宠物饲料中牛磺酸测定标准T/CFIAS 6010-2024详细总结

一、标准概述

T/CFIAS 6010-2024是由中国饲料工业协会团体标准技术委员会提出并归口的团体标准，规定了宠物饲料中牛磺酸含量的两种测定方法：高效液相色谱法(HPLC)和液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)。该标准由中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所等多家单位共同起草，于2024年发布实施。

二、适用范围

本标准适用于各类宠物饲料中牛磺酸含量的测定，包括：

• 固体宠物饲料
• 膏状宠物饲料
• 液体宠物饲料

两种方法的定量限不同：

• 高效液相色谱法(HPLC)的定量限为100mg/kg
• 液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)的定量限为5mg/kg

三、术语和定义

标准中没有需要特别界定的术语和定义。

四、第一法：高效液相色谱法(HPLC)

1. 方法原理

试样中的牛磺酸用水提取，经蛋白质沉淀和丹磺酰氯衍生化处理后，使用高效液相色谱仪进行测定，采用外标法定量。

2. 主要试剂和材料

• 水(GB/T 6682一级)
• 乙腈(色谱纯)
• 盐酸溶液(9%)
• 亚铁氰化钾溶液(15%)
• 乙酸锌溶液(30%)
• 碳酸钠缓冲溶液(pH9.5)
• 丹磺酰氯乙腈溶液(0.1%)
• 盐酸甲胺溶液(2%)
• 乙酸钠缓冲溶液(pH4.20)
• 牛磺酸标准品(纯度≥99%)
• 微孔滤膜(0.45μm)

3. 仪器设备

• 高效液相色谱仪(配紫外检测器或二极管阵列检测器)
• 分析天平(精度0.1mg)
• 超声波清洗仪
• 离心机(≥5000r/min)
• 涡旋混合器
• 酸度计(精度±0.01)

4. 样品制备

按GB/T 20195制备试样：

• 固体试样至少200g，粉碎过0.425mm筛
• 膏状或液体样品原包装保存

5. 分析步骤

1. ​​提取​​：称取2-5g样品，加水超声提取20分钟，加入亚铁氰化钾和乙酸锌沉淀蛋白，离心取上清液
2. ​​衍生化​​：取上清液与丹磺酰氯乙腈溶液在60℃水浴反应30分钟，加入盐酸甲胺终止反应
3. ​​色谱条件​​：
   • 色谱柱：C18柱(250mm×4.6mm,5μm)
   • 检测波长：254nm
   • 流动相：A-乙酸钠缓冲液，B-乙腈
   • 梯度洗脱程序(0-18分钟)

牛磺酸标准溶液液相色谱图见图A.1：

6. 结果计算

可采用多点校准或单点校准计算：

• 多点校准：ω₁=(ρ×V×n)/m
• 单点校准：ω₁=(A×ρ×V×n)/(Aₛ×m)

7. 精密度要求

重复性条件下，两次独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的10%。

五、第二法：液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)

1. 方法原理

试样中的牛磺酸用水提取，沉淀蛋白后，直接使用液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。

2. 主要试剂和材料

• 水(GB/T 6682一级)
• 甲酸(色谱纯)
• 乙腈(色谱纯)
• 甲酸溶液(0.1%)
• 亚铁氰化钾溶液(15%)
• 乙酸锌溶液(30%)
• 牛磺酸标准品(纯度≥99%)
• 微孔滤膜(0.22μm)

3. 仪器设备

• 液相色谱-串联质谱仪(配ESI源)
• 分析天平(精度0.1mg)
• 超声波清洗仪
• 离心机(≥5000r/min)

4. 分析步骤

1. ​​提取​​：称取1-2g样品，加水超声提取20分钟，加入亚铁氰化钾和乙酸锌沉淀蛋白，离心过滤
2. ​​色谱条件​​：
   • 色谱柱：C18柱(100mm×2.1mm,1.7μm)
   • 流动相：A-0.1%甲酸溶液，B-乙腈
   • 梯度洗脱程序(0-10分钟)
3. ​​质谱条件​​：
   • 电离方式：电喷雾电离(ESI+)
   • 检测方式：多反应监测(MRM)
   • 监测离子对：126→108(定量)，126→44(定性)

牛磺酸标准溶液监测离子对(MRM)色谱图见图B.1：

5. 结果计算

可采用多点校准或单点校准计算：

• 多点校准：ω₂=(ρ×V×n)/(m×1000)
• 单点校准：ω₂=(A×ρ×V×n)/(Aₛ×m×1000)

6. 精密度要求

重复性条件下，两次独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的20%。

六、附录内容

标准包含两个资料性附录：

• 附录A：牛磺酸标准溶液高效液相色谱图
• 附录B：牛磺酸标准溶液监测离子对(MRM)色谱图

七、方法比较

八、注意事项

1. 标准中可能涉及专利内容，发布机构不承担识别专利责任
2. 标准溶液需临用现配或按规定条件保存
3. 测定时需确保响应值在线性范围内，必要时进行稀释
4. 两种方法的选择应根据样品中牛磺酸的预期含量决定