T/CVMA 217-2025 棘球蚴（包虫）时间分辨荧光免疫层析抗体检测方法 ,该文件为pdf格式 ,请用户放心下载!
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资源简介
T/CVMA 217-2025《棘球蚴蚴（包虫）时间分辨荧光免疫层析抗体检测方法》主要内容总结
1. 标准概述
- 标准性质：中国兽医协会发布的团体标准，适用于牛、羊血清中棘球蚴蚴（包虫）抗体的检测。
- 技术原理：基于时间分辨荧光免疫层析技术（TRFIA）和双抗原夹心法，通过荧光信号（T/C值）判定抗体水平。
- 适用范围：检测牛、羊血清样本，需符合NY/T 541的采样和保存要求。
2. 核心内容
（1）试剂与耗材
- 关键试剂：
- 荧光微球检测试纸（含Eg95抗原标记的荧光微球、硝酸纤维素膜等）。
- 配套试剂（如样品稀释液、封闭液、EDC活化液等，配方见附录B）。
- 设备：便携式免疫荧光分析仪（365/610nm波段）、微量移液器、离心机等。
（2）样本处理
- 采集：按NY/T 541规范采集全血，离心分离血清，避免溶血或污染。
- 保存：短期（1周内）2~8℃保存，长期需-20℃以下冷冻，避免反复冻融。
（3）检测步骤
- 样本稀释：10μL血清与稀释液混匀（10倍稀释）。
- 加样：滴加80μL稀释样本至检测卡加样孔。
- 孵育：室温反应10~15分钟。
- 读值：插入荧光分析仪，25分钟内完成检测（超时无效）。
（4）结果判定
- 计算：仪器自动计算T/C值（检测线T值与质控线C值比值）。
- 判定标准：
- 阴性：T/C < 0.1。
- 阳性：T/C ≥ 0.1。
- 有效性：质控线（C线）信号正常且仪器显示数值有效。
3. 附录关键内容
附录A：检测试纸制备
- Eg95抗原制备：
- 基因工程表达：大肠杆菌发酵（IPTG诱导）、Ni柱纯化、SDS-PAGE验证纯度。
- 荧光微球标记：
- 微球活化（EDC/MES）、抗原偶联（15μg/mL）、封闭（酪蛋白）。
- 试纸组装：
- 各组件（样品垫、荧光微球垫、NC膜、吸水垫）层叠粘贴，切条装卡。
附录B：试剂配方
- 详细列出缓冲液（如PBS pH 8.0）、封闭液（9%酪蛋白）、EDC溶液等配制方法。
附录C：仪器操作
- ID卡：预存检测项目信息（临界值等）。
- 检测流程：插入ID卡→加样→读值→自动输出结果（可打印/上传）。
4. 其他要点
- 专利声明：标准可能涉及专利，但发布机构不承担识别责任。
- 起草单位：中国动物疫病预防控制中心牵头，多省疾控中心及企业参与。
- 实施日期：2025年2月14日发布并实施。
5. 技术优势
- 高灵敏度：时间分辨荧光技术降低背景干扰。
- 便捷性：便携式仪器支持现场快速检测（15分钟出结果）。
- 标准化：从抗原制备到结果判定的全流程规范，确保一致性。
该标准为包虫病防控提供了可靠的抗体检测方法，适用于兽医临床和疫病监测。
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