小麦全蚀病抗性鉴定技术规程
１ １ 范围
本文件规定了小麦全蚀病抗性鉴定的鉴定程序、接种体制备、抗病性鉴定、病情调查、抗性评价、等技
术要求.
本文件适用于普通小麦(包括选育品种/系、地方品种、特殊遗传材料、近等基因系、重组自交系、DH
群体)、杂交小麦、其他栽培小麦种、野生小麦、小麦野生近缘种对小麦全蚀病抗性的田间鉴定和评价.
２ 规范性引用文件
本文件没有规范性引用文件.
３ 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件.
３?１
小麦全蚀病 wheattakeＧall
由Gaeumannomycesgraminis(Sacc?)Arx& Oliver引起的典型小麦根部病害,病原菌有３个变种,
禾顶囊壳小麦变种G?graminisvar?tritici、禾顶囊壳禾谷变种G?graminisvar?graminis 和禾顶囊壳燕
麦变种G?graminis var?avenae.在小麦品种抗全蚀病鉴定与评价中通常选用禾顶囊壳小麦变种
G?graminisvar?tritici 进行接种.
３?２
变种 pathovar
病原在“种”下类群中在形态特征、对不同寄主的致病性、生理生化及某些遗传特征上有差异的群体.
４ 鉴定程序
小麦全蚀病抗性鉴定程序包括接种体制备、鉴定选择、接种方法、严重度记载及标准、苗期或成株期抗
性评价和抗性评价阶段.程序流程如图１所示.
５ 接种体制备
５?１ 病原物分离
通常采用组织分离法从小麦全蚀病发病部位分离病原物.从发病小麦根部或茎基部切取病组织,用
１％的硝酸银溶液表面消毒３０s,置半量马铃薯葡萄糖琼脂(potatodextroseagar,PDA)培养基平板上
１９℃、１２h光周期条件下进行培养(３d~１６d),分离物经形态学特征鉴定,确定为小麦全蚀病菌后,进行
分离物纯化,经致病性测定后,转至PDA 斜面培养基,直接保存或用石蜡封存于４℃条件下备用.
５?２ 病原物接种体的制备
将鉴定为G?graminisvar?tritici 的菌株按附录A 中A?２的方法制成接种体备用.
６ 抗病性鉴定
６?１ 苗期鉴定
６?１?１ 小麦幼苗培养
选择籽粒饱满健康的待测小麦种子,２％次氯酸钠溶液中表面漂洗消毒２min,蒸馏水中漂洗３次,置
于培养皿中吸足水的３层滤纸上室温(２５±３)℃萌发２４h~４８h,备用.
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图１ 小麦全蚀病抗性鉴定程序流程
６?１?２ 接种方法
６?１?２?１ 试管法
取尖底、透明、容量１５mL塑料离心管,长１１５mm,直径１５mm,底部有排水孔,用棉球堵住排水孔,
装蛭石至９mL处,接入在PDA 上培养２周~３周、菌落边缘处选取的菌饼(直径为１３mm),再加２cm~
２?５cm 蛭石,将萌发４８h的待测品种种植于管内,每管３粒,再覆盖１cm 蛭石,将试管捆好、固定于直立
试管架上,灌水,１８℃培养,每周每管浇入１０mL(体积比１∶３)的霍格兰氏大量元素溶液,２８d后,清洗植
株根部,去除蛭石,调查发病情况.鉴定试验设３次~４次重复,每个重复３０株.
６?１?２?２ 盆栽法
取方底或圆底、底部渐细、容量８００mL的塑料盆,装入体积比２∶１的营养土:蛭石混合物４００mL.
加入病麦粒或病谷粒(粉碎成０?２ mm~０?５ mm 颗粒)与蛭石混合物(体积比≥０?５％)１cm 或２cm
(４０mL/盆或８０mL/盆),再加入前述营养土蛭石混合物至７００mL,灌水至７５％土壤含水量,将５粒~１０
粒萌发种子分散播种,覆土１５mm,将花盆置于１８℃培养２８d,每５~７d灌水１次.２８d后小心取出植
株,清洗根部,去除泥土或蛭石,调查发病情况.鉴定试验设３次~４次重复,每个重复３０株.
６?２ 成株期人工病圃设置和接种方法
病圃小区畦宽１５０cm,每鉴定材料种植１行,行长１００cm,行距３３cm,每隔２０个品种设１个感病对
照(小偃６号或其他本地高感品种),随机排列,重复３次.开沟后,先均匀播撒玉米砂培养基培养的１５g
接种体,然后播种３g~５g小麦种子覆土,正常田间管理.鉴定圃内不施用任何杀菌剂.
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７ 病情调查
７?１ 调查时间
盆栽鉴定在播种４周后、病圃鉴定在灌浆期至乳熟期调查发病情况.
７?２ 调查方法
鉴定每份材料的发病状况,根据病害症状描述,以鉴定材料为单元逐株进行调查,记载严重度,调查样
本每份材料每次重复不得小于１５茎.
７?３ 病情分级
７?３?１ 苗期病情分级
苗期病情调查小麦根系,其严重度分级及对应的症状描述见表１.
表１ 小麦全蚀病苗期严重度分级及其症状描述
严重度分级症 状 描 述
０ 根部无症状
１ ０＜黑根占总根＜２５％
２ ２５％≤黑根占总根＜５０％
３ ５０％≤黑根占总根＜７５％
４ 黑根占总根≥７５％
５ 所有根部及茎基变黑、变干
７?３?２ 成株期病情分级
田间病情调查小麦根系,其严重度分级及对应的症状描述见表２.
表２ 小麦全蚀病成株期严重度分级及其症状描述
严重度分级症 状 描 述
０ 根部无症状
１ ０＜黑根占总根＜１０％
２ １０％≤黑根占总根＜２５％
３ ２５％≤黑根占总根＜５０％
４ 黑根占总根≥５０％
５ 所有根均有病斑且病斑在茎基部表现
６ 所有根均有病斑,且病斑在茎基部、茎部均表现
７ 植株褪绿或严重矮化
８ 植株死亡或接近死亡
７?４ 发病率和病情指数的计算与记载
根据６?３描述的分级标准记载病情,按公式(１)计算病情指数(DI).
DI ＝Σ(s×n)
N ×S ×１００ (１)
式中:
DI ———病情指数;
s ———各病情级别的代表数值;
n ———各病情级别有植株(叶片)的数值,单位为株(片);
N ———调查总株(叶片)的数值,单位为株(片);
S ———最高级病情级别的代表数值.
８ 抗性评价
８?１ 鉴定有效性判别
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当鉴定圃中的感病或高感对照材料达到其相应感病程度(５级或６级)时,该批次鉴定视为有效.
８?２ 抗性评价标准
８?２?１ 苗期抗性评价
苗期根据鉴定材料的平均病情级别确定期对全蚀病的抗性水平,划分标准见表３.
表３ 小麦全蚀病苗期抗性评价标准
平均严重度抗性评价
平均严重度＝０ 高抗(Highlyresistant,HR)
０＜平均严重度≤１ 抗病(Resistant,R)
１＜平均严重度≤２ 中抗(Moderatelyresistant,MR)
２＜平均严重度≤３ 中感(Moderatelysusceptible,MS)
３＜平均严重度≤４ 感病(Susceptible,S)
４＜平均严重度≤５ 高感(Highlysusceptible,HS)
８?２?２ 成株期抗性评价
依据鉴定材料发病程度(病情指数)计算相对病情指数(DI/DIM ),确定其对全蚀病的成株期抗性水
平,划分标准见表４.
表４ 小麦全蚀病成株期抗性评价标准
相对病情指数抗性评价
DI/DIM ＝０ 高抗(Highlyresistant,HR)
０＜DI/DIM ≤０?２ 抗病(Resistant,R)
０?２＜DI/DIM ≤０?４ 中抗(Moderatelyresistant,MR)
０?４＜DI/DIM ≤０?６ 中感(Moderatelysusceptible,MS)
DI/DIM ＞０?６ 高感(Highlysusceptible,HS)
注:DIM :发病最重品种的病情指数.
８?３ 重复鉴定
初次鉴定中表现为高抗、中抗的材料,翌年用相同的病原菌进行重复鉴定.
８?４ 抗性评价
根据２年抗性鉴定结果对鉴定材料进行抗病性评价,抗性以统计的最高病情指数为准.
８?５ 鉴定记载表格
小麦全蚀病抗性鉴定结果记载表见５.
表５ 年小麦全蚀病抗性鉴定结果记载表
编号品种名称来源
发病株数,株
０级１级２级３级４级５级６级７级８级
病情指数抗性评价
注１:鉴定地点
注２:接种病原菌分离物编号
注３:接种日期 调查日期
鉴定技术负责人(签字):
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附 录 A
(资料性)
病原物鉴定和接种体制备
A?１ 病原物形态
禾顶囊壳小麦变种(Gaeumannomycesgraminisvar?tritici),属真菌界(Fungi)子囊菌门(AscomycoＧ
ta)盘菌亚门(Pezizomycotina)粪壳菌纲(Sordariomycetes)粪壳菌亚纲(Sordariomycetidae)巨座壳菌目
(Diaporthales)巨座壳菌科(Magnaporthaceae)顶囊壳属(Gaeumannomyces)真菌.菌丝初期纤细,色淡,
后期粗壮,褐色,多为锐角分枝,平行方向伸展,往往于分枝交界处各产生一个横隔形成“∧”形菌丝体.具
有简单的指状附着枝.子囊壳群集或散生于衰老病株茎基部叶鞘内侧的菌丝束上,烧瓶状,黑色,周围有
褐色菌丝环绕.子囊平行排列于子囊腔内,子囊孢子成束或分散排列,丝状,无色,略弯,具３个~７个假
隔膜,多为５个,内含许多油球,大小为(５３~９２)μm×(３?１~５?４)μm.在PDA 培养基上,菌落灰黑色,菌
丝束明显,菌落边缘菌丝常向中心反卷,人工培养易产生子囊壳.
A?２ 病原物接种体制备
A?２?１ 培养基的选择和制作
玉米粉、砂培养基按玉米粉∶砂为３∶７的比例混合均匀,加适量水以混合后不成团为宜,装入三角瓶
中(每瓶装容量的１/３),１２１℃灭菌９０min,灭菌后趁未完全冷却时摇匀,以免冷却后结块.
A?２?２ 扩繁
将斜面中保存的病原菌转移到PDA 平板中扩大繁殖后,在无菌条件下,将PDA 平板边缘生活力较
强的带培养基菌饼(直径０?８cm)移入装有玉米粉、砂培养基的三角瓶中,每瓶５块菌饼.然后置于２５℃
下恒温培养,待菌丝长满时,平行摇动１次,使菌丝体均匀生长,半个月后,取出阴晾,备用.
A?３ 霍格兰氏营养溶液配制方法
按A?１表执行.
表A?１ 霍格兰氏营养液配制方法
元素组成储存液,g/L 储存液,mL/L
大量元素２mol/LKNO３ ２０２ ２?５ 大量元素２mol/LCa(NO３)２?４H２O ４７２ ２?５ 大量元素Fe(Sprint? １３８ironchelate) １５ １?５ 大量元素２mol/L MgSO４?７H２O ４９３ １ 微量元素H３BO３ ２?８６ １ 微量元素MnCl２?４H２O １?８１ １ 微量元素ZnSO４?７H２O ０?２２ １ 微量元素CuSO４?５H２O ０?０８ １ 微量元素H２MoO４?H２O(或Na２MoO４?２H２O) ０?０９(０?１２) １１ 磷酸盐１mol/LKH２PO４ １３６ １
分别取不同元素储存液１mL、１?５mL和２?５mL,加入蒸馏水或去离子水中,定容至１L,调节pH 至
合适值,分装,１１５℃高压灭菌３０min,备用.
注意事项:若作为复合肥使用,可以采用天然水配制,省略微量元素液.若作为无土栽培营养液需用
人工软水配制,如蒸馏水,微量元素液必需加入.经常将上述营养液配成１０倍或２０倍浓度,用时稀释即
可.注意用前调整pH.
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