资源简介
ICS 67.100 CCS X 16
中华 人民 共和 国国 家标 准
GB 31658.39—2026
代替农业部 1025 号公告—11—2008、农业部 1063 号公告—3—2008
食品安全国家标准
动物尿液中23种β-受体激动剂残留量
的测定液相色谱-串联质谱法
National food safety standard—
Determination of 23 beta-agonists residues in animal urine— Liquid chromatography-tandem mass spectrometry method
2026-04-24 发布
2026-10-01 实施
发布
中华 人民 共和 国农 业农 村部中华人民共和国国家卫生健康委员会国家 市场 监督 管理 总局
GB 31658 .39—2026
前言
本文件按照 GB/T 1 .1—2020« 标准化工作导则第 1 部分 :标准化文件的结构和起草规则»和 GB/T 20001 .4—2015« 标准编写规则第 4 部分 :试验方法标准»的规定起草。
本文件代替农业部 1025 号公告—11—2008« 猪尿中 β一受体激动剂多残留检测液相色谱串联质谱法»、农业部 1063 号公告—3—2008« 动物尿液中 11 种 β一受体激动剂的检测液相色谱串联质谱法»。
与农业部 1025 号公告—11—2008 相比 ,除结构调整和编辑性修改外 ,主要变化如下 :
a) 标准文本格式修改为食品安全国家标准文本格式 ;
b) 增加了基质适用范围 ,增加了牛尿和羊尿 ;
c) 增加了 β一受体激动剂种类 , 由 4 种增加到 23 种 ;
d) 原理中 “酶解 ”改为 “盐酸溶液调节 pH”,“内标法定量 ”改为 “外标法定量 ”;
e) 删除了 “同位素内标 , 同位素内标储备液和同位素内标工作液 ”;
f) 灵敏度进一步提高 ,待测物在猪尿、牛尿、羊尿中的检出限为 0 .1 μg/L,定量限为 0 .2 μg/L。
与农业部 1063 号公告—3—2008 相比 ,除结构调整和编辑性修改外 ,主要变化如下 :
a) 标准文本格式修改为食品安全国家标准文本格式 ;
b) 增加了 β一受体激动剂种类 , 由 11 种增加到 23 种 ;
c) 原理中 “氢氧化钠调节 pH”改为 “盐酸溶液调节 pH”,“内标法定量 ”改为 “外标法定量 ”;
d) 删除了 “同位素内标 , 同位素内标储备液和同位素内标工作液 ”。
本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为 :
— 2008 年首次发布为农业部 1025 号公告—11—2008 ;
— 2008 年首次发布为农业部 1063 号公告—3—2008 ;
— 本次为第一次修订。
Ⅰ
GB 31658 .39—2026
食品安全国家标准
动物尿液中 23 种 β一受体激动剂残留量的测定
液相色谱串联质谱法
1 范围
本文件规定了动物尿液中 23 种 β一受体激动剂残留量检测的制样和液相色谱串联质谱测定方法。
本文件适用于猪尿、牛尿、羊尿中氯丙那林、西马特罗、特布他林、妥布特罗、西布特罗、沙丁胺醇、克仑普罗、克仑特罗、利托君、喷布特罗、异克舒令、莱克多巴胺、非诺特罗、马布特罗、克仑赛罗、马喷特罗、拉贝特罗、福莫特罗、苯乙醇胺 A、溴布特罗、班布特罗、沙美特罗、齐帕特罗 23 种 β一受体激动剂残留量的测定。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中 ,注日期的引用文件 ,仅该日期对应的版本 适用 于本 文件 ; 不注 日期 的引 用文 件 , 其最 新版 本(包括 所有 的修 改单)适用 于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4 原理
试样中残留的药物经盐酸溶液调节 pH , 酸解后离心 ,直接通过混合型阳离子交换柱富集净化 ,洗脱液浓缩后 ,用酸化乙腈溶液溶解 ,供液相色谱串联质谱仪检测 ,外标法定量。
5 试剂与材料
除另有规定外 ,所有试剂均为分析纯 ,水为符合 GB/T 6682 规定的一级水。
5 .1 试剂
5 .1 .1 乙腈(CH3 CN) :色谱纯。
5 .1 .2 甲醇(CH3 OH) :色谱纯。
5 .1 .3 甲酸(HCOOH) :色谱纯。
5 .1 .4 乙酸铵(CH3 COONH4) :色谱纯。
5 .1 .5 盐酸(HCl)。
5 .1 .6 氨水(NH3 ● H2 O)。
5 .2 溶液的配制
5 .2 .1 5 mol/L盐酸溶液 :准确量取 42 mL盐酸 ,加水定容至 100 mL,混匀。
5 .2 .2 0 .2%甲酸水/甲醇(95+5)溶液 :准确量取 25 mL 甲醇和 1 mL 甲酸 ,用水稀释定容至 500 mL,混匀。
5 .2 .3 5%氨水甲 醇溶液 :准确量取 5 mL氨水 ,用甲醇稀释定容至 100 mL,混匀。
5 .2 .4 0 .2%甲酸水/乙腈(80+20)溶液 : 准确量取 20 mL 乙腈和 0 .2 mL 甲酸 , 用水定容至 100 mL,混匀。
5 .2 .5 5 mmol/L乙酸铵一0.2%甲酸溶液 :准确量取 2 mL 甲酸和称取 385 mg乙酸铵 ,用水定容至 1 000 mL,
混匀。
1
GB 31658 .39—2026
5 .3 标准品
氯丙那林、西马特罗、特布他林、妥布特罗、西布特罗、沙丁胺醇、克仑普罗、克仑特罗、利托君、喷布特罗、异克舒令、莱克多巴胺、非诺特罗、马布特罗、克仑赛罗、马喷特罗、拉贝特罗、福莫特罗、苯乙醇胺 A、溴布特罗、班布特罗、沙美特罗、齐帕特罗 ,纯度均 ≥95% ,具体内容见附录 A.
5 .4 标准溶液制备
5 .4 .1 标准储备液
称取 βG受体激动剂标准品各适量(相当于活性成分 10 .0 mg,精确至 0 .000 1 g) ,分别采用甲醇溶解
- 18 ℃条件下冷冻保存 ,有效期为 12 个月 .
后转移至 10 mL棕色容量瓶 中 , 并用 甲醇 定容 , 配制 成浓 度 1 .0 mg/mL 的 βG受体 激动 剂标 准储 备液 .
5 .4 .2 混合标准中间溶液(10 μg/mL)
合标准中间溶(准确量取)液(β)G 中(受)23(体)种 β(激动)G受体激动剂的浓度均(剂标准储备溶液各 10)为(0μ)1(L)0μ(置)g/(于)m(1)L(0)m18(棕)℃条件下(色容量瓶)冷(中),冻(用)保(甲)存(醇),有(稀)效期为(释定容), .混
5 .4 .3 混合标准工作液(100 μg/L)
(80溶液(量取)释成混合标准工作液(受体激动剂混合标准)中临用现(间溶液)配(10)0 μL置于 10 mL棕色容量瓶中 ,用 0 .2%甲酸水/乙腈
5 .5 材料
5 .5 .1 混合型阳离子固相萃取小柱 :60 mg/3 mL,或性能相当者 .
5 .5 .2 针头式过滤器(通用型滤膜) :尼龙材质 ,孔径 0 .22 μm 或性能相当者 .
6 仪器与设备
6 .1 液相色谱串联质谱仪 :配有电喷雾电离源 .
6 .2 分析天平 :感量为 0 .000 01 g.
6 .3 涡旋振荡器 .
6 .4 离心机 :5 000 r/min或以上 .
6 .5 超声波振荡仪 .
6 .6 固相萃取装置 .
6 .7 氮吹仪 .
6 .8 pH计或精密 pH试纸 .
7 试样的制备与保存
7 .1 试样的制备
取适量新鲜或解冻的空白或供试样品 ,使用前恢复室温 ,混匀 ,如有混浊 ,离心后取上清液备用 .
a) 取备用的供试样品 ,作为供试试样 ;
b) 取备用的空白样品 ,作为空白试样 ;
c) 取备用的空白样品 ,添加适宜浓度的标准工作液 ,作为空白添加试样 .
7 .2 试样的保存
供试试样或空白试样应尽快置于- 18 ℃以下冷冻保存 .
8 测定步骤
8 .1 提取
取试样(5±0 .05) mL,于 15 mL离心管中 ,用 5 mol/L盐酸溶液(5 .2 .1)调节 pH 至 2 .0 ~ 3 .0 ,辅以加热超声 30 min[温度(45±2) ℃] ,5 000 r/min离心 5 min,取上清液备用 .
2
GB 31658 .39—2026
8 .2 净化
取混合型阳离子固相萃取小柱(5 .5 .1) ,依次用 3 mL 甲醇、3 mL水活化。 取备用液(8 .1)全部过柱 ,用 2 mL0 .2%甲酸水/甲醇(95+5)溶液(5 .2 .2)淋洗 ,抽干 2 min,用 5%氨水甲醇溶液(5 .2 .3)5 mL洗脱 ,收集洗脱液 ,于 50 ℃水浴氮气吹干 ,用 0 .2%甲酸水/乙腈(80+20)溶液(5 .2 .4) 1 .0 mL溶解 , 涡旋振动 1 min,超声振动 2 min,经 0 .22 μm 滤膜(5 .5 .2)过滤后进样测定。
8 .3 基质标准曲线的制备
取空白试样 5 .0 mL于 15 mL离心管中 ,按 8 .1 与 8 .2 中步骤操作后获得空白试样的基质溶液。 精
密量取混合标准中间溶液或标准工作液适量 , 用空白试样基质溶液配 制成 浓度 为 0 .2 μg/L、0 .5 μg/L、
纵坐标、标准溶液浓度为横坐标 ,绘制标准曲线。 若需使用单点校准 ,则必须配制在此标准曲线进样浓度
范围(0 .2 μg/L~ 25 μg/L)内的与样品溶液进样浓度最接近的基质匹配对照品溶液进行校准 ,标准曲线
1 μg/L、2 μg/L、5 μg/L、10 μg/L、25 μg/L的系列标准工作液 ,上机测定。 以特征离子质量色谱峰面积为
的线性相关系数应不低于 0 .99。
8 .4 测定
8 .4 .1 液相色谱参考条件
a) 色谱柱 :C18 色谱柱(100 mm×3 .0 mm ,2 .7 μm) ,或相当者 ;
b) 柱温 :30 ℃ ;
c) 进样量 :5 μL;
d) 流速 :0 .4 mL/min;
e) 流动相 :A 为 5 mmol/L乙酸胺一0 .2%甲酸溶液(5 .2 .5) ,B为乙腈 ,梯度洗脱条件见表 1。
表 1 流动相梯度洗脱条件
时间min
A
%
B
%
0
95
5
1 .0
95
5
3 0
70
30
4 0
60
40
7 0
5
95
8 .0
5
95
8 .5
95
5
10 .0
95
5
8 .4 .2 质谱参考条件
a) 离子源 : 电喷雾离子源(ESI) ;
b) 扫描方式 :正离子扫描 ;
c) 检测方式 :多反应监测(MRM) ;
d) 脱溶剂气、锥孔气、碰撞气均为高纯氮气或其他合适气体 ,使用前各气体流量应调节至质谱灵敏度达到检测要求 ;
e) 毛细管电压、锥孔电压、碰撞能量等值应优化至最佳灵敏度 ;
f) 定性离子对、定量离子对及对应的锥孔电压和碰撞能量见表 2。
表 2 23 种 β一受体激动剂定性离子对、定量离子对、锥孔电压及碰撞能量的参考值
被测物名称
定性离子对m/z
定量离子对m/z
锥孔电压V
碰撞能量eV
氯丙那林
214 .1>118 .7
214 .1>154 .1
52
26
214 .1>154 .1
16
西马特罗
220 .1>143 .0
220 .1>143 .0
30
24
220 .1>160 .1
15
3
GB 31658 .39—2026
表 2 (续)
被测物名称
定性离子对m/z
定量离子对m/z
锥孔电压V
碰撞能量eV
特布他林
226 .1>152 .0
226 .1>170 .0
30
16
12
226 .1>170 .0
妥布特罗
228 .1>154 .0
228 .1>154 .0
30
15
228 .1>172 .0
12
西布特罗
234 .2>143 .1
234 .2>160 .1
30
25
234 .2>160 .1
15
沙丁胺醇
240 .2>148 .1
240 .2>148 .1
30
20
240 .2>222 .1
12
克仑普罗
263 .1>203 .0
263 .1>245 .0
25
20
263 .1>245 .0
14
克仑特罗
277 .1>132 .0
277 .1>203 .0
30
28
277 .1>203 .0
15
利托君
288 .3>120 .9
288 .3>120 .9
25
21
288 .3>150 .0
16
喷布特罗
292 .1>74 .1
292 .1>236 .2
62
22
292 .1>236 .2
14
异克舒令
302 .0>107 .0
302 .0>150 .0
25
30
302 .0>150 .0
25
莱克多巴胺
302 .0>164 .1
302 .0>164 .1
30
15
302 .0>284 .2
12
非诺特罗
304 .2>107 .0
304 .2>135 .1
30
18
304 .2>135 .1
20
马布特罗
311 .1>217 .1
311 .1>237 .1
25
25
311 .1>237 .1
15
克仑赛罗
319 .1>203 .0
319 .1>301 .0
25
20
319 .1>301 .0
14
马喷特罗
325 .1>237 .0
325 .1>237 .0
25
15
325 .1>307 .1
12
拉贝特罗
329 .0>207 .0
329 .0>207 .0
25
25
329 .0>311 .0
20
福莫特罗
345 .0>120 .9
345 .0>149 .0
25
20
345 .0>149 .0
30
苯乙醇胺 A
345 .0>150 .0
345 .0>327 .0
30
25
345 .0>327 .0
20
溴布特罗
367 .0>293 .0
367 .0>293 .0
25
18
367 .0>349 .0
12
班布特罗
368 .0>72 .0
368 .0>72 .0
25
30
368 .0>294 .0
20
沙美特罗
416 .3>380 .0
416 .3>398 .3
25
18
416 .3>398 .3
15
齐帕特罗
262 .2>202 .1
262 .2>185 .1
25
18
262 .2>185 .1
22
8 .5 测定法
8 .5 .1 定性测定
在相同测试条件下 ,试样溶液中待测物质的保留时间与基质标准溶液中 β一受体激动剂相应组分的保留时间的偏差在 ±0 .1 min以内 ,且检测到的相对离子丰度 ,应当与浓度相当的基质标准溶液相对丰度一致。其允许偏差为 ±40%。
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GB 31658 .39—2026
8 .5 .2 定量测定
取试样溶液和标准溶液 ,作单点或多点校准 , 以色谱峰面积定量 ,按外标法计算。 标准溶液和试样溶
液中待测物的响应值均应在仪器检测的线性范围内 ,如超出线性范围 ,应用 0 .2%甲酸水/乙腈(80+20)
溶液(5 .2 .4)稀释后 ,重新测定。 23 种 β一受体激动剂标准溶液的液相色谱串联质谱特征离子质量色谱图
见附录 B。
8 .6 空白试验
取空白试样 ,采用相同的测定步骤进行平行操作。
9 结果计算和表述
试样中 β一受体激动剂残留量按标准曲线或公式(1)计算。
式中 :
ωi — 试样中 β一受体激动剂残留量的数值 ,单位为微克每升(μg/L) ;
ρiS — 基质匹配标准溶液中 β一受体激动剂浓度的数值 ,单位为微克每升(μg/L) ;
Ai — 试样溶液中 β一受体激动剂的峰面积 ;
V2i — 定容体积的数值 ,单位毫升(mL) ;
注 :计算结果不小于 1 μg/kg的保留 3 位有效数字 ,1 μg/kg以下的保留至小数点后 2 位。
AiS — 基质匹配标准溶液中 β一受体激动剂的峰面积 ; V1i — 试样体积的数值 ,单位毫升(mL)。
10 检测方法的灵敏度、正确度和精密度
10 .1 灵敏度
本方法在猪尿、牛尿、羊尿中 23 种 β一受体激动剂的检出限为 0 .1 μg/L,定量限为 0 .2 μg/L。
10 .2 正确度
本方法 23 种 β一受体激动剂在 0 .2 μg/L~ 2 μg/L的添加浓度水平的回收率为 60% ~ 120%。
10 .3 精密度
本方法的批内相对标准偏差 ≤15% ,批间相对标准偏差 ≤20%。
5
GB 31658 .39—2026
附录 A
(规范性)
23 种 βG 受体激动剂中英文通用名称、化学分子式和 CAS号
23 种 β_受体激动剂中英文通用名称、化学分子式和 CAS号见表 A.1。
表 A.1 23 种 β一受体激动剂中英文通用名称、化学分子式和 CAS号
中文通用名称
英文通用名称
化学分子式
CAS号
氯丙那林
Clorprenaline
C11 H16 ClNO
3811__25__4
西马特罗
Cimaterol
C12 H17 N3 O
54239__37__1
特布他林硫酸盐
Terbutaline hemisulfate salt
C24 H40 N2 O10 S
23031__32__5
妥布特罗
Tulobuterol
C12 H18 ClNO
41570__61__0
西布特罗
Cimbuterol
C13 H19 N3 O
54239__39__3
沙丁胺醇硫酸盐
Salbutamolhemisulfate salt
C13 H23 NO7 S
51022__70__9
克仑普罗盐酸盐
Clenproperolhydrochloride
C11 H17 Cl3 N2 O
75136__83__3
盐酸克仑特罗
Clenbuterolhydrochloride
C12 H19 Cl3 N2 O
21898__19__1
盐酸利托君
Ritodrine hydrochloride
C17 H22 ClNO3
23239__51__2
喷布特罗盐酸盐
Penbutololhydrochloride
C18 H30 ClNO2
28163__36__2
盐酸异克舒令
Isoxsuprine hydrochloride
C18 H24 ClNO3
579__56__6
莱克多巴胺盐酸盐
Ractopamine hydrochloride
C18 H24 ClNO3
90274__24__1
非诺特罗
Fenoterol
C17 H21 NO4
13392__18__2
马布特罗盐酸盐
Mabuterolhydrochloride
C13 H18 ClF3 N2 O
56341__08__3
克仑赛罗
Clencyclohexerol
C14 H20 Cl2 N2 O2
157877__79__7
马喷特罗盐酸盐
Mapenterolhydrochloride
C14 H21 Cl2 F3 N2 O
54238__51__6
拉贝洛尔盐酸盐
Labetalol Hydrochloride
C19 H25 ClN2 O3
32780__64__6
福莫特罗富马酸盐
Formoterolfumarate dihydrate
2 (C19 H24 N2 O4) ●
C4 H4 O4 ●2 ( H2 O)
183814__30__4
苯乙醇胺 A
PenylethanolamineA
C19 H24 N2 O4
1346746__81__3
溴布特罗
Brombuterol
C12 H18 Br2 N2 O
41937__02__4
班布特罗盐酸盐
Bambuterolhydrochloride
C18 H30 ClN3 O5
81732__46__9
沙美特罗
Salmeterol
C25 H37 NO4
89365__50__4
齐帕特罗
Zilpaterol
C14 H19 N3 O2
117827__79__9
6
GB 31658 .39—2026
附录 B
(资料性)
特征离子质量色谱图
23 种 β一受体激动剂标准溶液的液相色谱串联质谱特征离子质量色谱图见图 B.1。
220 . 1 143
2. 98 1 934 005
0 . 81 3 . 9 4 6 . 1 .4 9 . 81
277 1>203
2 .59 e+006
%
%
5 84
7 . 71
t, m n
t min
克仑特罗
西马特罗
6 1 70
%
5 89
%
4 1e+005
05
345 149 6 39 e+ 6
0 m n
min
福莫特罗
特布他林 4 .2 148 1
3 0 6e 6
34 > 27
%
%
6 66
29 e+ 6
5 . 89
苯乙醇胺A
min
t, min
4 60
4 185e+006
沙胺醇
%
%
3 51
8 . 1>1 4 5 . 173e+ 06
36 293 1 6 9e+0 6
m n
min
妥布特罗
西布特罗
304 >1 5
1 . 99 e+006
%
%
3 6
m n
min
溴布特罗
6 . 2
非诺特罗
288 3>12 . 9 1 471e+006
%
1 0
0
%
3 89
1 1 . 1>2 1 3 . 220e+006
7 . 78
m
min
马布特罗
6 28
利托君
19 1> 0 2. 274e+006
8 . 69
%
%
4 52
368 72 .586e+006
t, m n
t, min
班布特罗
6 .42
克仑赛罗
6 . 1> 4 0 e+006
%
1 0
0
%
5 . 12
3 . 12
329> 07 . 284e+006
8 . 8 5
m n
t, min
拉贝特罗
克仑普罗
302 .2> 64 1 4. 675e+005
5
%
%
325 . 1>2 7 4 396e+006
9 . 06>2 6 .207 1 40 e+006
min
t, min
马喷特罗
莱克多巴胺
302>l 0 8 . 084e+005
% 6 .20
%
1 0
0
100
0
t, m n
t, min
异克舒令喷布特罗
注 :福莫特罗与苯乙醇胺 A为同分异构体。
图 B.1 23 种 β一受体激动剂标准溶液(10 μg/L)的液相色谱串联质谱特征离子质量色谱图
7
GB 31658 .39—2026
%
5 . 71
214. 06>154 . 061 1 . 166e+006
%
7 . 39 1
416 . 3>398 . 3 . 976e+0 . 006
0
氯丙那林
t, min
262 2>185 1
0
沙美特罗
t, min
% 3 . 12
100
2 . 840e+005
t, min
齐帕特罗
图 B.1 (续)
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