铵:优级纯。
5.7 无水硫酸镁。
5.8 氯化钠。
5.9 柠檬酸钠二水合物(C6H5Na3O7·2H2O)。
5.10 柠檬酸二钠-盐倍半水合物(C6H6Na2O7·1.5H2O)。
5.11 1%酸性乙腈溶液:吸取1 mL乙酸(5.3),加乙腈(5.1)稀释至100 mL,混匀。
5.12 0.5%氢氧化钙溶液:称取5 g氢氧化钙(5.5),用水充分溶解后稀释至1 000 mL,过滤取滤液,现
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配现用。
5.13 5 mmol/L甲酸铵-0.1%甲酸水溶液:准确称取0.314 5 g甲酸铵(5.6)于小烧杯中,加少量水溶
解并转移至1 000 mL容量瓶中,准确加入1 mL甲酸(5.4),用水稀释至刻度,混匀。
5.14 苯并烯氟菌唑:C18H15C12F2N3O,CAS号1072957-71-1,纯度≥98%。
5.15 标准储备溶液(1 000 mg/L):准确称取10 mg苯并烯氟菌唑(5.14)于小烧杯中,加少量乙腈(5.
1)溶解,移入10 mL容量瓶中,用乙腈定容至刻度,摇匀,-18 ℃避光保存,有效期为6个月。
5.16 标准中间溶液(100.0 mg/L):吸取1 mL标准储备溶液(5.15)于10 mL容量瓶中,用乙腈(5.1)
定容至刻度,摇匀,-18 ℃避光保存,有效期为1个月。
5.17 基质标准工作溶液:准确量取适量标准中间溶液(5.16),用空白基质提取液稀释成1.0 μg/L、
2.0 μg/L、5.0 μg/L、10.0 μg/L、20.0 μg/L、50.0 μg/L和100.0 μg/L的系列浓度基质标准工作溶液,
现配现用。
5.18 去磷脂PPR固相萃取柱:200 mg,3 mL,或相当者。
5.19 滤膜:0.22 μm,有机相。
6 仪器和设备
6.1 液相色谱-质谱/质谱仪:配有电喷雾离子源(ESI)。
6.2 电子天平:感量为0.01 g和0.1 mg。
6.3 组织捣碎机。
6.4 均质器。
6.5 涡旋混合器。
6.6 网筛:0.425 mm。
6.7 冷冻高速离心机:转速≥10 000 r/min。
6.8 超声清洗仪。
6.9 摇床。
7 试样的制备与保存
7.1 在制样的操作过程中,应防止样品污染或发生残留量含量的变化。
7.2 牛肉、鸡肉、罗非鱼、猪脂肪、鸡肝、鸡蛋、肠衣:取有代表性样约500 g,用组织捣碎机捣碎,装入洁
净容器作为试样,密封并做好标识,于-18 ℃下保存。
7.3 牛奶、蜂蜜和蜂王浆:取有代表性样约500 g,混合均匀,装入洁净容器作为试样,密封并做好标识,
于4 ℃ 下保存。
7.4 蜂胶:取有代表性样品500 g,-20 ℃冷冻后经组织捣碎机捣碎,充分混匀,过网筛后装入洁净容
器中。密封并做好标记,于4 ℃下保存。
8 测定步骤
8.1 提取
8.1.1 牛肉、鸡肉、罗非鱼
准确称取5 g试样(精确至0.01 g)置于50 mL离心管中,加入10 mL 1%酸性乙腈溶液(5.11)后
置均质器中10 000 r/min下均质15 s。另取一洁净50 mL离心管,加入10 mL 1%酸性乙腈溶液,清洗
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均质器刀头10 s,洗涤液合并至前一离心管中,涡旋混合20 s后加入 4 g 无水硫酸镁(5.7)、1 g 氯化钠
(5.8)、1 g 柠檬酸钠二水合物(5.9)和0.5 g 柠檬酸二钠-盐倍半水合物(5.10),迅速手摇混匀后置摇床
振荡提取10 min,4 000 r/min下离心5 min。吸取上清液待净化。
8.1.2 鸡肝、猪脂肪、牛奶、猪肠衣
准确称取5 g试样(精确至0.01 g)置于50 mL离心管中,加入10 mL 1%酸性乙腈溶液(5.11),涡
旋混匀1 min后加4 g 无水硫酸镁(5.7)、1 g 氯化钠(5.8)、1 g 柠檬酸钠二水合物(5.9)和0.5 g 柠檬
酸二钠-盐倍半水合物(5.10),迅速手摇混匀后置摇床振荡提取10 min,4 000 r/min下离心5 min。吸
取上清液待净化。
8.1.3 蜂蜜、蜂王浆、鸡蛋
准确称取蜂蜜、蜂王浆2 g、鸡蛋5 g(精确至0.01 g)置于50 mL离心管中,加5 mL水,涡旋混匀
1 min,加入10 mL 1%酸性乙腈溶液(5.11),涡旋混匀1 min,再加2 g~3 g的氯化钠(5.8),迅速手摇
混匀后置摇床振摇提取10 min,4 000 r/min下离心5 min。吸取上清液待净化。
8.1.4 蜂胶
准确称取0.2 g试样(精确至0.001 g)置于50 mL 离心管中,加入10 mL 乙腈(5.1)涡旋混匀
1 min,置超声仪提取10 min,加入10 mL 0.5%氢氧化钙溶液(5.12),涡旋混匀2 min后再加4 g~6 g
氯化钠(5.8),涡旋混匀2 min,0 ℃条件10 000 r/min下离心10 min。吸取上清液待净化。
8.2 净化
8.2.1 牛肉、鸡肉、罗非鱼、猪脂肪、蜂蜜、蜂王浆、牛奶、猪肠衣、鸡蛋
吸取上清液2 mL(脂肪提取液-18 ℃冷冻1 h后吸取2 mL)至去磷脂小柱(5.18)内,过柱,收集流
出液至收集管中,涡旋混匀后过0.22 μm 滤膜(5.19),装瓶,供LC-MS/MS测定。
8.2.2 鸡肝
吸取上清液2 mL至去磷脂小柱(5.18)内,过柱,收集流出液至收集管中,涡旋混匀后取1 mL流出
液至一洁净小试管内,加入1 mL水涡旋混合,过0.22 μm 滤膜(5.19),装瓶,供LC-MS/MS测定。
8.2.3 蜂胶
吸取上清液2 mL至去磷脂小柱(5.18)内,过柱,收集全部流出液至收集管中,45 ℃氮吹近干后立
即加入1 mL乙腈定容,涡旋混匀后过0.22 μm 滤膜(5.19),装瓶,供LC-MS/MS测定。
8.3 空白基质提取液
取经测定不含被测组分的试样按8.1和8.2操作,获得空白基质提取液。
8.4 测定
8.4.1 液相色谱条件
由于测试结果取决于所使用的仪器,因此不可能给出液相色谱分析的通用参数。设定的参数应保
证色谱分析时被测组分与其他组分能得到有效的分离,下列给出的参数可供参考。
液相色谱参考条件如下:
a) 色谱柱:C18 柱,150 mm ×2.1 mm(内径),粒度2.6 μm 或性能相当者;
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b) 流动相:A:甲醇,B:5 mmoL甲酸铵-0.1%甲酸水溶液,梯度洗脱程序见表1;
c) 流速:0.3 mL/min;
d) 进样量:2 μL;
e) 柱温:45 ℃。
表1 梯度洗脱程序
时间/min 流动相A/% 流动相B/%
0 20 80
5 90 10
8 90 10
9 20 80
10 20 80
8.4.2 质谱条件1)
1) 非商业性声明:8.4.2所列参考质谱条件是在 Thermo Quantiva型液质联用仪上完成的,此处列出试验用仪器
型号仅为提供参考,并不涉及商业目的,鼓励标准使用者尝试不同厂家或型号的仪器。
质谱参考条件如下:
a) 电离方式:电喷雾电离(ESI);
b) 鞘气:4.09 L/min;
c) 辅助气:7.97 L/min;
d) 吹扫气:1.5 L/min;
e) 离子传输管温度:350 ℃;
f) 蒸发温度:300 ℃;
g) 扫描方式:正离子;
h) 监测方式:多反应监测方式(MRM);
i) 定量离子对、定性离子对、碰撞能量(eV)、去簇电压(V)见表2。
表2 定量离子对、定性离子对、碰撞能量(eV)
化合物母离子/(m/z) 子离子/(m/z) 碰撞能量/eV 去簇电压/V
苯并烯氟菌唑398.1
322.1* 24 98
342.0 18 98
377.9 14 98
* 定量离子。
8.4.3 标准工作曲线的绘制
按8.4.1与8.4.2的测定条件,将基质标准工作溶液浓度由低到高依次进样测定,以苯并烯氟菌唑
定量离子色谱峰的峰面积为纵坐标,与其对应的标准溶液浓度为横坐标作图,绘制标准工作曲线。苯并
烯氟菌唑的多反应监测(MRM)色谱图见附录A 中图A.1。
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8.4.4 定性测定
按照8.4.1与8.4.2的条件测定样品和基质标准工作溶液,如果检测的苯并烯氟菌唑质量色谱峰
保留时间与标准品保留时间相差不超过±2.5%,并且监测的离子均出现(信噪比≥3),定性离子对的相
对丰度(用相对于最强离子丰度的强度百分比表示)与浓度相当基质标准工作溶液的相对丰度一致,相
对丰度允许偏差不超过表3规定的范围,则可判断样品中存在苯并烯氟菌唑。
表3 定性确证时相对离子丰度和最大允许偏差
相对离子丰度/% >50 >20~50(含) >10~20(含) ≤10
允许的最大偏差/% ±20 ±25 ±30 ±50
8.4.5 定量测定
按照8.4.1与8.4.2的条件测定,选取响应值相近的基质标准工作溶液一起进行色谱分析,基质标
准工作溶液和待测液中苯并烯氟菌唑的响应值在仪器线性范围内,超过线性范围则应稀释后再进样分
析。外标法定量。
8.5 空白试验
试剂空白试验:除不加试样外,均按上述步骤进行。
试样空白试验:取空白基质试样,除不加标准工作溶液外,均按上述步骤进行。
9 计算结果与表述
试样中苯并烯氟菌唑含量由色谱数据处理软件或按公式(1)计算获得,计算结果应扣除空白值。
X =C ×V ×1 000 m ×1 000 …………………………( 1 )
式中:
X ———试样中苯并烯氟菌唑含量的数值,单位为微克每千克(μg/kg);
C ———从基质标准工作曲线得到的苯并烯氟菌唑浓度的数值,单位为微克每升(μg/L);
V ———试样溶液最终定容体积的数值,单位为毫升(mL);
m ———最终定容体积试样溶液所代表试样质量的数值,单位为克(g)。
计算结果保留3位有效数字。
10 定量限、回收率和精密度
10.1 定量限
本方法苯并烯氟菌唑的定量限:蜂胶为25 μg/kg,其他为 5.0 μg/kg。
10.2 回收率和精密度
本方法分别以牛肉、鸡肉、罗非鱼、鸡肝、鸡蛋、蜂蜜、牛奶、猪脂肪、猪肠衣、蜂王浆和蜂胶为空白样
品基质,进行3个浓度水平的苯并烯氟菌唑添加回收试验,每个浓度水平进行6次重复实验,测得苯并
烯氟菌唑在不同基质中的回收率范围和精密度数据,见附录B中表B.1。
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附 录 A
(资料性)
苯并烯氟菌唑标准溶液的多反应监测色谱图
苯并烯氟菌唑标准溶液的多反应监测色谱图见图A.1。
图A.1 苯并烯氟菌唑标准溶液的多反应监测色谱图(10 μg/L)
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附 录 B
(资料性)
苯并烯氟菌唑在不同基质中的添加回收率和精密度(n=6)
苯并烯氟菌唑在牛肉、鸡肉、罗非鱼、鸡肝、鸡蛋、蜂蜜、牛奶、猪脂肪、猪肠衣、蜂王浆和蜂胶11种基
质样品中的添加回收率和精密度见表B.1。
表B.1 苯并烯氟菌唑在不同基质中的添加回收率和精密度(n=6)
基质
添加浓度/
(μg/kg) 回收率范围/% RSD/%
牛肉
5.0 86.6~91.2 2.0
10 79.1~96.4 8.6
100 80.3~89.3 3.7
鸡肉
5.0 100.0~102.4 0.8
10 87.7~94.0 2.8
100 97.7~106.6 4.1
罗非鱼
5.0 100.0~104.0 1.6
10 105.2~109.4 1.5
100 92.7~96.9 1.9
鸡肝
5.0 84.8~90.6 2.6
10 88.0~95.8 3.7
100 90.8~96.8 2.2
鸡蛋
5.0 100.8~113.0 4.1
10 103.2~109.8 2.5
100 104.6~108.4 1.4
蜂蜜
5.0 109.2~112.6 1.3
10 90.0~96.0 2.4
100 96.2~99.3 1.0
基质
添加浓度/
(μg/kg) 回收率范围/% RSD/%
牛奶
5.0 92.0~96.2 1.7
10 90.0~99.2 4.0
100 92.9~96.4 1.5
猪脂肪
5.0 82.0~86.6 2.3
10 96.3~100.2 1.5
100 87.6~91.8 1.7
猪肠衣
5.0 89.4~98.6 3.5
10 86.9~99.7 5.1
100 84.3~88.1 1.9
蜂王浆
5.0 94.6~101.6 2.9
10 85.4~92.4 3.5
100 84.2~87.9 1.6
蜂胶
25 87.4~95.2 3.2
50 90.6~96.3 2.4
100 86.4~93.0 3.2
500 81.5~90.1 4.4
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