农业农村部公告 第864号-8-2024 转基因植物及其产品成分检测 耐除草剂大豆外源蛋白表达量检测技术规范

主要内容总结

• ​​标题​​：转基因植物及其产品成分检测耐除草剂大豆外源蛋白表达量检测技术规范。
• ​​发布信息​​：农业农村部公告第864号-8-2024，2024年12月30日实施。
• ​​适用范围​​：规定使用ELISA法检测耐除草剂大豆不同生育期组织器官中外源蛋白表达量的技术流程，适用于实验室和田间试验。

• ​​GB 4404.2​​：确保试验用大豆种子质量符合豆类作物标准。
• ​​农业部2031号公告-1-2013​​：指导田间种植设计与环境安全检测。

• ​​耐除草剂大豆​​：通过基因工程导入耐除草剂基因的大豆，具备除草剂耐受性。
• ​​耐除草剂蛋白​​：外源基因表达的蛋白，赋予植株抗除草剂能力。

• ​​流程​​：在适宜生态区种植受检品种与对照品种，按生育期采集根、茎、叶、花、豆荚、籽粒等器官样本，通过ELISA定量检测外源蛋白表达水平。

• ​​关键设备​​：分析天平（精度0.001g）、酶标仪、超低温研磨仪、低温离心机、移液器等，确保样本处理与检测精度。

• ​​材料要求​​：种子需符合GB 4404.2质量标准。
• ​​田间设计​​：随机区组设计，3次重复，每小区≥20m²，常规播种与管理。
• ​​数据记录​​：详细记录试验地位置、气候条件（降水、温度）、异常天气影响等。

• ​​生育阶段​​：苗期、开花结荚期、鼓粒期、成熟期。
• ​​取样器官​​（见附录A）：
  • ​​苗期​​：根。
  • ​​开花结荚期​​：茎、叶、花。
  • ​​鼓粒期​​：茎、叶、豆荚、籽粒。
  • ​​成熟期​​：茎、叶、豆荚、籽粒。
• ​​方法​​：每小区随机取20株，液氮速冻或-80℃保存，确保样本完整性。

• ​​试样制备​​：液氮研磨后，按1:10（质量体积比）加提取缓冲液，离心取上清液。
• ​​试剂盒选择​​：经验证适用于大豆的ELISA试剂盒。
• ​​标准曲线​​：系列浓度标准蛋白建立回归方程（Y=a+bX），要求R²≥0.98。
• ​​结果计算​​：公式计算蛋白浓度（ω=(a+bX)×n×V/m），单位ng/g鲜重（或μg/g），保留两位小数，取3次重复均值±标准差。

• ​​表述格式​​：明确标注发育阶段、器官、蛋白名称及含量（如“xx时期xx器官中xx蛋白含量为(ω±s)ng/g鲜重”）。
• ​​质量控制​​：对照样品OD值需低于标准最低浓度，否则重新检测。

• ​​取样表​​：明确各阶段需检测的器官，允许根据基因表达特性调整取样策略。
• ​​灵活应用​​：针对特定基因（如目的基因、标记基因）可优化取样时期与器官。

• ​​专利声明​​：文件可能涉及专利，但发布机构不承担识别责任。
• ​​起草单位​​：中国农科院生物技术研究所、农业农村部科技发展中心等多机构联合制定。

该标准通过规范化的田间试验设计、严格取样流程及精准的实验室检测方法，确保耐除草剂大豆外源蛋白表达量的可比性与科学性，为转基因生物安全管理提供技术依据。