农业农村部公告 第864号-7-2024 转基因植物及其产品成分检测 抗虫、耐除草剂玉米外源蛋白表达量检测技术规范 ,该文件为pdf格式 ,请用户放心下载!
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资源简介
中华人民共和国国家标准《转基因植物及其产品成分检测抗虫、耐除草剂玉米外源蛋白表达量检测技术规范》主要内容总结
1. 范围与适用性
- 适用于抗虫、耐除草剂玉米及其复合性状品种在不同生育期（如苗期、拔节期、抽雄期等）的组织器官（根、茎、叶、雄穗、花丝、籽粒）中外源目标蛋白的ELISA定量检测。
- 外源蛋白包括：抗虫目标杀虫蛋白（如Bt蛋白）和耐除草剂目标蛋白（如CP4-EPSPS蛋白）。
2. 规范性引用文件
- 引用GB/T 1.1-2020（标准化文件起草规则）、GB 4404.1（禾谷类种子质量要求）、农业部953号公告（抗虫与耐除草剂玉米环境安全检测标准）等。
3. 关键术语定义
- 转基因抗虫玉米：通过基因工程导入抗虫基因的玉米，具有抗虫性状。
- 转基因耐除草剂玉米：导入耐除草剂基因的玉米，具有除草剂耐受性。
- 目标蛋白：外源基因表达的杀虫或耐除草剂活性蛋白（如Cry1Ab、CP4-EPSPS）。
4. 检测原理
- 在适宜生态区种植受检玉米及对照品种，按不同发育阶段采集组织器官样本。
- 通过酶联免疫法（ELISA）检测外源蛋白表达量，分析目标蛋白的表达水平。
5. 仪器设备要求
- 必需设备：分析天平（0.001 g精度）、酶标仪、超低温冰箱（-80℃）、冷冻研磨仪、低温离心机、移液器等。
6. 试验材料与田间管理
- 种子质量：符合GB 4404.1标准。
- 田间设计：随机区组设计，3次重复，小区面积≥24 m²，常规播种与管理。
- 数据记录：详细记录试验地位置、气象数据（降水、温度）、异常天气影响等。
7. 取样规范
- 取样时期：苗期、拔节期、抽雄期、吐丝期、乳熟期、完熟期（具体参照附录A）。
- 取样器官：根、茎、叶、雄穗、花丝、籽粒（按生育阶段选择，如苗期仅根和叶）。
- 样本处理：液氮速冻后-80℃保存，避免蛋白降解。
8. 外源蛋白检测流程
- 样品制备：
- 研磨样本，按1:10（质量/体积）加入提取缓冲液，4℃振荡4小时，离心取上清液。
- 试剂盒选择：使用经验证的ELISA试剂盒。
- 标准曲线建立：
- 标准蛋白稀释5个梯度，建立回归方程（Y=a+bX），要求R2≥0.98。
- 检测与计算：
- 公式：ω=m(a+bX)×n×V，结果以ωˉ±s（平均值±标准差）表示，单位ng/g鲜重（或μg/g）。
9. 结果表述
- 示例：受检材料（吐丝期、花丝）中Cry1Ab蛋白含量为(25.36±1.45) ng/g鲜重。
附录A：取样参照表
| 发育阶段 | 根 | 茎 | 叶 | 雄穗 | 花丝 | 籽粒 |
|---|---|---|---|---|---|---|
| 苗期 | √ | √ | ||||
| 拔节期 | √ | √ | √ | |||
| 抽雄期 | √ | √ | √ | √ | ||
| 吐丝期 | √ | √ | √ | √ | ||
| 乳熟期 | √ | √ | √ | √ | ||
| 完熟期 | √ | √ | √ | √ |
10. 质量控制要求
- 对照品种检测值需低于标准曲线最低浓度，否则重新检测。
- 每个样本3个平行，确保数据可靠性。
11. 其他说明
- 根据基因表达特性或安全评价需求，可调整取样时期和器官。
- 文件涉及专利的可能性由使用者自行识别。
总结：该标准系统规范了转基因玉米外源蛋白表达的检测流程，涵盖田间种植、取样、实验室检测及数据分析全环节，确保检测结果的科学性、可比性和可追溯性。
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