海南省地方标准
DB 46/T 712—2025
胡椒花叶病 监测技术规程
Technical code of practice for monitoring of black pepper mosaic disease
2025 - 08 - 11 发布 2025 - 10 - 31 实施
海南省市场监督管理局 发布
目次
前言 ................................................................................ III
1 范围 ............................................................................... 1
2 规范性引用文件 ..................................................................... 1
3 术语和定义 ......................................................................... 1
4 器材和试剂 ......................................................................... 1
器材 ........................................................................... 1
试剂 ........................................................................... 1
5 监测程序 ........................................................................... 1
6 监测网点设置 ....................................................................... 1
固定监测点 ..................................................................... 1
随机监测点 ..................................................................... 2
7 田间监测 ........................................................................... 2
固定监测点 ..................................................................... 2
随机监测点 ..................................................................... 2
普查 ........................................................................... 2
8 病害诊断 ........................................................................... 3
田间诊断 ....................................................................... 3
室内检测 ....................................................................... 3
9 病情统计 ........................................................................... 3
病株率 ......................................................................... 3
病情分级 ....................................................................... 4
病情指数 ....................................................................... 4
10 监测结果及使用 .................................................................... 4
11 样品及档案保存 .................................................................... 4
附录A(规范性) 胡椒花叶病监测程序流程 ............................................... 5
附录B(资料性) 胡椒花叶病监测调查统计表 ............................................. 6
附录C(规范性) 胡椒花叶病田间典型症状 ............................................... 9
参考文献 ............................................................................. 11
图A.1 胡椒花叶病监测程序流程图 ....................................................... 5
表1 胡椒花叶病病情分级标准 ........................................................... 4
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II
表B.1 气象数据登记表 ................................................................. 6
表B.2 胡椒花叶病病情监测记录表 ....................................................... 7
表B.3 胡椒花叶病病情调查汇总表 ....................................................... 7
表B.4 胡椒花叶病样品鉴定表 ........................................................... 8
表C.1 胡椒花叶病田间典型症状 ......................................................... 9
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III
前言
本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定
起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由海南省农业农村厅提出并归口。
本文件起草单位：中国热带农业科学院香料饮料研究所、海南兴科热带作物工程技术有限公司。
本文件主要起草人：苟亚峰、刘世超、高圣风、孙世伟、杨建峰、田甜、初众。
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胡椒花叶病监测技术规程
1 范围
本文件确立了胡椒花叶病(black pepper mosaic disease)监测程序，规定了胡椒花叶病监测器
材和试剂、监测网点设置、田间监测、病害诊断、病情统计、监测结果及使用等操作指示，描述了监测
过程信息记录、样品及档案保存等追溯方法。
本文件适用于胡椒花叶病的田间监测。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，
仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本
文件。
SN/T 4405 黄瓜花叶病毒检疫鉴定方法
3 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
胡椒花叶病 black pepper mosaic disease
由黄瓜花叶病毒(cucumber mosaic virus，CMV)侵染胡椒引起的一种病毒病。
4 器材和试剂
器材
电子分析天平(感量：1/10 000 g)、研钵、离心管(5 μL)、pH计、酶标仪、PCR仪、电泳仪、电泳
槽、凝胶成像仪、高速冷冻离心机(10 000 r/min)、超低温冰箱、照相机、样品袋等。
试剂
具体按照SN/T 4405 中相关规定的试剂。
5 监测程序
胡椒花叶病监测程序包括5个步骤，监测程序流程按图A.1给出的规定。
6 监测网点设置
固定监测点
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2
在胡椒产区的县(市、区)范围内，依据当地气候特征、区域种植模式以及胡椒花叶病的历史发生
情况，选择胡椒主产区作为固定监测区。在每个固定监测区内，设置3个监测点，且每个监测点的面积
为0.6 hm2～1 hm2。
随机监测点
在固定监测区内，对固定监测点范围之外的区域，每个季度随机选择1个地块作为随机监测点，其
面积为0.13 hm2～0.2 hm2。
7 田间监测
固定监测点
7.1.1 监测频次
每年1月至3月期间，每半个月开展1次监测工作;而在其他时间段，则每月进行1次监测。
7.1.2 监测内容
胡椒长势、胡椒花叶病发生情况，同时收集气象数据并填写表B.1。
7.1.3 监测方法
7.1.3.1 在每个监测点内，运用五点取样法。具体操作为：先确定监测点的对角线，再在该对角线上
选取与中心点等距离的胡椒植株，同时将中心点的植株一并确定为样点。
7.1.3.2 确定观测胡椒植株，每个样点选20 株，共确定100 株观测植株，并逐株编号。
7.1.3.3 对各编号的胡椒植株按照第8 章的规定，调查各观测植株是否发生胡椒花叶病。
7.1.3.4 按照第9 章的规定统计病株率和病情指数。
7.1.3.5 调查期间进行拍照，相关信息填入表B.2 和表B.3。
随机监测点
7.2.1 监测频次
全年监测4次，每3个月监测1次。
7.2.2 监测内容
按7.1.2给出的规定。
7.2.3 监测方法
按7.1.3给出的方法。
普查
7.3.1 普查频次
每年4月至12月，将固定监测区之外的胡椒种植区域划定为普查区域，进行1次全面调查。
7.3.2 普查内容
按7.1.2给出的规定。
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7.3.3 普查方法
按7.1.3给出的方法。
8 病害诊断
田间诊断
对胡椒植株的叶片、花穗、果穗以及主蔓进行调查，若出现表C.1所描述的任意一个为害部位的胡
椒花叶病田间典型症状，则可确诊该植株为发病植株;反之，若未出现相应症状，则判定为非发病植株。
对无法确诊、有疑似症状的胡椒植株，采集叶片置于采样袋中，进行标记及相关信息记录，并带回
实验室做进一步检测鉴定。
室内检测
8.2.1 检测方法选用
在检测方法的选择上，可采用以下方法中的一种或两种：
a) RT-PCR检测;
b) DAS-ELISA检测。
8.2.2 RT-PCR 检测
采用反转录-多聚合酶链式反应法(RT-PCR)检测，具体按照SN/T 4405的相关规定执行。
在阳性对照出现540 bp特异性扩增条带，且阴性对照及空白对照均未出现该条带的情况下，若待测
样品在540 bp处显示出与阳性对照相同的特异性条带，则判定结果为阳性，表明该样品患有胡椒花叶病;
反之，若在满足上述质控条件的前提下，待测样品未出现540 bp特异性条带，则判定结果为阴性，说明
该样品未患有胡椒花叶病。
8.2.3 DAS-ELISA 检测
采用双抗夹心酶联免疫吸附法(DAS-ELISA)检测，具体按照SN/T 4405的相关规定执行。
若样品OD405值/阴性对照OD405值≥2，则判定结果为阳性，表明该样品患有胡椒花叶病;若样品OD405
值/阴性对照OD405值≤1.5，则判定结果为阴性，说明该样品未患有胡椒花叶病;当样品OD405值/阴性对照
OD405值>1.5且<2的区间时，应进一步确认。
8.2.4 检测结果判定
若RT-PCR检测结果为阳性，则可判定该样品患有胡椒花叶病;当DAS-ELISA检测结果为阳性，但无
法据此判定时，应采用RT-PCR方法进行复检;如果RT-PCR与DAS-ELISA的检测结果均为阴性，则判定该
样品未患有胡椒花叶病。
8.2.5 检测结果记录
将检测鉴定结果填入表B.4。
9 病情统计
病株率
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病株率用式(1)计算：
? =
?
?
× 100 ·········································································· (1)
式中：
R —— 病株率，用百分率( % )表示，结果保留到小数点后一位;
T —— 发病株数;
S —— 样点调查总株数。
病情分级
以病株率进行病情分级，病情分级标准见表1。
表1 胡椒花叶病病情分级标准
病情分级 病株率
0级 无病害症状
1级 病株率<5%
3级 5%≤病株率<15%
5级 15%≤病株率<35%
7级 35%≤病株率<75%
9级 病株率≥75%
病情指数
病情指数用式(2)计算：
?? =
Σ?(??×??)
?×?
× 100 ·································································· (2)
式中：
DI —— 病情指数，结果保留到小数点后一位;
? —— 病情分级，依次为0级、1级、3级、5级、7级、9级;
?? —— 不同病情分级发病株数;
?? —— 不同病情分级的级值，依次为0、1、3、5、7、9;
C —— 监测点调查总株数。
10 监测结果及使用
当监测点出现病株后，结合天气趋势分析，及时发出预报。
当病株率>5% 或病情指数>10时，提出病害预警。
11 样品及档案保存
采集病叶经液氮干燥后在-20 ℃条件下保存，提取的RNA样品若需长期保存应放置于-70 ℃冰箱。
检测原始记录、照片等文档按有关规定做好登记、标记和存档。
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档案保存2年，以便必要时复核。
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A
A
附录A
(规范性)
胡椒花叶病监测程序流程
胡椒花叶病监测程序流程见图A.1。
图A.1 胡椒花叶病监测程序流程图
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B
B
附录B
(资料性)
胡椒花叶病监测调查统计表
胡椒花叶病监测调查统计表见表B.1～表B.4。
表B.1 气象数据登记表
县(市、区)： 监测点： 调查人：
序号 调查日期
最高温度
(℃)
最低温度
(℃)
日均温度
(℃)
空气相对湿度
(%)
光照时数
(h)
降雨量
(mm)
1
2
3
4
5
……
注： 气象数据是指调查当天的气象信息。
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表B.2 胡椒花叶病病情监测记录表
县(市、区)： 监测类型：☐固定监测点 ☐随机监测点 ☐普查
调查日期： 调查人：
监测点
面积
(hm2)
生育期a
样点
编号
调查
株数
发病
株数
病株率
(%)
病情分级
0 1 3 5 7 9
1
2
3
4
5
1
2
3
4
5
…… …… ……
……
……
……
……
……
a 生育期是指胡椒幼龄期、结果期。
表B.3 胡椒花叶病病情调查汇总表
县(市、区)： 监测类型：☐固定监测点 ☐随机监测点 ☐普查
监测点 调查日期 生育期a
病株率b
(%)
病情指数 调查人
……
a 生育期是指胡椒幼龄期、结果期。
b 此处病株率是指同一个监测点五点取样的平均值。
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表B.4 胡椒花叶病样品鉴定表
品种名称 生育期a 采样日期
采样地点 采样部位 样品数量
送样方式 送检日期 送检人
送检单位 联系电话
鉴定方法：
鉴定结果：
备注：
鉴定人(签名)：
审核人(签名)：
年 月 日
a 生育期是指胡椒幼龄期、结果期。
C
C
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附录C
(规范性)
胡椒花叶病田间典型症状
胡椒花叶病田间典型症状见表C.1。
表C.1 胡椒花叶病田间典型症状
为害部位 典型症状描述 典型症状实物图
叶片
叶片斑驳、变小、皱缩、变厚、变硬易碎、变小、变狭、
卷曲、畸形
花穗、果穗 花穗易脱落，果穗短小，果实稀疏
主蔓
主蔓萎缩，节间缩短，生长受到明显抑制，胡椒植株矮
小
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参考文献
[1] 车海彦，曹学仁，贺延恒，等. 海南岛黄瓜病毒病种类鉴定及其发生分布研究[J]. 热带作物
学报，2020，4(11):2280-2284.
[2] Haiyan Che, Xueren Cao, Peipei Liu, et al. Occurrence and characterization of virus
species associated with black pepper(piper nigrum L.) virus diseases in Hainan province,
China[J]. Journal of Phytopathology, 2021, 169: 247-252.
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