LY/T 3308-2026 植物花青素

ICS65. 050 CCS B 72

中华人民共和国林业行业标准

LY/T 3308—2026代替 LY/T 3308—2022、LY/T 3309—2022

植物花青素

Plantanthocyanidin

本纸质文本仅供参考 , 未经授权 ,禁止复制、发行、汇编、翻译或网络传播等 ,侵权必究。本纸质文本为过程稿 ,如有不妥之处请以正式标准出版物为准。

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国家 林业 和草 原局 发布

LY/T3308—2026

目次

前言 Ⅲ

1 范围 1

2 规范性引用文件 1

3 术语和定义 1

4 技术要求 2

5 取样 3

6 试验方法 3

7 检验规则 4

8 标志、包装、运输和贮存 5

附录 A(规范性) 原花青素的测定方法 6

附录 B(规范性) 花青素的测定方法(紫外分光光度法) 8

附录 C(规范性) 黑枸杞花青素的测定方法(pH示差法) 10

Ⅰ

LY/T3308—2026

前言

本文件按照 GB/T 1. 1—2020《标准化工作导则第 1 部分 :标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

本文件代替 LY/T 3308—2022《落叶松树皮原花青素》、LY/T 3309—2022《越橘原花青素》, 与 LY/ T 3308—2022和 LY/T 3309—2022相比 ,除结构调整和编辑性改动外 ,主要技术变化如下 :

— 增加了花青素及技术要求(见 3. 1,4. 1及 4. 2) ;

— 增加了原花青素及技术要求(见 3. 2,4. 1及 4. 2) ;

— 增加了规范性测定方法中的高效液相色谱法及 pH示差法(见 6. 3)。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由国家林业和草原局提出。

本文件由全国林化产品标准化技术委员会(SAC/TC 558)归口。

本文件起草单位 :北京林业大学、中华全国供销合作总社南京野生植物综合利用研究所、广州澳谷化妆品制造有限公司、北京盛昌益态新能源科技有限公司、东北林业大学、宁夏农产品质量标准与检测技术研究所、广州壹木科技股份有限公司、西南林业大学、广西民族大学、四川省林业科学研究院、江西农业大学、湖南省林业科学院、青海金麦杞生物科技有限公司、中国科学院西北高原研究所。

本文件主要起草人 :吉骊、蒋建新、李鹏飞、李淑君、王泽龙、傅友红、陈志俊、张锋伦、赵丹青、李玉林、赵平、杨晓琴、罗雄飞、翟迎香、陈殿松、马铃、陈木红、杨凌、王宗德、陈韵 竹、孟欣 怡、朱国 磊、解思 达、姜倩、邹丽花。

本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为 :

—LY/T 3308,2022年首次发布 ;

—LY/T 3309,2022年首次发布 ;

— 本文件为第一次修订。

Ⅲ

LY/T3308—2026

植物花青素

1 范围

本文件规定了植物花青素的技术要求、取样、检验规则和标志、包装、运输及贮存 ,描述了相应产品的试验方法。

本文件适用于以落叶松树皮、越橘果实、桑葚及黑枸杞为原料制得的植物花青素。

2 规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中 , 注日 期的 引用 文件 ,仅该日期对应的版本适用于本文件 ;不注日期的引用文件 ,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB 5009. 3 食品安全国家标准食品中水分的测定

GB 5009. 4 食品安全国家标准食品中灰分的测定

GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

NY/T 2640—2014 植物源性食品中花青素的测定高效液相色谱法

3 术语和定义

下列术语适用于本文件术语和定义。

3. 1 原花青素 procyanidins

由不同数量的儿茶素或表儿茶素通过缩合或聚合形成的一类物质。

注 :结构式见图 1。

OH

H

OH

HO OH

OH

OH

OH

HO

OH

图 1 原花青素结构式3. 2 花青素 anthocyanidin

是一种以糖苷形式存在于植物细胞液中的水溶性色素。

注 :结构式见图 2。

1

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R

R4

+

R4

A).

R2

o、

R4

R,和R2是H、 OH或OCH3 R3是H或糖基 R4是OH或糖基

图 2 花青素结构式

4 技术要求

4. 1 感官指标

产品感官指标应符合表 1及表 2要求。

表 1 原花青素产品感官指标

项目

指标

落叶松树皮原花青素

越橘果实原花青素

色泽

红棕色

粉红色至紫红色

气味

气微 , 味微 ,具落叶松特有的气味

气微 ,具越橘特有的气味

形状

固体粉末状

固体粉末状

表 2 花青素产品感官指标

项目

指标

黑枸杞花青素

越橘果实花青素

桑葚花青素

色泽

暗红色

粉红色至紫色

红色至棕色

气味

具黑枸杞特有的气味 ,无异味

气微 ,具越橘特有的气味

具桑葚特有的气味 ,无异味

形状

固体粉末状

固体粉末状

固体粉末状

4. 2 理化指标

原花青素理化指标应符合表 3规定 ,花青素理化指标应符合表 4规定。

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表 3 原花青素理化指标

项目

落叶松树皮原花青素

越橘果实原花青素

优等品

一等品

合格品

优等品

一等品

合格品

原花青素含量/% ≥

90. 0

75. 0

50. 0

35. 0

30. 0

25. 0

水分/% ≤

5. 0

灰分/% ≤

2. 0

细度(180 μm 筛通过率)/% ≥

90. 0

表 4 花青素理化指标

项目

黑枸杞花青素

越橘果实花青素

桑葚花青素

花青素含量/%

≥

15. 0

20. 0

10. 0

水分/%

≤

5. 0

灰分/%

≤

2. 0

细度(180 μm 筛通过率)/%

≥

90. 0

5 取样

5. 1 取样规则

应采用不锈钢或硬质塑料材质的取样器。取样过程中不应带进杂质 ,应避免在取样过程中引起样品吸水、氧化等。取样以批为单位 ,每批次取样数应不少于 3 个。 随机从包装单位 3 个不同部位共采取约400 g样品 ,混合均匀后以四分法缩分。

5. 2 样品贮存

将试样平均分装于 2个棕色磨口瓶中 ,一瓶待检 ,一瓶留样备用。标签标明取样名称、来源、编号、样品量、样品数、取样日期、取样人姓名等。样品贮存于避光、阴凉、干燥处。

6 试验方法

6. 1 感官指标检验

取少许样品 ,置于白瓷盘中 ,在自然光下采用目测、鼻嗅等方法。

6. 2 原花青素含量

按照附录 A 中规定的试验方法进行测定。

6. 3 花青素含量

6. 3. 1 高效液相色谱法(仲裁法)

按照 NY/T 2640—2014规定执行。

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6. 3. 2 紫外分光光度法

越橘花青素、桑葚花青素按照附录 B 中规定的检验方法进行测定 ,黑枸杞花青素含量测定按照附录C 中规定的检验方法进行测定。

6. 4 水分

按照 GB 5009. 3规定执行。

6. 5 灰分

按照 GB 5009. 4规定执行。

6. 6 细度

称取 25g样品 ,置于孔径为 180 μm 不锈钢筛 ,加盖振摇。按水平方向旋转振摇至少 3 min,并在垂直方向轻叩筛。取筛下粉末称量 ,计算其所占比例( %)。 重复上述操作 ,直至药筛遗留粉末质量差不超过前次遗留粉末质量的 5%或两次质量的差值不大于 0. 1 g。

试样中细度通过率 ,按式(1)进行计算 :

M … … … … … … … ( 1 )

式中 :

M — 试样中细度(过 180 μm 筛)通过率 ,单位为 % ;

m1 — 试样的质量 ,单位为克(g) ;

m2 — 180 μm 药筛筛下的颗粒及粉末质量 ,单位为克(g) ;

计算结果保留 3位有效数字。

7 检验规则

7. 1 检验分类

7. 1. 1 出厂检验

出厂检验项目为感官及含量 ,检验合格后方可出厂。

7. 1. 2 型式检验

7. 1. 2. 1

出现下列情况之一时 ,应进行型式检验。

a) 首次批量生产时 ,长期停产后恢复生产时 ;

b) 产品正常生产时 ,每半年至少进行一次 ;

c) 当原辅材料及生产工艺发生较大变动时 ;

d) 质量监督机构提出型式检验要求时。

7. 1. 2. 2

型式检验包括第 4章相应产品的所有项目。

7. 2 判定规则和复检规则

7. 2. 1 检验结果中 ,如有指标不符合要求时 ,应加倍抽样进行复检。如复检仍不符合要求 ,则判定该批

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产品为不合格。

7. 2. 2 供需双方对检验结果如有争议 , 可由双方按标准引用的取样方法 共同 取样 3 份 , 各存 1 份 , 另1份委托具有相应资质的检验机构进行仲裁分析。

7. 3 组批规则

同一生产批的产品组成 1批。

8 标志、包装、运输、贮存

8. 1 标志

应标产品名称、毛质量、净质量、商标、厂名、厂址和出厂日期。

8. 2 包装

固体产品用瓦楞纸桶装 , 内衬塑料袋 ,或按客户要求包装。

8. 3 运输

运输应轻卸轻放 , 防止日晒、雨淋 ,并远离热源 ,不应与有害、有毒和易污染物品一起混运。

8. 4 贮存

应贮存在干燥、通风、清洁的室内仓库里 ,避免受潮。不应与有毒、易污染物混存。

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附录 A

(规范性)

原花青素的测定方法

A. 1 试剂和溶液

A. 1. 1 纯水 :色谱纯。

A. 1. 2 硫酸铁铵 :分析纯。

A. 1. 3 正丁醇 :分析纯。

A. 1. 4 盐酸 :分析纯。

A. 1. 5 甲醇 :分析纯。

A. 1. 6 原花青素标准品 :原花青素 CAS号 4852 22 6,纯度 ≥95%。

A. 1. 7 2 mol/L盐酸溶液 :准确量取盐酸 20 mL于烧杯中 ,加 100 mL水 ,摇匀。

A. 1. 8 2%硫酸铁铵溶液 :精确称取 2. 0 g 硫酸铁铵 ,置于 100 mL小烧杯中 , 加入 30 mL~ 50 mL 的2 mol/L盐酸溶解后 ,放冷至室温 ,转移到 100 mL容量瓶中 ,再用 2 mol/L盐酸溶液定容至刻度 ,摇匀。 A. 1. 9 5%盐酸正丁醇(V/V)溶液 :于 100 mL小烧杯中添加大约 2/3体积的正丁醇 ,量取 5. 0 mL盐酸加入 ,放冷至室温 ,转移到 100 mL容量瓶中 ,再用正丁醇定容至刻度 ,摇匀。

A. 2 仪器设备

A. 2. 1 分析天平 :感量 0. 000 1 g。

A. 2. 2 紫外可见光分光光度计 :波长范围至少覆盖 110 900 nm ,适配原花青素 280 nm、500 nm 等常用检测波长 ;波长精度 ≤±1 nm ,确保特征吸收峰精准定位 ; 吸光度线性范围至少 0 3 Abs;杂散光低 ,避免低浓度样品检测失真 ,保障定量准确性 ;连续测量中吸光度示值漂移小 ;具备基线自动校正功能 ,减少光学系统误差。

A. 2. 3 容量瓶 :10 mL、50 mL、100 mL。

A. 2. 4 电热恒温水浴锅 :温度精度 ±1℃。

A. 2. 5 涡旋混合仪。

A. 2. 6 具盖安瓿瓶 :10 mL。

A. 2. 7 封口钳。

A. 2. 8 超声波提取机 :常用频率 20 100 kHz;功率密度可调节 ,适配不同原料细度 , 防止功率过高破坏原花青素结构 ;应带控温或恒温组件 ,温度控制在 30 60℃为宜 , 因原花青素受热易分解 ,避免提取过程中温度过高导致其活性和得率下降 ;具备精准定时功能 ,定时范围应覆盖 10 60 min的常用提取时长。

A. 3 操作方法

A. 3. 1 标准溶液的配制

A. 3. 1. 1 原花青素标准储备液(1. 0 mg/mL) :精密称取原花青素标准品 10 mg,精确到 0. 1 mg,置于10 mL容量瓶中 ,加甲醇溶解并定容至刻度 , 即得浓度为 1. 0 mg/mL标准储备液 ,溶液现用现配。

A. 3. 1. 2 原花青 素标 准系 列工 作液 : 准确 量取 原花 青素 储备 液 0. 5 mL、1. 0 mL、1. 5 mL、2. 0 mL、 2. 5 mL分别置于 10mL容量瓶中 ,加甲醇至刻度 ,摇匀 , 即得浓度为 50 μg/mL、100 μg/mL、150 μg/mL、 200 μg/mL、250μg/mL 的标准系列工作溶液。

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A. 3. 2 供试品溶液配制

精密称取供试品 50. 0 mg~ 100. 0 mg,精确到 0. 1 mg,加甲醇溶解并稀释定容至 100mL容量瓶中 ,摇匀 ,离心或放置 澄清 后取 上清 液作 为供 试品 溶液。 如样 品原 花青 素含 量较 高 , 再精 密量 取上 清液10 mL,置于 100 mL容量瓶中 ,加甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,作为供试品溶液。

A. 3. 3 标准曲线的绘制

准确吸取原花青素标准系列工作液各 1 mL放置 于安 瓿瓶 中 , 加入 5%盐酸 正丁 醇溶 液 (A. 1. 9) 6 mL,2%硫酸铁铵溶液(A. 1. 8)0. 2 mL,混匀 ,用封口钳将其密封。置于沸水浴中加热反应 40 min,取出 ,立即置于冰水浴中冷却至室温 , 以甲醇为空白 ,于 550 nm 波长处测定吸光度 ,显色在 1 h 内稳定以吸光度为纵坐标 ,原花青素浓度为横坐标绘制标准曲线。

A. 3. 4 样品溶液的测定

精密吸取 A. 3. 2 中供试品溶液 1 mL,置于安瓿瓶中 , 以相应试剂为空白 ,测定样品吸光度 ,用标准曲线计算试样中原花青素含量。

A. 4 结果计算

原花青素含量以质量分数 X计 ,数值以 %表示 ,按式(A. 1)计算 :

X … … … … … … … … ( A. 1 )

式中 :

X — 原花青素含量 , % ;

C — 供试品中原花青素的含量 ,单位为微克每毫升(μg/mL) ;

f — 稀释倍数 ;

V — 供试品溶液总体积 ,单位为毫升(mL) ;

m — 供试品的质量 ,单位为克(g) ;

计算结果表示到小数点后一位。

A. 5 精密度

两次重复测定结果相对标准偏差应不大于 5%。

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附录 B

(规范性)

花青素的测定方法(紫外分光光度法)

B. 1 试剂和溶液

B. 1. 1 纯水 :GB/T 6682规定的二级水。

B. 1. 2 盐酸 :分析纯。

B. 1. 3 甲醇 :分析纯。

B. 1. 4 2%的盐 酸甲 醇溶 液 (m/V) : 准确 量取 盐酸 47 mL, 加入 800 mL 甲醇 中 , 再用 甲醇 稀释 至1 000 mL,摇匀 , 即得。

B. 1. 5 矢车菊素 3 O 葡萄糖苷 :CAS号 7084 24 4,纯度 :≥95%(HPLC)。

B. 2 仪器设备

B. 2. 1 分析天平 :感量 0. 000 1 g。

B. 2. 2 超声波清洗仪 :常用频率 20 100 kHz;功率密度可调节 ,适配不同原料细度 , 防止功率过高破坏花青素结构 ;需带控温或恒温组件 ,温度控制在 30 60℃为宜 , 因花青素受热易分解 ,避免提取过程中温度过高导致其活性和得率下降 ;具备精准定时功能 ,定时范围需覆盖 10 60 min的常用提取时长。

B. 2. 3 紫外可见分光光度计 :波长范围至少覆盖 190 900 nm ,适配花青素 520 531 nm 左右的特征吸收波长 ;波长精 度 ≤ ± 0. 5 nm , 保证 检测 波长 定位 精准 ; 吸光 度测 量范 围 ≥0 2A;透射 比准 确度 ≤ ±0. 5% ;需配备 1 cm 石英比色皿;支持吸光度、透射比测量模式 ,能完成标准曲线拟合 ,一阶拟合相关系数 R2 ≥0. 999;连续测量时吸光度漂移小 ;具备基线自动校正和波长自动校准功能。

B. 3 操作方法

B. 3. 1 供试品溶液配制

精密称取供试品 15~ 20 mg(精确至 0. 1 mg) ,加入 60 mL 2%盐酸甲醇溶液(m/V) ,在 80℃水浴中回流水解 0. 5 小时后冷却至室温 ,用 2%盐酸甲醇溶液(m/V)转移完全并定容至 100 mL,摇匀 ,得试液 A。然后精密吸取 5 mL试液 A 到 50 mL容量瓶中 ,用 2%盐酸甲醇溶液(m/V)定容至刻度 ,摇匀 ,制得待测试液 B。溶液应澄清透明 ,若混浊 ,则用滤纸过滤 ,开始的滤液约 10 mL弃去 ,之后的滤液用作检测。

B. 3. 2 测定方法

以 2%盐酸甲醇溶液(m/V)作空白 ,在 528 nm 吸收波长、1 cm 比色杯条件下测吸光度 A。 B. 4 结果计算

花青素含量以矢车菊素的质量分数 Y计 ,数值以 %表示 ,按式(B. 1)计算 :

Y … … … … … … … … ( B. 1 )

式中 :

Y — 花青素含量 , % ;

A — 供试品溶液 B在吸收波长 528 nm 下的吸光度 ;

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V — 供试品溶液的稀释体积 ,mL;

718— 矢车菊素 3 O 葡萄糖苷的百分吸光系数(E1(1)) ; m — 供试品称样量 ,g;

计算结果表示到小数点后一位。

B. 5 精密度

两次重复测定结果相对标准偏差应不大于 5%。

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附录 C

(规范性)

黑枸杞花青素的测定方法(pH示差法)

C. 1 试剂和溶液

C. 1. 1 纯水 :GB/T 6682规定的二级水。

C. 1. 2 氯化钾 :分析纯。

C. 1. 3 结晶乙酸钠 :分析纯。

C. 1. 4 浓盐酸 :分析纯。

C. 1. 5 无水乙醇 :分析纯。

C. 1. 6 氯化矮牵牛素 3 O 芸香糖苷(反对香豆酰) 5 O 葡萄糖苷 ,CAS号 69915 09 9,纯度 : ≥98%(HPLC)。

C. 1. 7 氯化矮牵牛素 3,5 二氧葡萄糖苷 ,CAS号 25846 73 5,纯度 :≥95%(HPLC)。

C. 1. 8 2 mol/L盐酸溶液 :准确量取盐酸 20 mL于烧杯中 ,加 100 mL水 ,摇匀。

C. 1. 9 80 %乙醇溶液 :准确量取无水乙醇 800 mL于 1 000 mL容量瓶中 ,加水稀释至刻度 ,摇匀。

C. 1. 10 0. 025 mol/L氯化钾缓冲溶液 :称取 0. 93 g 氯化钾 ,置于 1 000 mL烧杯中 ,加入 490 mL水溶解后 ,加浓盐酸 1. 5 mL,用 2 mol/L稀盐酸溶液调节 pH 值至 1. 0,转移到 500 mL容量瓶中 ,再用水定容至刻度 ,摇匀。

C. 1. 11 0. 4 mol/L乙酸钠缓冲溶液 :称取 27. 22 g结晶乙酸钠固体 ,置于 1 000 mL烧杯中 ,加入 480 mL水溶解后 ,加浓盐酸 9. 5 mL,用 2 mol/L稀盐酸溶液调节 pH 值至 4. 5,转移到 500 mL容量瓶中 ,再用水定容至刻度 ,摇匀。

C. 2 仪器设备

C. 2. 1 分析天平 :感量 0. 000 1 g。

C. 2. 2 紫外可见光分光光度计 :波长范围至少覆盖 110 900 nm ,波长精度 ≤±1 nm ,确保特征吸收峰精准定位 ; 吸光度线性范围至少 0 3 Abs;杂散光低 ,避免低浓度样品检测失真 ,保障定量准确性 ;连续测量中吸光度示值漂移小 ;具备基线自动校正功能 ,减少光学系统误差。

C. 2. 3 pH 计 :精度 0. 01。

C. 2. 4 超声波清洗机 :常用频率 20 100 kHz;功率密度可调节 ,适配不同原料细度 , 防止功率过高破坏原花青素结构 ;应带控温或恒温组件 , 因花青素受热易分解 ,避免提取过程中温度过高导致其活性和得率下降 ,温度控制在 30 60℃;具备精准定时功能 ,定时范围应覆盖 10 60 min的常用提取时长。

C. 2. 5 台式离心机 :转速 ≥ 8 000 r/min。

C. 3 操作方法

C. 3. 1 供试品溶液配制

精密称取供试品 10 mg(精确至 0. 1 mg) , 加入 50 mL 提取 液(浓盐 酸和 80%乙醇 溶液 , 体积 比为3 ∶ 97)稀释 2~ 10倍 ,得到试液 A。取 1 mL试液 A 与 4 mL pH 1. 0 的氯化钾缓冲溶液混合 ,得到混合液 B;再取 1 mL试液 A 与 4 mL pH 4. 5 的乙酸钠缓冲溶液混合 ,得到混合液 C。分别将混合液 B 和混合液 C 于 50℃超声提取 30 min,每隔 10 min振摇 1 次 ,保持固相完全分散。提取结束后冷却至室温 ,再

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次称定质量 ,用提取液补足减失的质量 ,混匀。分别取部分提取液以 8 000 r/min离心 3 min,取上清液备用。

C. 3. 2 测定方法

C. 3. 2. 1 最大吸收波长

按本文件 C. 3. 1要求制备的供试品溶液静置 10 min后 ,在 400 nm~ 600 nm 波长之间进行部分可见波段扫描以确定最大吸收波长。

C. 3. 2. 2 供试品溶液检测

分别在最大吸收波长和 700 nm 波长处测定用 pH 1. 0 缓冲溶液稀释的供试品溶液和用 pH 4. 5 缓冲溶液稀释的供试品溶液的吸光度值。

C. 4 结果计算

花青素含量以矢车菊素的质量分数 Z计 ,数值以 %表示 ,按式(C. 1)计算 :

Z … … … … … … … ( C. 1 )

式中 :

Z — 黑枸杞花青素含量 , % ;

A —pH 1. 0 与 pH 4. 5供试品溶液的吸光度差值 ;

912. 7 — 矮牵牛素类成分的平均摩尔质量 ,g/mol;

f — 稀释倍数 ;

V — 提取液总体积 ,mL;

295 91 — 矮牵牛素类成分的平均摩尔消光系数 ,L/(mol· cm) ;

m — 称取试样的质量 ,g;

计算结果表示到小数点后一位。

C. 5 精密度

两次重复测定结果相对标准偏差应不大于 5%。