NY/T 4494-2025 莴苣品种鉴定 SSR分子标记法

１　范围
本文件规定了利用简单重复序列(SSR)标记进行莴苣(Lactucasativa L?)品种鉴定的操作程序、结
果统计与结果判定.
本文件适用于莴苣品种SSR指纹数据采集、数据库构建和品种鉴定.
２　规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,
仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文
件.
GB/T３５４３?２农作物种子检验规程　扦样
GB/T６６８２分析实验室用水规格和试验方法
NY/T２５９４植物品种鉴定　DNA 分子标记法　总则
３　术语和定义
NY/T２５９４规定的术语和定义适用于本文件.
４　缩略语
下列缩略语适用于本文件.
APS:过硫酸铵(ammoniumpersulphate)
bp:碱基对(basepair)
CTAB:十六烷基三甲基溴化铵(cetyltrimethylammoniumbromide)
DNA:脱氧核糖核酸(deoxyribonucleicacid)
dNTPs:脱氧核糖核苷三磷酸(deoxyＧribonucleosidetriphosphate)
EDTA:乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraaceticacid)
PAGE:聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamidegelelectrophoresis)
PCR:聚合酶链式反应(polymerasechainreaction)
SSR:简单重复序列(simplesequencerepeat)
Taq 酶:耐热DNA 聚合酶(TaqＧDNApolymerase)
Tris:三羟甲基氨基甲烷(Tris(hydroxymethyl)methylaminomethaneTHAM)
TE:三羟甲基氨基甲烷乙二胺四乙酸(TrisＧEDTA)
TBE:三羟甲基氨基甲烷硼酸盐乙二胺四乙酸(TrisＧborateＧEDTA)
TEMED:四甲基乙二胺(N,N,N′,N′Ｇtetramethylethylenediamine)
５　原理
不同莴苣品种基因组中SSR的重复次数存在差异,这种差异可通过PCR扩增及电泳方法进行检测,
进而区分不同的莴苣品种.
６　主要仪器设备及试剂
主要仪器设备及试剂见附录A.
１
NY/T４４９４—２０２５
７　溶液配制
溶液配制方法见附录B.
８　引物相关信息
引物名单及序列见附录C,引物相关信息见附录D.
９　参照品种
参照品种相关信息见附录E.
１０　操作程序
１０?１
样品准备
送检样品可为种子、幼苗、叶片等组织或器官.样品需扦样时,应符合GB/T３５４３?２的要求.每份样
品取不少于３０个个体的叶片或其他等效物,混合分析,必要时进行个体检测.
１０?２
DNA 提取
取幼苗或叶片２００mg~３００mg,置于２?０mL离心管,加液氮充分研磨;每管加入６００μL经６５℃预
热的CTAB提取液,充分混合,６５℃水浴４５min~６０min,其间多次轻缓颠倒混匀.每管加入与CTAB
提取液等体积的三氯甲烷和异戊醇混合液,轻缓混匀后静置１０min,在１２０００r/min离心１０min.吸取
上清液转移至新的离心管中,加入等体积预冷的异丙醇,轻轻颠倒混匀,－２０ ℃放置３０ min,４ ℃、
１２０００r/min离心１０min.弃上清液,用体积分数为７０％的乙醇溶液洗涤２遍,晾干,加入１００μL双蒸
水或TE缓冲液充分溶解,检测DNA 浓度后４℃备用.
注１:以上为推荐的DNA提取方法,DNA质量能够满足PCR扩增要求的其他DNA提取方法均适用.DNA溶液的紫
外吸光度OD２６０与OD２８０的比值宜介于１?７~２?０.
注２:三氯甲烷和异戊醇混合液中三氯甲烷与异戊醇的体积比为２４∶１.
１０?３
PCR 扩增
１０?３?１　反应体系
PCR扩增反应体系的总体积和各组分的终浓度参照表１配制,可以依据试验条件调整.表１中的缓
冲液若含有氯化镁(MgCl２),不再加MgCl２溶液,加等体积双蒸水替代.利用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳
(PAGE)检测时选择普通引物;利用荧光毛细管电泳检测时选择荧光标记引物,荧光标记位于上游引物５′
端,推荐的荧光标记见附录D.
表１　PCR 扩增反应体系
反应组分原浓度终浓度推荐加样体积,μL
１０×缓冲液(含MgCl２) １０× １× ２?０
dNTPs １０mmol/L ０?１mmol/L ０?２
Taq 酶５U/μL ０?０５U/μL ０?２
上游引物１０μmol/L ０?２５mmol/L ０?５
下游引物１０μmol/L ０?２５mmol/L ０?５
DNA ５０ng/μL ５ng/μL ２?０
双蒸水— — １４?６
总体积２０?０
１０?３?２　反应程序
推荐反应程序为:９５℃预变性５min;９５℃变性３０s,５７℃退火３０s,７２℃延伸１min,共３５个循环;
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７２℃延伸１０min,产物４℃保存.反应程序中各反应参数可根据PCR扩增仪型号、酶、引物等不同而做
适当的调整.
１０?４
PCR 产物检测
１０?４?１　变性PAGE
１０?４?１?１　制胶
用洗涤剂将玻璃板清洗干净,再用双蒸水、无水乙醇分别擦洗２遍.玻璃板干燥后,将０?５mL亲和
硅烷工作液均匀涂在长玻璃板上,将０?５mL剥离硅烷工作液均匀涂在带凹槽的短玻璃板上.操作过程
中防止２块玻璃板互相污染.玻璃板彻底干燥后,将０?４mm 厚的塑料隔条整齐放在长玻璃板两侧,盖上
凹槽短玻璃板,用夹子固定,用水平仪检查玻璃胶室是否水平.配制８％PAGE胶,取２６?７mL质量分数
为３０％的PAGE胶溶液,加入６２?５mL蒸馏水、５０μL四甲基乙二胺(TEMED)和５５０μL质量分数为１０％的
过硫酸铵(APS),迅速混匀,将胶灌入玻璃胶室,灌胶过程中防止出现气泡.待胶室灌满后,在凹槽处将
０?４mm 厚鲨鱼齿梳子平齐端向里轻轻插入胶液约４mm.室温聚合１h以上.胶聚合后,清理胶板表面
溢出的胶液,轻轻拔出梳子,用水清洗干净备用.
注:为保证检测结果的准确性,建议玻璃板的规格为４５cm×３５cm.
１０?４?１?２　变性
在２０μLPCR产物中加入４μL６×加样缓冲液,混匀.在PCR仪上运行９５℃变性５min,取出立即
置于冰上,冷却１０min以上备用.
１０?４?１?３　电泳
将胶板安装于电泳槽上,在电泳正极槽(下槽)加入６００mL的１×TBE缓冲液,负极槽(上槽)加入
６００mL经的１×TBE缓冲液,使其超过凝胶顶部约３cm.８０W 恒功率预电泳１０min~２０min.用移液
器吹吸加样槽,清除气泡和杂质.将样品梳(鲨鱼齿朝下)插入凝胶１mm~２mm.每一个加样孔点入
３μL~５μL样品.除送检样品外,还应同时加入参照品种扩增产物.８０W 恒功率电泳,电泳时间参考二
甲苯青指示带移动的位置和扩增产物预期片段大小范围(见附录D)加以确定.二甲苯青指示带在８％
PAGE胶电泳的移动位置与２３０bp扩增产物泳动的位置大致相当.扩增产物片段大小在(１００±３０)bp、
(１５０±３０)bp、(２００±３０)bp、(２５０ ± ３０)bp范围的,电泳参考时间分别为１?５h、２?０h、２?５h、３?５h.
电泳结束后关闭电源,取下玻璃板并轻轻撬开,通常凝胶附着在长玻璃板上.
１０?４?１?４　染色
将附着凝胶的长玻璃板胶面向上浸入固定液中,轻轻晃动３min后取出,在双蒸水中快速漂洗,时间
不超过１０s;将胶板放入染色液中,轻轻晃动５min后取出,在双蒸水中快速漂洗,时间不超过１０s;将胶板
放入显影液中,轻摇晃动待条带清晰后取出,再迅速放入固定液中定影５min取出,在双蒸水中漂洗１min;
取出胶板,晾干,放在胶片观察灯上观察,记录结果,拍照保存.
注:固定液、染色液、双蒸水和显影液的用量,可依据胶板数量和大小调整,以淹没胶面为准.
１０?４?２　荧光毛细管电泳
１０?４?２?１　PCR产物样品准备
按照预先确定的引物分组,分别取等体积的同一组中不同荧光引物的扩增产物,混匀稀释.从混合液
中吸取１μL,加入DNA 分析仪专用９６孔板中.板中各孔分别加入０?１μL分子量内标和８?９μL去离子
甲酰胺,在PCR仪上９５℃变性５min,取出后立即置于冰上,冷却１０min以上,瞬时离心１０s后备用.
注:引物分组和稀释倍数通过荧光毛细管电泳预实验确定.
１０?４?２?２　等位变异检测
打开DNA 分析仪,检查仪器工作状态和试剂状态.将装有样品的９６孔上样板放置于样品架基座
上,打开数据收集软件,按照仪器使用手册,编辑样品表,执行运行程序,DNA 分析仪将自动运行,并保存
电泳原始数据.
３
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１０?５　数据分析
１０?５?１　数据读取
每个SSR位点的等位变异参照扩增片段大小命名,见附录D.对于变性PAGE,将送检样品在某一
位点扩增片段的迁移位置与对应的参照品种进行比较,确定送检样品在该位点的等位变异.对于荧光毛
细管电泳,通过参照品种消除不同批次间或者不同型号DNA 分析仪间可能存在的系统误差,使用片段分
析软件读取送检样品在该位点的等位变异.
纯合位点的等位变异数据记为X/X,杂合位点的等位变异数据记录为X/Y,其中X、Y 分别为该位点
上的２个等位变异,小片段数据在前,大片段数据在后.缺失位点的等位变异数据记录为０/０.
示例１:样品在某个位点上仅出现１个等位变异,为１６０bp,则该位点的等位变异数据记录为１６０/１６０.
示例２:样品在某个位点上有２个等位变异,分别为１６０bp、１６５bp,则该位点的等位变异数据记录为１６０/１６５.
１０?５?２　数据比对
将送检样品每个位点的等位变异数据逐一比对,按照位点相同、差异、数据缺失、无法判定等情形,记
录每个位点的结果.
１１　结果统计
统计比对结果为位点差异的情况,计算差异位点数.
１２　结果判定
１２?１
判定规则
当品种间差异位点数＞２,判定为“不同”;当品种间差异位点数≤２,判定为“疑同”;当品种间差异位
点数≤２,但存在位点数据缺失或无法判定情形时,不做判定.
１２?２
结果表述
送检样品与对照样品(或数据库中品种)采用检测平
台,检测位点数为,差异位点数为,判定为.当存在位点数据缺失或无
法判定情形时,应表述具体情况.
示例１:送检样品A与对照样品B采用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测平台,检测位点数为２２,差异位点数为２,判定为
疑同.
示例２:送检样品A与对照样品B采用荧光毛细管电泳检测平台,检测位点数为２２,差异位点数为１,送检样品在
WSULs１５９位点数据缺失.
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附　录　A
(规范性)
主要仪器设备及试剂

A?１　主要仪器设备
A?１?１　PCR扩增仪.
A?１?２　高压电泳仪:最高电压不低于２０００V,具有恒电压、恒电流和恒功率功能.
A?１?３　垂直电泳槽及配套的制胶附件.
A?１?４　离心机.
A?１?５　水平摇床.
A?１?６　胶片观察灯.
A?１?７　电子天平:感量为０?１g和０?０１g.
A?１?８　微量移液器:规格分别为１０μL、２０μL、１００μL、２００μL、１０００μL,连续可调.
A?１?９　磁力搅拌器.
A?１?１０　核酸浓度测定仪或超微量紫外分光光度计.
A?１?１１　微波炉.
A?１?１２　高压灭菌锅.
A?１?１３　酸度计.
A?１?１４　水浴锅.
A?１?１５　低温冰箱.
A?１?１６　制冰机.
A?１?１７　凝胶成像系统或紫外透射仪.
A?１?１８　DNA 分析仪:基于毛细管电泳,有片段分析功能和数据分析软件,最低区分力１bp.
A?１?１９　其他相关仪器和设备.
A?２　主要试剂
除非另有说明,在分析中均使用分析纯试剂.
A?２?１　十六烷基三甲基溴化铵[CTAB,C１６H３３(CH３)３NBr,CAS号:５７Ｇ０９Ｇ０].
A?２?２　三氯甲烷(CHCl３,CAS号:６７Ｇ６６Ｇ３).
A?２?３　异戊醇(C５H１２O,CAS号:１２３Ｇ５１Ｇ３).
A?２?４　异丙醇[(CH３)２CHOH,CAS号:６７Ｇ６３Ｇ０].
A?２?５　乙二胺四乙酸二钠(EDTAＧNa,C１０H１４N２Na２O８,CAS号:１３９Ｇ３３Ｇ３).
A?２?６　三羟甲基氨基甲烷(Tris,C４H１１NO３,CAS号:７７Ｇ８６Ｇ１).
A?２?７　浓盐酸(HCl,CAS号:７６４７Ｇ０１Ｇ０).
A?２?８　氢氧化钠(NaOH,CAS号:１３１０Ｇ７３Ｇ２).
A?２?９　１０×PCR缓冲液:含Mg２＋２５mmol/L.
A?２?１０　４种脱氧核糖核苷酸:dATP、dTTP、dGTP、dCTP.
A?２?１１　氯化钠(NaCl,CAS号:７６４７Ｇ１４Ｇ５).
５
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A?２?１２　Taq DNA 聚合酶(Taq 酶,CAS号:９０１２Ｇ９０Ｇ２).
A?２?１３　DNA Marker:DNA 片段分布范围在５０bp~５００bp.
A?２?１４　甲酰胺(CH３NO,CAS号:７５Ｇ１２Ｇ７).
A?２?１５　溴酚蓝(C１９H１０Br４O５S,CAS号:１１５Ｇ３９Ｇ９).
A?２?１６　二甲苯青(C２５H２７N２NaO６S２,CAS号:２６５０Ｇ１７Ｇ１).
A?２?１７　甲叉双丙烯酰胺[(H２C＝CHCONH)２CH２,CAS号:１１０Ｇ２６Ｇ９].
A?２?１８　丙烯酰胺(C３H５NO,CAS号:７９Ｇ０６Ｇ１).
A?２?１９　硼酸(H３BO３,CAS号:１００４３Ｇ３５Ｇ３).
A?２?２０　尿素(CH４N２O,CAS号:５７Ｇ１３Ｇ６).
A?２?２１　亲和硅烷.
A?２?２２　剥离硅烷.
A?２?２３　无水乙醇(C２H６O,CAS号:６４Ｇ１７Ｇ５).
A?２?２４　四甲基乙二胺(TEMED,C６H１６N２,CAS号:１１０Ｇ１８Ｇ９).
A?２?２５　过硫酸铵[APS,(NH４)２S２O８,CAS号:７７２７Ｇ５４Ｇ０].
A?２?２６　冰醋酸(CH３COOH,CAS号:６４Ｇ１９Ｇ７).
A?２?２７　硝酸银(AgNO３,CAS号:７７６１Ｇ８８Ｇ８).
A?２?２８　甲醛(HCHO,CAS号:５０Ｇ００Ｇ０).
A?２?２９　DNA 分析仪用丙烯酰胺胶液.
A?２?３０　DNA 分析仪用分子量内标.
A?２?３１　DNA 分析仪用电泳缓冲液.
A?２?３２　DNA 分析仪用光谱校准基质.
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附　录　B
(规范性)
溶液配制

试剂配制用水需符合GB/T６６８２的要求.
B?１　DNA 提取溶液的配制
B?１?１　０?５mol/LEDTA 溶液
称取１８６?１gNa２EDTA?２H２O,溶于８００mL水中,充分搅拌溶解,加NaOH 调pH 至８?０,加水定
容至１０００mL,１２１℃高压灭菌２０min.
B?１?２　０?５mol/LHCl溶液
量取２５mL浓盐酸(质量分数为３６％ ~３８％),加水定容至５００mL.
B?１?３　１mol/LNaOH 溶液
称取４０?０gNaOH,溶于８００mL水中,充分搅拌溶解,加水定容至１０００mL.
B?１?４　１mol/LTrisＧHCl溶液
称取１２１?１gTris碱,溶于８００mL 水中,充分搅拌溶解,加HCl调pH 至８?０,加水定容至１０００
mL,１２１℃高压灭菌２０min.
B?１?５　CTAB提取液
称取２０?０gCTAB、８１?７gNaCl置于１０００mL烧杯中,量取１００mL１mol/LTrisＧHCl溶液和４０mL
０?５mol/LEDTA 溶液倒入烧杯中,加７００mL水,充分搅拌溶解,加水定容至１０００mL,１２１℃高压灭菌
２０min.
B?１?６　TE缓冲液
量取５mL１mol/LTrisＧHCl溶液和１mL０?５mol/LEDTA 溶液,加水定容至５００mL,１２１℃高压
灭菌２０min,４℃保存.
B?２　PCR 扩增试剂的配制
B?２?１　dNTP溶液
分别配制dATP、dTTP、dCTP、dGTP终浓度为１００mmol/L的储存液.各取２０μL混合,加１２０μL
TE缓冲液定容,配制成每种脱氧核糖核苷酸终浓度为１０mmol/L的工作液,１２１℃高压灭菌２０min,－
２０℃保存.
B?２?２　SSR 引物溶液
开盖前瞬时离心１０s,按照说明书加TE缓冲液分别配制正向引物和反向引物终浓度为１００μmol/L
的储存液,取１０μL储存液,加９０μLTE缓冲液配制成终浓度１０μmol/L的工作液.
B?３　变性PAGE试剂的配制
B?３?１　质量分数为３０％PAGE胶溶液
称取２９０?０g丙烯酰胺和１０?０g甲叉双丙烯酰胺,溶于８００mL水中,充分搅拌溶解,加水定容至１０００
mL,置于棕色瓶中,４℃储存.
B?３?２　亲和硅烷缓冲液
分别量取９９?５mL无水乙醇和５００μL冰醋酸,混匀.
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B?３?３　亲和硅烷工作液
分别量取１mL亲和硅烷缓冲液和５μL亲和硅烷原液,混匀.
B?３?４　剥离硅烷工作液
分别量取９８mL氯仿溶液和２mL二甲基二氯硅烷溶液,混匀.
B?３?５　质量分数为１０％的APS溶液
称取１?０g过硫酸铵,溶于１０mL去离子水中,混匀,于４℃保存(不超过５d).
B?３?６　１０×TBE缓冲液
称取Tris１０８?０g、硼酸５５?０g,溶于８００mL水中,加入３７mLEDTA 溶液(０?５mol/L,pH８?０),定
容至１０００mL.
B?３?７　１×TBE缓冲液
量取５０mL１０×TBE缓冲液,加水定容至５００mL,混匀.
B?３?８　６×加样缓冲液
分别称取０?２５g溴酚蓝和０?２５g二甲苯青,加入９８mL去离子甲酰胺和２mLEDTA 溶液(０?５mol/L,
pH８?０),搅拌溶解.
B?４　银染溶液的配制
B?４?１　固定液
量取１００mL冰醋酸,加水定容至１０００mL.
B?４?２　染色液
称取１?０g硝酸银,加水定容至１０００mL.
B?４?３　显影液
称取１０?０g氢氧化钠,溶于１０００mL水中,用前加２mL甲醛.
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附　录　C
(规范性)
引物名单及序列

引物名单及序列见表C?１.
表C?１　引物名单及序列
引物
编号
引物名称
参考
文献
所在
染色体
上游引物序列(５′→３′) 下游引物序列(５′→３′)
WJ０１ WSULs１５９ [４] Chr１ GGACTTCACTAGTCGACGACATC GCTTGTCTTTCCAACCCAAAAG
WJ０２ WSULs１５３ [４] Chr２ ACCGCTCTCACTCTGAGCACAC CAGTTTGTGCTAGCGTTTCACCA
WJ０３ LSEＧ６４ [７] Chr２ CTAGTTCTTCTGCTGCTAGG GATAGGATCGGATCGGATTG
WJ０４ KSLＧ９２ [１] Chr３ GGTCTCTTTCCTCTGCCCTG TCGCGTTCTGAAGTAGCCAT
WJ０５ LSEＧ５６ [７] Chr３ CCTCCATAACCAAAACCTCA ACTTCTTTCGACATGCTTCT
WJ０６ SSRＧ８ [６] Chr３ GTTGTCTCGTCTCGACCAAA GCGTTCTGAAGTAGCCATGG
WJ０７ WSULs１６２ [４] Chr４ TTTCTCGCTTTCTCTCCTTTCC CAAATCTCCACCCCCAAATAGG
WJ０８ KSLＧ３２ [１] Chr４ CGGGGAGCATTTAGTGTGTG AATTTGGGGTCCGATTTGAG
WJ０９ LSEＧ８３ [７] Chr４ CCGAAAACAGCCTTGCATCT GTATTGTAGCTGACGGTGGC
WJ１０ LSSA２８Ｇ１ [３] Chr４ TTCATCTCTCTCCTCCTTCAGC ATCCCCATTGTCCTCCC
WJ１１ LiＧ１ [２] Chr５ TTTACCTCCCACCACACACA CCGGCGATTCCATTATTGAT
WJ１２ LSEＧ７９ [７] Chr５ TTGATACCTCCGCCATCCTC AGCACAGAAAACACACACACA
WJ１３ KSLＧ２４５ [１] Chr６ CTTCACCTCCGGAATCCTGT GAGGCACGACTGCCATTTAG
WJ１４ KSLＧ９７ [１] Chr６ CGCAGAAAAGGGATCAGACA TCAGAGACACTGCAAAAGGGA
WJ１５ SH４２ [８] Chr６ GCAAGCTAAAGGGCTTTTTGT CAGCCTGGGAATATTTACTCTGA
WJ１６ WSULs１８ [４] Chr７ GAAGGTGGTGGGTTGCTGTC TGGGCAATTGCAGATTGAGA
WJ１７ SSRＧ１５ [６] Chr８ CAGATCAAGCGGGTAACTAA TATCAAGACCCTAAGCGAAC
WJ１８ LSSA０５ [３] Chr８ AGAACAACGGTAGCTTGTTAAATTG ATCGTCGGTTAATCTTCGTCG
WJ１９ LSSA２１Ｇ１ [３] Chr８ TTGTACCCAGTTGTCCAAACAG CAGATTGTTGCAGATTTCTTCG
WJ２０ SMLＧ００２ [５] Chr９ GTGATTGCATGCCAAATGAA TTAGTAGCCCGCATGCTTTT
WJ２１ SMLＧ０１５ [５] Chr９ TTGAGGAGGGCATTTACGTC GAGGCGTATCTCCAAGGTGT
WJ２２ LSEＧ７７ [７] Chr９ TGTCCACAGATCAGCGATGA CTGGACAGTCGGGATCAGAA
注:表中２２对引物主要参考文献[１]HongJH,２０１５;[２]OliyaBK,２０１８;[３]PatellaA,２０１９;[４]RiarDS,２０１１;[５]SimkoI,
２００９;[６]WangS,２０１７;[７]ZhangG W,２０１６;[８]ZhouH,２０１９.
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附　录　D
(资料性)
引物相关信息

引物相关信息见表D?１.
表D?１　引物相关信息
引物编号引物名称荧光标记等位变异范围,bp 主要等位变异,bp 参照品种
WJ０１ WSULs１５９ TAMRA １７７~２０２
１７７ 火棍笋
１８０ R１２２６
１８２ 香优九号
１８４ N１１７５
１８６ 红莴笋１
１８８ S１２４０
１９０ 红莴笋２
１９２ KNV０００２５６
１９４ 耐寒二白皮
１９６ 尖叶莴笋
１９８ 青皮臭
２００ L５２５
２０２ KAY００８
WJ０２ WSULs１５３ HEX １８８~２１８
１８８ KNV０００２４５
１９２ N７２７
１９４ 红福
１９６ 火棍笋
１９８ 红莴笋１
２００ 耐寒二白皮
２０２ 青皮臭
２０４ 香优九号
２０６ N１１４５
２０８ 紫叶莴笋
２１０ L１０４３
２１２ 白皮笋
２１４ S１２４０
２１６ KAY００８
２１８ KNV０００２８０
WJ０３ LSEＧ６４ TAMRA １５１~１７９ １５１ 耐寒二白皮
WJ０３ LSEＧ６４ TAMRA １５１~１７９
１５３ 红莴笋１
１５５ 火棍笋
１５７ 青皮臭
１５９ 红福
１６１ 紫叶莴笋
１６３ KAY００８
１６７ KNV０００２４１
１７５ N１１４５
１７７ KNV０００２５９
１７９ KNV０００２５６
１０
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表D?１　(续)
引物编号引物名称荧光标记等位变异范围,bp 主要等位变异,bp 参照品种
WJ０４ KSLＧ９２ FAM １６９~１９９
１６９ N１１９４
１７７ N１１３６
１７９ 红福
１８５ 红莴笋１
１８７ 光叶莴苣
１８９ 青皮臭
１９１ 火棍笋
１９３ 沪优仕
１９５ 尖叶莴笋
１９７ L１０４３
１９９ 酱笋
WJ０５ LSEＧ５６ FAM ９０~１３６
９０ N１１９４
９２ 白皮笋
１１８ L１０４３
１２０ N１１４５
１２４ 沪优仕
１２６ B２００
１２８ 火棍笋
１３０ 青皮臭
１３２ 红莴笋２
１３４ L１０３５
１３６ R１２２６
WJ０６ SSRＧ８ TAMRA １５１~１７３
１５１ N１１３６
１５３ 红福
１５９ 红莴笋１
１６１ 光叶莴苣
１６３ 青皮臭
１６５ 火棍笋
WJ０６ SSRＧ８ TAMRA １５１~１７３
１６７ N１１３６
１６９ KAY００８
１７１ L１０４３
１７３ KNV０００２４６
WJ０７ WSULs１６２ ROX ２４８~２７０
２４８ KNV０００２５９
２５０ L１０３５
２５２ 紫叶莴笋
２５４ R１２２６
２５６ L４８９
２５８ 青皮臭
２６０ 火棍笋
２６２ 耐寒二白皮
２６４ 香优九号
２６６ 红福
２６８ N１１４５
２７０ KNV０００２５８
１１
NY/T４４９４—２０２５
表D?１　(续)
引物编号引物名称荧光标记等位变异范围,bp 主要等位变异,bp 参照品种
WJ０８ KSLＧ３２ ROX ２０１~２１９
２０１ 火棍笋
２０７ L５２５
２０９ B２００
２１１ 青皮臭
２１３ KNV０００２８５
２１５ 红福
２１７ R１２２６
２１９ SYＧ９
WJ０９ LSEＧ８３ TAMRA １７６~２２２
１７６ KNV０００２８５
１７８ S１２５１
１８０ KAY００８
１８２ R１２２６
１８４ L４８９
１８６ B２００
１８８ 灰叶莴苣
１９０ 青皮臭
１９２ 火棍笋
WJ０９ LSEＧ８３ TAMRA １７６~２２２
１９４ 红莴笋１
１９６ KNV０００２８６
１９８ 红莴笋２
２００ 沪优仕
２０２ KNV０００２５１
２０４ 红福
２０６ 紫叶莴笋
２１０ KNV０００２５８
２１２ KNV０００２５８
２１６ 香优九号
２１８ 香优九号
２２０ 白皮香莴笋
２２２ 白皮香莴笋
WJ１０ LSSA２８Ｇ１ FAM １３６~１８２
１３６ KNV０００２４１
１４０ KNV０００２８６
１４１ 圆叶白皮笋
１４２ 布莱克柔丝
１４４ KNV０００２５９
１４６ N１１４５
１４８ 四季白尖叶
１５０ N７２７
１５４ KNV０００２４６
１５６ KNV０００２８０
１５８ KNV０００２４５
１６０ KAY００８
１６２ 尖叶莴笋
１６４ 红莴笋１
１６６ 紫叶笋
１６８ L１０４３
１７０ 青皮臭
１７２ 香优九号
１７４ 火棍笋
１７６ 白皮笋
WJ１０ LSSA２８Ｇ１ FAM １３６~１８２ １８０ 耐寒二白皮
１８２ S１２４０
１２
NY/T４４９４—２０２５
表D?１　(续)
引物编号引物名称荧光标记等位变异范围,bp 主要等位变异,bp 参照品种
WJ１１ LiＧ１ FAM ２００~２１２
２００ N１１４５
２０３ 青皮臭
２０９ N１１９４
２１２ B２００
WJ１２ LSEＧ７９ ROX １５０~２０４
１５０ 红莴笋２
１５６ 碧霄
１５８ R１２２６
１６０ 沪优仕
１６２ 紫叶莴笋
１６４ 青皮臭
１６６ 火棍笋
１６８ KNV０００２４１
１７０ 光叶莴苣
１７２ 香优九号
１７４ SYＧ８
１７６ KNV０００２４６
１７８ KAY００８
１８０ B２００
１８２ R７５２
１８４ LS１５５２３
１９２ KNV０００２５２
１９４ KNV０００２５１
１９６ 沪优仕
２００ N１１４５
２０２ N１１４５
２０４ N７４５
WJ１３ KSLＧ２４５ FAM ２５３~２７３
２５３ B２００
２５５ N１１４５
２５７ N１１３６
２６５ 红福
２６７ 沪优仕
２６９ S１２４０
２７１ 青皮臭
２７３ 火棍笋
WJ１４ KSLＧ９７ HEX ２２１~２３３ ２２１ S１２４０
２２７ 紫叶莴笋
WJ１４ KSLＧ９７ HEX ２２１~２３３
２２９ 青皮臭
２３１ KNV０００２５６
２３３ N１１９４
WJ１５ SH４２ TAMRA ２６５~３０７
２６５ 沪优仕
２６８ KNV０００２８３
２７１ 尖叶莴笋
２７４ L１０２５
２７７ 沪优仕
２８０ 火棍笋
２８６ N１１３６
２９２ L５２５
２９５ KAY００８
２９８ N１１７５
３０１ 红莴笋１
３０４ 紫叶莴笋
３０７ 青皮臭
１３
NY/T４４９４—２０２５
表D?１　(续)
引物编号引物名称荧光标记等位变异范围,bp 主要等位变异,bp 参照品种
WJ１６ WSULs１８ ROX ２０７~２６０
２０７ 沪优仕
２１０ KAY００８
２３３ KNV０００２５８
２３６ M５７７
２３９ 紫叶笋
２４８ 沪优仕
２５４ 火棍笋
２５７ 白皮笋
２６０ 尖叶莴笋
WJ１７ SSRＧ１５ FAM １３７~１５５
１３７ N１１７５
１４２ 尖叶莴笋
１４４ 紫叶笋
１４７ S１２５１
１４９ 红莴笋２
１５１ N１１７５
１５３ N７２７
１５５ 碧霄
WJ１８ LSSA０５ ROX ２４９~２８７
２４９ KAY００８
２５５ N１１７５
２５９ N１１７５
２６３ KAY００８
２６７ 沪优仕
WJ１８ LSSA０５ ROX ２４９~２８７
２６９ KNV０００２４５
２７１ 红福
２７３ 青皮臭
２７５ 沪优仕
２７７ KNV０００２４１
２７９ 紫叶莴笋
２８１ M１０６７
２８３ N７２７
２８５ L１０４３
２８７ S１２５１
WJ１９ LSSA２１Ｇ１ HEX ２６９~３３１
２６９ N１１９４
２７３ KNV０００２４５
２７９ R１２２６
２８１ S１２４０
２８３ 青皮臭
２８５ N１１４５
２８７ 尖叶莴笋
２８９ S１２５１
２９１ 火棍笋
２９３ 酱笋
２９５ 白皮香莴笋
２９７ 沪优仕
２９９ KNV０００２５６
３０１ 光叶莴苣
３０３ 紫叶笋
３０５ KNV０００２５９
３０９ L５２５
３３１ L４８９
１４
NY/T４４９４—２０２５
表D?１　(续)
引物编号引物名称荧光标记等位变异范围,bp 主要等位变异,bp 参照品种
WJ２０ SMLＧ００２ FAM １６９~２２３
１６９ KNV０００２８６
１８４ 青皮臭
１９０ N１１４５
１９６ 灰叶莴苣
１９９ M１０６７
２０２ 碧霄
２０８ 沪优仕
２１１ 红莴笋１
２１４ N７２７
２１７ 火棍笋
WJ２０ SMLＧ００２ FAM １６９~２２３ ２２０ 耐寒二白皮
２２３ 红福
WJ２１ SMLＧ０１５ FAM ２４０~２７０
２４０ 沪优仕
２４５ 红福
２５０ KNV０００２８３
２５５ 沪优仕
２６０ S１２４０
２６５ 尖叶莴笋
２７０ R１２２６
WJ２２ LSEＧ７７ TAMRA １８９~２１３
１８９ 绿叶鲫瓜笋
１９１ KNV０００２４５
１９３ KNV０００２８３
１９５ 绿叶鲫瓜笋
１９７ 紫叶莴笋
１９９ N７２７
２０１ N１１７５
２０３ R１２２６
２０７ S１２５１
２０９ SYＧ９
２１１ KNV０００２５６
２１３ KNV０００２５６
注１:附录D中采用的荧光标记仅为示例,采用其他荧光标记类型时,需要用参照品种校正数据.
注２:对于附录D中未包括的等位变异,应按本文件方法,确定其大小和相应参照品种.
注３:附录D中所列参照品种仅为示例,与参照品种具有相同等位变异的其他品种也可用作该等位变异的参照品种.
注４:品种右上角的编号,１———保藏编号为V０９F００６４,２———保藏编号为V０９F００７７.
１５
NY/T４４９４—２０２５
附　录　E
(资料性)
参照品种相关信息

参照品种相关信息见表E?１.
表E?１　参照品种相关信息
编号品种名称/代号品种来源保藏编号编号品种名称/代号品种来源保藏编号
１ LS１５５２３ NCGB XIN３１７８６ ２９ SYＧ８ BAAFS —
２ KAY００８ NCGB XIN３６８６６ ３０ SYＧ９ BAAFS —
３ 耐寒二白皮NCGB XIN３３８２５ ３１ L１０４３ BAAFS —
４ 碧霄NCGB XIN４０９６４ ３２ S１２５１ BAAFS —
５ 布莱克柔丝NCGB XIN３９６４７ ３３ L１０２５ BAAFS —
６ 四季白尖叶NCGB XIN３３１３０ ３４ L１０３５ BAAFS —
７ 火棍笋IVFCAAS V０９F０３６０ ３５ N１１３６ BAAFS —
８ 红莴笋IVFCAAS V０９F００６４ ３６ M５７７ BAAFS —
９ 红莴笋IVFCAAS V０９F００７７ ３７ N１１７５ BAAFS —
１０ 尖叶莴笋IVFCAAS V０９F０１９０ ３８ N１１４５ BAAFS —
１１ 青皮臭IVFCAAS V０９F０２１６ ３９ N７４５ BAAFS —
１２ 绿叶鲫瓜笋IVFCAAS V０９F０１３０ ４０ L５２５ BAAFS —
１３ 紫叶莴笋IVFCAAS V０９F０２６８ ４１ N１１９４ BAAFS —
１４ 紫叶笋IVFCAAS V０９F０１２０ ４２ M１０６７ BAAFS —
１５ 酱笋IVFCAAS V０９F０１２３ ４３ N７２７ BAAFS —
１６ 白皮笋IVFCAAS V０９F０２６０ ４４ KNV０００２４１ SAGC —
１７ 白皮香莴笋IVFCAAS V０９F０２１５ ４５ KNV０００２４５ SAGC —
１８ 光叶莴苣IVFCAAS V０９F０４１５ ４６ KNV０００２４６ SAGC —
１９ 灰叶莴苣IVFCAAS V０９F０３９２ ４７ KNV０００２５１ SAGC —
２０ 圆叶白皮笋IVFCAAS V０９F０２８９ ４８ KNV０００２５２ SAGC —
２１ 香优九号SSCNPVTMARA — ４９ KNV０００２５６ SAGC —
２２ 红福SSCNPVTMARA — ５０ KNV０００２５８ SAGC —
２３ 沪优仕SSCNPVTMARA — ５１ KNV０００２５９ SAGC —
２４ B２００ BAAFS — ５２ KNV０００２８０ SAGC —
２５ R７５２ BAAFS — ５３ KNV０００２８３ SAGC —
２６ L４８９ BAAFS — ５４ KNV０００２８５ SAGC —
２７ R１２２６ BAAFS — ５５ KNV０００２８６ SAGC —
２８ S１２４０ BAAFS —
注:NCGB为国家作物种质库;IVFCAAS为中国农业科学院蔬菜花卉研究所;SSCNPVTMARA为农业农村部植物新品种测
试(上海)分中心;BAAFS为北京市农林科学院;SAGC为上海市农业生物基因中心.
１６