前 言
本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
本文件替代T/DSAT 0001—2025《蔬菜中含氰基拟除虫菊酯类农药残留的快速检测》， 主要变化如下：
——“分光光度法”修改为“第一法 分光光度法”，“检测卡法”修改为“第二法 检测卡法”。
——附录A名称由“6种含氰基拟除虫菊酯类农药标准物质的中文名称、英文名称、CAS号、分子式和相对分子量”改为“标准物质信息”。
——附录B名称由“性能指标计算方法”改为“方法性能指标计算表”。
本文件由大连市检验检测认证技术服务中心提出。
本文件由大连市分析测试学会归口。
本文件起草单位：中国科学院大连化学物理研究所、大连市检验检测认证技术服务中心。
本文件主要起草人：冯亮、顾鑫荣、张雨、李岩、祁琛、 洪麟、李海燕、赵彤、张敬波、张海、赵宇为。
T/ DSAT 0001—2026
蔬菜中含氰基拟除虫菊酯类农药残留的快速检测
1 范围
本文件规定了蔬菜中氟氯氰菊酯、氯氟氰菊酯、氯氰菊酯、溴氰菊酯、甲氰菊酯、氰戊菊酯残留的快速检测方法。
本文件适用于韭菜、菠菜、芹菜、小油菜、小白菜等蔬菜中氟氯氰菊酯、氯氟氰菊酯、氯氰菊酯、溴氰菊酯、甲氰菊酯、氰戊菊酯残留的快速测定。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
NY/T 761 蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留的测定
3 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
第一法 分光光度法
4 原理
试样中的含氰基拟除虫菊酯类农药经提取后，在碱性条件下释放氰根离子，氰根离子与对硝基苯甲醛反应生成氰醇中间体，再与氯化三苯基四氮唑反应生成红色产物。溶液颜色的深浅与样品中含氰基拟除虫菊酯类农药的含量成正相关，用分光光度计在480 nm处测定吸光度值，对试样中含氰基拟除虫菊酯类农药进行快速测定。
5 试剂和材料
5.1 一般要求
除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的三级水。
5.2 试剂
5.2.1 乙醇(CH3CH2OH)：色谱纯。
5.2.2 甲醇(CH3OH)：色谱纯。
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5.2.3 乙腈(CH3CN)：色谱纯。
5.2.4 氢氧化钠(NaOH)。
5.2.5 对硝基苯甲醛(C7H5NO3)。
5.2.6 氯化三苯基四氮唑(C19H15ClN4)。
5.2.7 无水硫酸镁(MgSO4)。
5.2.8 氯化钠(NaCl)。
5.3 试剂配制
5.3.1 氢氧化钠溶液(42.5 g/L)：称取 4.25 g 氢氧化钠(5.2.4)，用水溶解并定容至 100 mL，混匀。
5.3.2 对硝基苯甲醛溶液(4 g/L)：称取 0.40 g 对硝基苯甲醛(5.2.5)，用乙醇(5.2.1)溶解并定容至 100 mL，混匀。
5.3.3 氯化三苯基四氮唑溶液(40 g/L)：称取 4.0 g 氯化三苯基四氮唑(5.2.6)，用水溶解并定容至 100
mL，混匀。
5.3.4 60 %甲醇溶液：量取 60 mL 甲醇(5.2.2)，加 40 mL 水，混匀。
5.4 标准溶液配制
5.4.1 含氰基拟除虫菊酯类农药标准储备液(1000 μg/mL)：准确称取 10 mg(精确至 0.1 mg)各农药标准物质，用乙醇(5.2.1)溶解并定容至 10 mL，混匀，4 ℃避光保存，有效期 12 个月。
5.4.2 6 种含氰基拟除虫菊酯农药单标中间液(100 μg/mL)：分别吸取农药标准储备液各 1 mL 于 6个 10 mL 容量瓶中，用乙醇(5.2.1)定容至刻度，混匀，配制成 6 种单标中间液，4 ℃避光保存，有效期 6 个月。
注：标准物质名称、CAS号、分子式和相对分子量，参见附录A中表A.1。
5.5 材料
5.5.1 乙二胺-N-丙基硅烷化硅胶(PSA)：粉末，40 μm ~ 60 μm。
5.5.2 石墨化炭黑(GCB)：粉末，40 μm ~ 120 μm。
5.5.3 C18 固相萃取柱：200 mg ，6 mL。
6 仪器和设备
6.1 分光光度计，配 1 cm 比色皿。
6.2 恒温水浴锅。
6.3 涡旋混合器。
6.4 离心机：转速≥4000r/min。
6.5 氮吹仪。
6.6 超声波发生器。
6.7 微波炉：功率约 700 W。
6.8 天平：感量分别为 0.01 g 和 0.1 mg。
6.9 移液器：200 μL，1 mL，5 mL。
7 分析步骤
7.1 试样制备
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芹菜、菠菜、小白菜、小油菜采集约200 g具有代表性的样品，去除根后用组织捣碎机粉碎备用。韭菜采集不少于200 g具有代表性的样品，于微波炉中处理2 min(700 w ，80 %功率)，用组织捣碎机粉碎备用。
7.2 试样的提取
称取试样10 g(精确至0.01 g)于50 mL塑料离心管中，加入10 mL乙腈(5.2.3)、4 g无水硫酸镁(5.2.7)和1 g氯化钠(5.2.8)，剧烈振荡1 min ，5000 r/min离心5 min。吸取4 mL上清液至15 mL塑料离心管中(装有600 mg无水硫酸镁、100 mg PSA 、30 mg GCB)，涡旋混匀2min ，5000 r/min离心5 min，取上清液备用。
注：对于颜色较深的溶液，可适当增加GCB的量至100mg ，使溶液为浅黄色或无色。
7.3 试样的净化
依次用2 mL甲醇、2 mL水活化固相萃取柱(5.5.3)。吸取2 mL上清液于10 mL比色管中，加入2 mL水混匀后移入柱中，待溶液滴完，加入2 mL 60 %甲醇溶液(5.3.4)，弃去全部流出液。加入2 mL甲醇(5.2.2)，收集该洗脱液于10 mL比色管中，在45 ℃水浴下氮气吹干。
7.4 测定
于上述10 mL比色管中加入2 mL纯水，超声混匀。依次加入30 μL氢氧化钠溶液(5.3.1)、2 mL对硝基苯甲醛溶液(5.3.2)和400 μL氯化三苯基四氮唑溶液(5.3.3)，涡旋混匀后于45 ℃恒温水浴锅中放置10min 。取出立即用1cm比色皿，以纯水调节零点，于波长480nm 处测定吸光度。
7.5 质控试验
7.5.1 样品空白试验
称取空白试样，按照7.2至7.4步骤与样品同法操作。
7.5.2 加标质控试验
称取样品空白试样10 g(精确至0.01 g)于50 mL塑料离心管中，加入50 μL农药标准中间液(100 µg/mL)(5.4.2)，按照7.2至7.4步骤与试样同法操作。
注：每次测定应同时进行样品空白试验和加标质控试验。
8 结果判定要求
根据测得待测液吸光度判读样品中拟除虫菊酯类农药的含量。待测液吸光度<0.220则为阴性样品;待测液吸光度≥0.220则为阳性样品。
质控试验要求：空白试验测定结果应为阴性，质控试验测定结果应为阳性。
9 结论
当检测结果为阳性时，应采用其他分析方法进行确证，进一步确定农药品种和含量。
10 性能指标
10.1 检测限
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氟氯氰菊酯、氯氟氰菊酯、氯氰菊酯、溴氰菊酯、氰戊菊酯均为 0.5 mg/kg，甲氰菊酯为 0.4 mg/kg。
10.2 灵敏度
应≥95 %。
10.3 特异性
应≥85 %。
10.4 假阴性率
应≤5 %。
10.5 假阳性率
应≤15 %。
10.6 交叉反应率
氟胺氰菊酯和氟氰戊菊酯为35%，其他均<0.1 %。
注：性能指标计算方法见附录B中表B.1。
第二法 检测卡法
11 原理
试样中的含氰基拟除虫菊酯类农药经提取后，在碱性条件下释放氰根离子，氰根离子与对硝基苯甲醛反应生成氰醇中间体，再与氯化三苯基四氮唑反应生成红色产物。检测卡颜色的深浅与样品中含氰基拟除虫菊酯类农药的含量成正相关，测定试样与空白颜色的差值，对试样中含氰基拟除虫菊酯类农药进行快速测定。
12 试剂与材料
12.1 一般要求
除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的三级水。
12.2 试剂
12.2.1 氢氧化钠溶液(85 g/L)：称取 8.5 g 氢氧化钠(5.2.4)，用水溶解并定容至 100 mL，混匀。
12.2.2 氯化三苯基四氮唑溶液(135 g/L)：称取 13.5 g 氯化三苯基四氮唑(5.2.6)，用水溶解并定容至 100 mL，混匀。
12.2.3 10%乙醇溶液：量取 10 mL 乙醇(5.2.1)，加 90 mL 水，混匀。
其他同 5.2。
12.3 标准溶液的配制
同5.4。
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12.4 材料
12.4.1 含氰基拟除虫菊酯类农药检测卡：4 ℃避光保存。
12.4.2 吸水滤纸：规格 20 mm×20 mm，厚度 2 mm。
其他同5.5。
13 仪器与设备
13.1 便携式农残检测仪：可测定样品点与空白的颜色差值。
13.2 涡旋混合器。
13.3 离心机：转速≥4000r/min。
13.4 氮气浓缩装置。
13.5 超声波发生器。
13.6 微波炉：功率约 700 W。
13.7 天平：感量分别为 0.01 g 和 0.1 mg。
13.8 移液器：200 μL，1 mL，5 mL。
14 分析步骤
14.1 试样制备
同7.1。
14.2 试样的提取
同7.2。
14.3 试样的净化
同7.3。
14.4 测定步骤
于上述10 ml比色管中加入100 μL乙醇(5.2.1)超声溶解，加入900 μL水混匀。依次加入10 μL氢氧化钠溶液(12.2.1) 300 μL氯化三苯基四氮唑溶液(12.2.2)，混匀作为待测液。另取一2 mL塑料离心管依次加入1 mL 10%乙醇溶液(12.2.3)、10 μL氢氧化钠溶液(12.2.1)、300 μL氯化三苯基四氮唑溶液(12.2.2)，混匀作为参比液。分别吸取50 μL参比液和待测液同时滴加到检测卡的参比点和检测点上，待溶液被吸收后放置5 min，立即用便携式农残测定仪测定样品检测点与参比点的颜色差值。
14.5 质控试验
14.5.1 空白试验
称取样品空白试样，按照14.2至14.4步骤与样品同法操作。
14.5.2 加标质控试验
称取样品空白试样10 g(精确至0.01 g)于50 mL塑料离心管中，加入50 μL农药标准工作液(100 µg/mL)(5.4.2)，按照14.2至14.4步骤与试样同法操作。
注：每次测定应同时进行样品空白试验和加标质控试验。
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15 结果判定要求
根据测得样品检测点与参比点的颜色差值判读样品中拟除虫菊酯类农药的含量。颜色差值<80则为阴性样品;颜色差值≥80则为阳性样品。
质控试验要求：空白试验测定结果应为阴性，质控试验测定结果应为阳性。
16 结论
当检测结果为阳性时，应采用其他分析方法进行确证，进一步确定农药品种和含量。
17 性能指标
17.1 检测限
氟氯氰菊酯、氯氟氰菊酯、氯氰菊酯、溴氰菊酯、氰戊菊酯均为 0.5 mg/kg，甲氰菊酯为 0.4 mg/kg。
17.2 灵敏度
应≥95 %。
17.3 特异性
应≥85 %。
17.4 假阴性率
应≤5 %。
17.5 假阳性率
应≤15 %。
17.6 交叉反应率
氟胺氰菊酯和氟氰戊菊酯为35%，其他均<0.1 %。
注：性能指标计算方法见附录B中表B.1。
18 其他
本方法所述试剂、检测卡信息及操作步骤是为给方法使用者提供方便，在使用本方法时不做限定。方法使用者在使用替代试剂、检测卡或操作步骤前，须对其进行考察，应满足本方法规定的各项性能指标。
本方法参比标准为NY/T761。
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附 录 A
(资料性)
标准物质信息
6种含氰基拟除虫菊酯类农药标准物质信息见表A.1。
表A.1 6种含氰基拟除虫菊酯类农药标准物质信息
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附 录 B
(规范性)
方法性能指标计算表
方法各个性能指标计算方法见表B.1。
表 B.1 方法性能指标计算表
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