GB 31658.35-2026 食品安全国家标准 动物性食品中碘醚柳胺残留量的测定 液相色谱—串联质谱法

ICS 67.050 CCS X 04

中华 人民 共和 国国 家标 准

GB 31658.35—2026

食品安全国家标准

动物性食品中碘醚柳胺残留量的测定

液相色谱-串联质谱法

National food safety standard—

Determination of rafoxanide residue in animal derived food— Liquid chromatography-tandem mass spectrometry method

2026-04-24 发布

 

2026-10-01 实施

发布

中华 人民 共和 国农 业农 村部中华人民共和国国家卫生健康委员会国家 市场 监督 管理 总局

GB 31658 .35—2026

前言

本文件按照 GB/T

1 .1—2020« 标准化工作导则

第 1 部分 : 标准化文件的结构和起草规则»的规定

起草。

Ⅰ

GB 31658 .35—2026

食品安全国家标准

动物性食品中碘醚柳胺残留量的测定

液相色谱串联质谱法

1 范围

本文件规定了牛羊可食性组织及牛奶、羊奶中碘醚柳胺残留量检测的制样和液相色谱串联质谱测定

方法。

本文件适用于牛和羊的肌肉、脂肪、肝脏、肾脏和牛奶、羊奶中碘醚柳胺残留量的测定。

2 规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中 ,注日期的引用文件 ,仅该日期对应的版本 适用 于本 文件 ; 不注 日期 的引 用文 件 , 其最 新版 本(包括 所有 的修 改单)适用 于本文件。

GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

3 术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4 原理

试样中残留的碘醚柳胺 ,用 1%三乙胺乙腈溶液超声提取 , 固相萃取柱净化 ,液相色谱串联质谱法测定 ,外标法定量。

5 试剂与材料

除另有规定外 ,所有试剂均为分析纯 ,水为符合 GB/T 6682 规定的一级水。

5 .1 试剂

5 .1 .1 乙腈(CH3 CN) :色谱纯。

5 .1 .2 甲醇(CH3 OH) :色谱纯。

5 .1 .3 氨水(NH3 . H2 O) :25% ~ 28%。

5 .1 .4 甲酸(HCOOH)。

5 .1 .5 三乙胺(C6 H15 N)。

5 .2 溶液配制

5 .2 .1 0 .1%氨水溶液 :取氨水 1 mL,用水稀释至 1 000 mL,混匀。

5 .2 .2 1%三乙胺乙腈溶液 :取三乙胺 1 mL,用乙腈稀释至 100 mL,混匀。

5 .2 .3 25%氨化乙腈溶液 :取氨水 25 mL,用乙腈稀释至 100 mL,混匀。

5 .2 .4 5%甲酸乙腈溶液 :取甲酸 5 mL,用乙腈稀释至 100 mL,混匀。

5 .3 标准品

碘醚柳胺(Rafoxanide,C19 H11 Cl2 I2 NO3 ,CAS号 :22662__39__1) :纯度 ≥99 .0%。

5 .4 标准溶液制备

1

5 .4 .1 标准储备液 :取碘醚柳胺标准品适量(相当于有效成分约 10 mg) ,精密称定 ,用乙腈溶解并稀释定容至 10 mL棕色容量瓶中 ,配制成浓度为 1 .0 mg/mL 的碘醚柳胺标准储备液。 - 18 ℃以下避光保存 ,

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有效期 6 个月 .

5 .4 .2 标准中间液 :精密量取 1 .0 mg/mL 的碘醚柳胺标准储备液 1 mL,于 100 mL棕色容量瓶中 ,用乙腈稀释至刻度 ,配制成浓度为 10 μg/mL 的碘醚柳胺标准中间液 . - 18 ℃以下避光保存 ,有效期 3 个月 .

5 .4 .3 标准工作液 :精密量取 10 μg/mL 的碘醚柳胺标准中间液 1 mL,于 100 mL棕色容量瓶中 ,用乙腈稀释至刻度 ,配制成浓度为 100 μg/L的标准工作液 . 2 ℃ ~ 8 ℃避光保存 ,有效期 1 个月 .

5 .5 材料

5 .5 .1 混合型强阴离子交换固相萃取柱 :60 mg/3 mL,或相当者 .

5 .5 .2 微孔尼龙滤膜 :0 .22 μm.

6 仪器设备

6 .1 液相色谱串联质谱仪 :配电喷雾离子源 .

6 .2 分析天平 :感量为 0 .000 01 g 和 0 .01 g.

6 .3 超声波清洗器 .

6 .4 离心机 :转速 5 000 r/min.

6 .5 涡旋混合器 .

6 .6 固相萃取装置 .

6 .7 氮吹仪 .

6 .8 组织匀浆机 .

7 试样的制备与保存

7 .1 试样的制备

取适量新鲜或解冻的供试组织或空白 ,绞碎 ,并使均质 ;取适量新鲜或解冻的供试奶或空白 ,混合均匀 .

a) 取均质的供试样品 ,作为供试试样 ;

b) 取均质的空白样品 ,作为空白试样 ;

c) 取均质的空白样品 ,添加适宜浓度的标准工作液 ,作为空白添加试样 .

7 .2 试样的保存

- 18 ℃以下保存 .

8 测定步骤

8 .1 提取

准确称取试料(2±0 .05) g,置于 50 mL聚丙烯离心管中 ,加 10 .0 mL 1%三乙胺乙腈溶液 ,涡旋混匀1 min,超声提取 10 min,5 000 r/min离心 5 min,收集上清液至另一 50 mL离心管中 . 残渣中加 10.0 mL 1%三乙胺乙腈溶液 ,重复提取 1 次 ,合并 2 次上清液 ,混匀 ,取提取液 5 .0 mL备用 .

8 .2 净化

混合型强阴离子交换固相萃取柱用 25%氨化乙腈溶液 5 mL活化 ,取备用 液过 柱 , 用乙 腈 5 mL淋洗 ,抽干 ,用 5%甲酸乙腈溶液 5 mL洗脱 ,收集洗脱液 ,45 ℃水浴氮气吹干 . 加甲醇 2 .0 mL, 涡旋 1 min溶解残余物 ,0 .22 μm 微孔滤膜过滤 ,供液相色谱串联质谱仪测定 .

8 .3 标准曲线的制备

精密量取 10 μg/mL碘醚柳胺标准中间液和 100 μg/L碘醚柳胺标准工作液适量 ,用甲醇稀释配制成碘醚柳胺浓度分别为 0 .2 μg/L、1 .0 μg/L、5 .0 μg/L、20 μg/L、50 μg/L、100 μg/L、150 μg/L系列标准工作溶液 , 临用现配 ,供液相色谱串联质谱仪测定 .

8 .4 测定

8 .4 .1 液相色谱参考条件

2

GB 31658 .35—2026

a) 色谱柱 :C18 色谱柱(150 mm×2 .1 mm ,粒径 1 .8 μm) ,或相当者 ;

b) 流动相 :A 为 0 .1%氨水溶液 ,B为甲醇 ,梯度洗脱条件见表 1 ;

表 1 流动相梯度洗脱条件

时间min

A

%

B

%

0

70

30

5

0

100

8

0

100

8 .1

70

30

10 .0

70

30

c) 流速 :0 .3 mL/min;

d) 柱温 :30 ℃ ;

e) 进样量 :10 μL.

8 .4 .2 质谱参考条件

a) 电离方式 : 电喷雾电离(ESI) ;

b) 扫描方式 :负离子模式 ;

c) 检测方式 :多反应监测(MRM) ;

d) 离子源温度 :550 ℃ ;

e) 电喷雾电压 :4 500 V;

f) 气帘气压力(CUR) :35 .0 psi(氮气) ;

g) 碰撞气体(CAD) :Medium(氮气) ;

h) 雾化气(Gas1) :55 .0 psi;

i) 雾化气(Gas2) :60 .0 psi;

j) 定性离子对、定量子离子、去簇电压和碰撞能量见表 2 .

表 2 碘醚柳胺的定性离子对、定量离子对、去簇电压和碰撞能量

药物

定性离子对m/z

定量离子对m/z

去簇电压V

碰撞能量eV

碘醚柳胺

623 .7>126 .9

623 .7>126 .9

- 100

- 110

623 .7>344 .8

- 50

8 .4 .3 测定法

8 .4 .3 .1 定性测定

在相同测试条件下 ,试样溶液中碘醚柳胺的保留时间与标准溶液中碘醚柳胺的保留时间相比 ,偏差在 ±0 .1 min 以内 ,且检测到的相对离子比率 ,应当与浓度相当的标准溶液相对离子比率一致 ,其允许相对偏差不超过 ±40% .

8 .4 .3 .2 定量测定

按 8 .4 .1 和 8 .4 .2 设定仪器条件 , 以标准溶液浓度为横坐标、峰面积为纵坐标 ,绘制标准工作曲线 ,作单点或多点校准 ,按外标法计算试样中药物的残留量 ,标准溶液及试样溶液中目标物响应值均在仪器检测的线性范围内 . 标准溶液特征离子质量色谱图见附录 A. 对于试料中碘醚柳胺残留量超过仪器测定线性范围的 ,应对试样溶液采用空白基质溶液稀释后测定 .

8 .5 空白试验

取空白试样 ,采用相同的测定步骤进行平行操作 .

9 结果计算和表述

试样中碘醚柳胺的残留量按标准曲线或公式(1)计算 .

3

GB 31658 .35—2026

ω = … … … … … … … … … … … … … … (1)

式中 :

ω — 试样中待测药物残留量的数值 ,单位为微克每千克(μg/kg) ;

ρS — 标准溶液中待测药物浓度的数值 ,单位为微克每升(μg/L) ;

A — 试样溶液中待测药物的峰面积 ;

V1 — 提取溶液总体积的数值 ,单位为毫升(mL) ;

V3 — 最终定容体积的数值 ,单位为毫升(mL) ;

AS — 标准溶液中待测药物的峰面积 ;

V2 — 吸取出用于净化的提取溶液体积的数值 ,单位为毫升(mL) ;

m — 试样质量的数值 ,单位为克(g) ;

1 000 — 换算系数 .

注 :计算结果保留 3 位有效数字 .

10 方法灵敏度、正确度和精密度

10 .1 灵敏度

本方法碘醚柳胺的检出限为 1 .0 μg/kg,定量限为 2 .0 μg/kg.

10 .2 正确度

本方法碘醚柳胺在牛 肝、牛羊 奶 2 .0 μg/kg~ 20 μg/kg;牛肉、牛脂 肪 2 .0 μg/kg~ 60 μg/kg;牛肾2.0 μg/kg~80 μg/kg;羊肉 2.0 μg/kg~200 μg/kg;羊肝、羊肾 2.0 μg/kg~ 300 μg/kg;羊脂肪 2.0 μg/kg~ 500 μg/kg添加浓度的回收率为 70% ~120% .

10 .3 精密度

本方法批内相对标准偏差 ≤15% ,批间相对标准偏差 ≤20% .

4

GB 31658 .35—2026

附录 A

(资料性)

标准溶液特征离子质量色谱图

碘醚柳胺标准溶液特征离子质量色谱图见图 A.1 .

图 A.1 碘醚柳胺标准溶液特征离子质量色谱图(1 .0 μg/L)