NY/T 1953-2025 猪附红细胞体病诊断技术 ,该文件为pdf格式 ,请用户放心下载!
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资源简介
以下是《NY/T 1953-2025 猪附红细胞体病诊断技术》国家农业行业标准的详细内容总结：
一、标准概述
- 标准名称：猪附红细胞体病诊断技术
- 代替版本：NY/T 1953-2004
- 发布日期：2025年5月1日实施
- 归口单位：全国动物卫生标准化技术委员会（SAC/TC 181）
- 主要修订内容：
- 增加规范性引用文件（GB 19489 实验室生物安全要求）、缩略语、生物安全措施。
- 新增检测方法：荧光RAA（重组酶介导等温核酸扩增）、间接ELISA、阻断ELISA抗体检测。
- 优化临床诊断流程，明确疑似感染判定标准（需同时符合流行病学、≥3种临床症状及病理变化）。
- 删除过时内容（如2004版样品采集要求）。
二、核心内容
1. 适用范围
适用于猪附红细胞体病（由 Mycoplasma suis 感染引起）的诊断，涵盖临床诊断、实验室检测（病原/抗体）及综合判定。
2. 流行病学与临床特征
- 易感对象：猪（所有品种/年龄）、人及其他动物（牛、羊等）。
- 传播途径：吸血昆虫、血液污染器械、垂直传播。
- 高发季节：夏秋季。
- 临床症状：
- 发热（40–42℃）、贫血、黄疸、皮肤发绀（耳缘显著）、血尿、呼吸困难。
- 慢性病例：消瘦、荨麻疹、繁殖障碍（母猪）、仔猪衰竭。
- 病理变化：
- 全身黄染（肌肉、内脏）、淋巴结/脾脏/肝脏肿大、肾脏质脆、膀胱积血尿。
3. 诊断流程
（1）疑似感染判定
符合以下任一组合：
- 临床诊断：流行病学特征 + ≥3种临床症状 + 病理变化。
- 涂片镜检：吉姆萨染色后，红细胞表面出现紫红色小体（附录B图示）。
（2）实验室确诊
- 病原检测（核酸阳性即确诊）：
- PCR：特异性引物扩增666 bp片段（凝胶电泳判定）。
- 实时荧光PCR：Ct值≤30为阳性；30<Ct≤32需复检。
- 荧光RAA：起峰时间≤12分钟（Ct≤36）为阳性。
- 抗体检测（无疫苗，抗体阳性即确诊）：
- 间接ELISA：S/N值（待检OD/阴性OD）≥2.1为阳性。
- 阻断ELISA：S/N值≥0.4为阳性（计算方式不同）。
4. 样品采集与处理
| 检测类型 | 样品要求 | 保存运输 |
|---|---|---|
| 镜检 | 新鲜静脉血（直接涂片） | 立即检测 |
| 病原检测 | 肝素抗凝血（1:10） | 2–8℃保存≤24h，否则冷冻 |
| 抗体检测 | 血清（≥5mL/头） | 2–8℃运输，冷冻长期保存 |
5. 生物安全要求
- 实验室操作（如核酸提取）需符合 GB 19489 标准。
- 样品运输需密封+冰袋（24小时内送达）。
三、关键附录
- 附录A：试剂配制（TE缓冲液、阳性/阴性对照等）。
- 附录B：检测结果图示（PCR电泳图、荧光扩增曲线）。
- 附录C：重组p40蛋白制备（大肠杆菌表达，Western blot验证）。
- 附录D：阳性/阴性血清制备（免疫猪血清，ELISA效价≥1:16,000）。
- 附录E：ELISA溶液配制（包被液、洗涤液等）。
- 附录F：单克隆抗体制备（小鼠杂交瘤技术，用于阻断ELISA）。
四、主要技术更新意义
- 提升检测效率：新增荧光RAA实现现场快速检测（39℃等温扩增，40分钟出结果）。
- 覆盖感染全程：ELISA抗体检测弥补病原检测的窗口期局限。
- 标准化操作：明确各方法临界值（如Ct值、S/N值），减少误判。
- 生物安全强化：引用国家标准规范实验室操作。
总结：该标准整合了临床、病原、抗体三层诊断体系，通过多种技术互补提高猪附红细胞体病的确诊率，为防控提供全面技术支撑，尤其适应无疫苗背景下的抗体监测需求。
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