T/CFIAS 6012-2024 宠物配合饲料中8种水溶性维生素的测定液相色谱－串联质谱法 ,该文件为pdf格式 ,请用户放心下载!
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资源简介
《宠物配合饲料中8种水溶性维生素的测定 液相色谱-串联质谱法》团体标准主要内容的详细总结：
T/CFIAS 6012-2024 团体标准主要内容总结
该标准由中国饲料工业协会制定并发布，旨在规范固态宠物配合饲料中8种关键水溶性维生素的检测方法，确保结果的准确性和可比性。以下是核心内容的详细阐述：
- 范围与目的：
- 适用范围： 本标准专门适用于固态宠物配合饲料。
- 目标分析物： 规定了检测以下8种水溶性维生素的方法：维生素B1（硫胺素）、维生素B2（核黄素）、烟酸、烟酰胺、D-泛酸、维生素B6（吡哆醇）、D-生物素、叶酸。
- 核心方法： 采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS） 进行测定。
- 方法灵敏度： 明确规定了该方法的定量限（LOQ）为 0.2 mg/kg。
- 规范性引用文件：
- 该标准引用了两项基础国家标准作为支撑：
- GB/T 6682 《分析实验室用水规格和试验方法》：确保实验用水的质量。
- GB/T 20195 《动物饲料 试样的制备》：规范样品的制备过程。
- 该标准引用了两项基础国家标准作为支撑：
- 方法原理：
- 样品前处理： 试样中的目标水溶性维生素在酸性条件（盐酸溶液 II） 下进行提取，通常结合加热（50℃水浴）以提高提取效率。
- pH调节： 提取液冷却后，需用氨水溶液调节pH值至 6.0。
- 仪器分析： 处理后的样品溶液经微孔滤膜过滤后，使用液相色谱-串联质谱仪（LC-MS/MS） 进行分析。
- 定量方式：
- 内标法定量： 适用于烟酰胺和叶酸。使用相应的氘代内标物（烟酰胺-D4 和 叶酸-D4）进行校正，以提高这两类物质定量的准确度和精密度。
- 外标法定量： 适用于维生素B1、维生素B2、烟酸、D-泛酸、维生素B6（吡哆醇）、D-生物素。
- 试剂与材料：
- 强调了所用试剂（水、甲酸、乙腈、甲醇、盐酸、氨水、碳酸钠等）的规格要求，特别是涉及色谱和质谱的试剂（如甲酸、乙腈、甲醇）需为色谱纯。
- 详细列出了8种目标维生素及其对应的2种氘代内标物的标准储备溶液（通常浓度1 mg/mL或0.1 mg/mL）和混合标准中间溶液（10 μg/mL）的配制方法、溶剂和储存条件（2℃~8℃避光保存）。
- 规定了混合标准系列溶液（浓度范围：5 ng/mL – 2000 ng/mL）和内标混合溶液（10 μg/mL）的配制方法。
- 特别警示（5.11-5.19）： 涉及标准溶液（储备液、中间液、系列液）的配制和储存操作必须避免强光照射，以保护光敏性维生素。
- 指定使用0.22 μm微孔滤膜进行样品过滤。
- 仪器设备：
- 核心设备为液相色谱-串联质谱仪（LC-MS/MS），要求配备电喷雾离子源（ESI）。
- 其他辅助设备包括高精度分析天平（0.1mg和0.01mg）、酸度计（±0.01精度）、涡旋混合器、超声波清洗仪、控温精度±1℃的恒温水浴锅。
- 样品制备：
- 严格按照 GB/T 20195 制备试样。
- 要求试样量至少200g，粉碎至全部通过0.425 mm孔径的分析筛。
- 粉碎后样品需充分混匀，于密闭容器中避光保存，防止维生素降解。
- 试验步骤：
- 样品前处理（8.1）：
- 称取约1g试样（精确至0.1 mg）。
- 加入内标混合溶液（用于校正烟酰胺和叶酸） 和盐酸溶液II。
- 涡旋混匀后，置于50℃水浴加热40分钟（期间旋摇两次）。
- 冷却至室温，用氨水溶液调节pH至6.0。
- 用水定容至50 mL，摇匀。
- 静置后取上清液，经0.22 μm微孔滤膜过滤，待上机分析。
- 警示： 此操作也需避免强光照射。
- 仪器分析条件（8.2）：
- 色谱条件 (8.2.1)：
- 色谱柱：C18色谱柱（极性小分子封端），规格100 mm × 2.1 mm, 3.0 μm。
- 流动相：A：0.1%甲酸水溶液；B：0.1%甲酸乙腈溶液。
- 梯度洗脱程序（详细时间-比例见表1）。
- 流速：0.30 mL/min。
- 柱温：25℃。
- 进样量：2 μL。
- 质谱条件 (8.2.2)：
- 电离方式：电喷雾电离（ESI），正离子模式（ESI+）。
- 检测方式：多反应监测（MRM）。
- 关键参数：喷雾电压5.5 kV，离子源温度500℃，雾化气/辅助气/气帘气流速分别为50/50/20 L/min（均为高纯氮气）。
- 核心参数表 (表2)： 明确列出了8种目标物和2种内标物的监测离子对（母离子和子离子，其中带
a标记的子离子为定量离子）、碰撞能量（CE）和去簇电压（DP）。这是LC-MS/MS方法定性和定量的关键依据。
- 色谱条件 (8.2.1)：
- 测定过程（8.3）：
- 在最佳仪器条件下，依次测定混合标准系列溶液和试样溶液。
- 定性（8.3.2）： 通过比较试样与标准品溶液中目标物的保留时间（相对偏差≤±2.5%） 以及特征离子对的相对离子丰度（需符合表3规定的最大允许偏差） 来确认目标物的存在。
- 定量（8.3.3）：
- 维生素B1、B2、烟酸、D-泛酸、B6（吡哆醇）、D-生物素：采用外标法。以峰面积（Y）对浓度（X）绘制标准曲线（相关系数R² ≥ 0.99）进行定量。若单点校准，样品浓度与标准点浓度差需≤30%。
- 烟酰胺和叶酸：采用内标法。以待测物峰面积/内标峰面积（Y）对待测物浓度/内标浓度（X）绘制标准曲线（R² ≥ 0.99）进行定量。若单点校准，要求同上。
- 若样品浓度超出线性范围，需稀释后重新测定（外标法），或调整称样量后重新测定（内标法）。
- 样品前处理（8.1）：
- 结果计算（第9章）：
- 提供了三种计算公式：
- 式（1）： 多点校准（外标或内标法）的通用计算公式。
- 式（2）： 单点校准外标法的计算公式。
- 式（3）： 单点校准内标法的计算公式。
- 含量以质量分数 ωᵢ (mg/kg) 表示。
- 计算结果以平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。
- 提供了三种计算公式：
- 精密度（第10章）：
- 在重复性条件下，两次独立测定结果的绝对差值不得大于其算术平均值的20%。
- 附录：
- 附录A (规范性)： 提供了标准物质（8种目标维生素及2种氘代内标） 的详细信息，包括中文名称、英文名称、CAS号、分子式、纯度要求（≥95%或≥97%）。这是方法溯源性和可靠性的基础。
- 附录B (资料性)： 提供了10种物质（8种目标维生素及2种氘代内标）在指定浓度（目标物50 ng/mL，内标20 ng/mL）下的定量离子色谱图。这些图谱直观展示了方法的分离效果和典型色谱峰形状，是方法开发和验证的重要参考。
- 图B.1：维生素B1 (50 ng/mL)
- 图B.4：烟酰胺 (50 ng/mL)
- 图B.8：叶酸 (50 ng/mL)
(注：此处仅嵌入部分代表性色谱图，附录B实际包含B.1-B.10共10张图)
- 图B.1：维生素B1 (50 ng/mL)
总结要点：
- 该标准是一个高度专业化、技术性强的检测方法标准。
- 核心是利用LC-MS/MS技术，结合酸性提取和特定的前处理流程，检测宠物饲料中的8种特定水溶性维生素。
- 方法区分了内标法（烟酰胺、叶酸） 和外标法（其他6种） 进行定量。
- 对试剂纯度、标准品信息、样品制备、仪器参数（特别是质谱的MRM参数）、操作条件（避光、pH控制、温度控制）、定性定量规则、结果计算及精密度要求都做了详尽且严格的规定。
- 附录A和B提供了关键的支持信息（标准物质参数和典型色谱图）。
- 方法的定量限为0.2 mg/kg，精密度要求为≤20%。
- 整个标准的设计旨在确保检测结果的准确性、可靠性和实验室间的可比性，为宠物饲料的质量控制和安全监管提供技术依据。
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