T/CVMA 248-2025 牛病毒性腹泻病毒阻断磁微粒CLIA抗体检测方法 ,该文件为pdf格式 ,请用户放心下载!
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资源简介
团体标准 T/CVMA 248-2025《牛病毒性腹泻病毒阻断磁微粒 CLIA抗体检测方法》主要内容总结
1. 标准概述
- 标准名称：牛病毒性腹泻病毒（BVDV）阻断磁微粒化学发光免疫分析法（CLIA）抗体检测方法。
- 适用范围：适用于血清中BVDV抗体的检测。
- 发布与实施：2025年5月19日发布并实施，由中国兽医协会归口。
2. 技术原理
采用磁微粒化学发光阻断法：
- 第一次免疫反应：待检血清与生物素标记的BVDV抗原、链霉亲和素磁微粒混合孵育，形成抗原-抗体复合物。
- 第二次免疫反应：加入吖啶酯（AE）标记的BVDV单抗，与未结合的抗原结合。
- 检测：通过化学发光底物激发发光，RLU（相对光单位）值与抗体含量成反比。
3. 试剂与耗材
- 关键试剂：
- 20×浓缩洗液（含磷酸盐、NaCl、吐温-20）。
- 磁微粒工作液（链霉亲和素磁微粒）。
- 抗原工作液（生物素标记的BVDV重组蛋白）。
- AE抗体工作液（吖啶酯标记的单抗）。
- 校准品（6个梯度：3.125~3200 U）和质控品（2个水平）。
- 耗材：离心管、反应杯、采血器等。
4. 仪器设备
- 核心设备：全自动化学发光免疫分析仪。
- 辅助设备：电子天平、离心机、移液器等。
5. 检测流程
- 样本处理：
- 采集静脉血，分离血清（避免溶血或污染），-20℃保存。
- 检测前离心去除杂质。
- 试剂准备：稀释洗涤液，装载磁微粒、抗原、抗体工作液。
- 操作步骤：
- 第一次孵育（37℃ 10min）→清洗（磁分离去上清）→第二次孵育（加AE抗体，37℃ 5min）→化学发光检测。
- 结果计算：
- 用6点校准品拟合四参数标准曲线（R²≥0.99）。
- 质控品验证（质控1≤20 U，质控2 140~260 U）。
6. 结果判定
- 阳性：抗体含量≥10 U。
- 阴性：抗体含量<10 U。
7. 附录内容
- 附录A：试剂配方（如洗液、PBS、CB缓冲液）。
- 附录B：工作液制备（磁微粒、抗原、AE抗体的偶联与纯化）。
- 附录C：校准品制备（高免血清梯度稀释，中和试验标定）。
- 附录D：质控品制备（稀释高免血清，设定Mean±3SD范围）。
8. 其他关键点
- 质量控制：每批检测需验证质控品，试剂更换或校准后需重新校准曲线。
- 专利声明：部分内容可能涉及专利，发布机构不承担识别责任。
- 起草单位：涵盖天津、内蒙古、辽宁等十余家省级动物疫控中心及企业。
9. 创新性与应用价值
- 高灵敏度：磁微粒化学发光法提升检测精度。
- 标准化：明确试剂制备、操作流程和判定标准，适用于大规模疫病监测。
- 兼容性：与GB/T 18637（BVD诊断规范）和NY/T 541（采样标准）衔接。
该标准为BVDV抗体检测提供了自动化、标准化的解决方案，适用于兽医诊断和流行病学调查。
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