T/CAAA 136—2024
驴鲜精稀释与冷藏保存技术规程
Code of practice for donkey semen dilution and refrigerated storage techniques
2024-12-25发布 2025-03-20实施
中国畜牧业协会 发布
T/CAAA 136—2024
前 言
本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起 草 。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由中国畜牧业协会提出并归口。
本文件起草单位：东阿阿胶股份有限公司、中国农业大学、西北农林科技大学、山东东阿黑毛驴牧 业科技有限公司、华润生物医药有限公司、聊城大学。
本文件主要起草人：李敏、嵇传良、于杰、程杰、王延涛、李楠、周祥山、郝向慧、刘海兵、曲洪 磊、董博颖、冯玉龙、刘冰、陈永广、杨莉、姜桂苗、周广运、岳明明。
I
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驴鲜精稀释与冷藏保存技术规程
1 范围
本文件确立了驴鲜精稀释与保存的程序，规定了采精前准备、采精、精液稀释、冷藏保存、质量要 求总体原则和要求，描述了档案管理的内容和要求。
本文件适用于驴鲜精液的稀释与保存。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅 该 日 期 对 应 的 版 本 适 用 于 本 文 件 ; 不 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 其 最 新 版 本 ( 包 括 所 有 的 修 改 单 ) 适 用 于 本 文件。
GB/T 24877 德州驴
NY/T 3796 马和驴冷冻精液
3 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
冷藏温度 refrigerated temperature
0℃~5℃的保存温度。
3.2
台驴 teaser jenny
用于公驴采精的发情母驴或假台驴。
4 程序构成
驴鲜精稀释与冷藏保存技术流程包括采精前准备、采精、精液稀释、冷藏保存、质量要求5个阶段。 程序流程图如图1所示。
1采精前准备(见5)
2采精(见6) 异常
正常
3精液稀释(见7)
4冷藏保存(见8)
5质量要求(见9)
2.1频率(见6.1)
2.2方法(见6.2)
2.3精液品质检查(见6.3)
图1 驴鲜精稀释与冷藏保存技术流程
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5 采精前准备
5.1 环境
采精场地应洁净、宽敞、安静、通风良好，地面应平整、防滑，无阳光直射、无辐射，并设有操作 人员安全防护栏。
5.2 采精公驴
应符合GB/T 24877中1级的要求。
5.3 器具
5.3.1 器具在使用前做好清洗、烘干和消毒或使用一次性消毒制品。
5.3.2 量筒、漏斗、无菌纱布、集精杯、离心管预先加热到37℃。
5.3.3 水浴锅预热至37℃,恒温箱预热至22℃,显微镜恒温板预热至37℃~38℃。
6 采精
6.1 频率
每周可采精3次～5次。
6.2 方法
将公驴牵到台驴处，阻止其爬跨，使阴茎充分勃起后，用35℃~38℃温水清洗阴茎、龟头并用纸 巾擦干。采精员一手持假阴道，站在公驴右前侧，待公驴爬跨台驴时，另一只手迅速将阴茎引入假阴道 中，公驴阴茎抽动并贴紧台驴臀部，尾根有节奏摆动即开始射精。完成射精后，公驴随即而下，采精员 手紧握假阴道，随公驴阴茎而下，待公驴前肢落地时，缓慢将假阴道脱出并立即抬起假阴道外口端，打 开气卡放气，使精液流入集精杯，取下集精杯迅速转移至精液处理室。
6.3 精液品质检查
6.3.1 外观和精液量
用4层～6层无菌纱布或专用滤纸过滤精液至量筒或量杯中，测量精液体积并进行外观检查，精液 一般呈乳(灰)白色或淡黄色，无异物，淡腥味。
6.3.2 精子密度
用血细胞计数法测定或用显微镜目测评定，或用精子密度仪测定，单位为个/毫升，结果保留1位 小数，精子密度要求≥1.0×108 个/毫升。
6.3.3 精子活力
用精子分析仪测定或用显微镜目测评定，精子活力应≥70%。
7 精液稀释
7.1 稀释液配制
稀释液推荐配方及配制方法见附录A。配制好的稀释液置于4℃冰箱中备用，存放时间不宜超过7 d。
7.2 稀释液用量
按公式(1)计算，结果保留2位小数。
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式中：
N ——稀释液用量，单位为毫升 (mL);
V ——射精量，单位为毫升 (mL);
M ——精子活力，%;
D1 ——原精密度，单位为亿/毫升;
D2 ——稀释密度，单位为亿/毫升;
80%— —离心回收率。
7.3 方法
7.3.1 离心去精清
将 离 心 用 稀 释 液 3 7 ℃ 水 浴 1h, 在无菌洁净的环境中把过滤的原精液移入离心管中，将离心用稀释 液与原精液进行1倍～2倍稀释，用手轻轻缓慢摇匀使精液与稀释液充分混合后放入22℃恒温箱平衡 10min, 然后1850 rpm/min, 离心15min, 去 掉 上 清 液 ， 保 留 离 心 管 底 部 的 精 子 沉 淀 物 。
7.3.2 稀释
将 稀 释 液 在 2 2 ℃ 恒 温 箱 中 恒 温 1h 或恢复至室温，再缓慢加入去除上清液的离心管中轻轻摇匀，稀 释精子至每毫升有效精子数约6.7×10⁷个。
8 冷藏保存
在20℃~25℃条件下，按照输精剂量用离心管对稀释后的精液分装，用8层～10层纱布包裹后置 于4℃恒温箱中存放，每间隔8h将精液轻摇，抽样检查精子活力。
9 质量要求
9.1 精子活力
精液稀释后精子活力应≥70%,输精时精子活力不应低于45%。
9.2 有效精子数
≥6.7×107个/毫升。
9.3 畸形率 ≤20%。
9.4 菌落数
应符合NY/T 3796的要求。
10 档案管理
记录供精公驴号、精液活力、畸形率、鲜精保存时间等。见附录B。记录应完整、准确、真实。
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附 录 A
(资料性)
稀释液推荐配方及配制方法
稀释液推荐配方及配制方法见表A.1。
表A.1 稀释液推荐配方及配制方法
配方成分(浓度)
用量/100mL
配制方法
蒸馏水/mL
100
先取50mL无菌蒸馏水在容量瓶中充
分溶解葡萄糖、乳糖、棉子糖、柠檬酸
三钠、一水柠檬酸钾，HEPES、脱脂奶
粉，然后用压力蒸汽灭菌器115℃灭
菌3min～5min,待冷却后再用灭菌蒸
馏水加至100mL,最后加入青霉素、链
霉素搅拌30min,调节PH至6.8后封 口备用。
葡萄糖/g
3
乳糖/g
0.15
棉子糖/g
0.15
柠檬酸钠三钠/g
0.03
柠檬酸钾，一水/g
0.041
HEPES/g
0.467
脱脂奶粉/g
3
青霉素/万IU
10
链霉素/万IU
10
注：所用试剂分析纯及以上。
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附 录 B
(资料性)
稀释鲜精标记卡
稀释鲜精液标记卡见表B.1。
表B.1 驴稀释鲜精标记卡
项 目
供精单位
生产日期
品种
公驴号
预配头份
每头剂量/mL
有效精子数/个
保存第一天
检测时间
活力/%
摇动时间/秒
畸形率/%
保存第二天
检测时间
活力/%
摇动时间/秒
畸形率/%
保存第三天
检测时间
活力/%
摇动时间/秒
畸形率/%
备注
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