T/HBSF 017-2024 苦木组培苗生产技术规程

ICS 65.020.20
CCS B 61
林业团体标准
T/HBSF 017—2024
苦木组培苗生产技术规程
Code of practice for production of tissue culture seedlings of Picrasma quassioides (D. Don) Benn.
2024 - 12 - 27发布2025 - 01 - 01实施
湖北省林学会 发布

目次
前言 ................................................................................. II
1 范围 ............................................................................... 1
2 规范性引用文件 ..................................................................... 1
3 术语和定义 ......................................................................... 1
4 外植体采集与处理 ................................................................... 1 母树选择 ....................................................................... 1
采集时间与部位 ................................................................. 1
外植体贮藏与运输 ............................................................... 1
5 培养前准备 ......................................................................... 1 培养基的配制与灭菌 ............................................................. 1
培养基保存 ..................................................................... 2
6 组织培养 ........................................................................... 2 外植体的预处理 ................................................................. 2
初代培养 ....................................................................... 2
增殖培养 ....................................................................... 2
生根培养 ....................................................................... 2
7 炼苗 ............................................................................... 2
8 移栽 ............................................................................... 2 移栽基质准备 ................................................................... 2
组培苗移栽 ..................................................................... 2
苗期管理 ....................................................................... 3
9 苗木出圃 ........................................................................... 3 苗木分级 ....................................................................... 3
苗木标识 ....................................................................... 3
10 苗木包装、运输与检疫 .............................................................. 3 包装及运输 .................................................................... 3
检疫 .......................................................................... 3
11 档案管理 .......................................................................... 3
附录A（资料性） 苦木组织培养培养基配方表 ............................................. 4
附录B（资料性） 苦木主要有害生物及其防治方法 ......................................... 5
附录C（资料性） 苗木质量分级指标 ..................................................... 6
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II
前言
本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由湖北省林业标准化技术委员会提出、归口并宣贯。
本文件起草单位：华中农业大学、襄阳市林业科学研究所。
本文件主要起草人：杜克兵、胡睿、刘同、廖妮燕、冷英、柴应芳、李兵、刘友彩、曾建军、芦贤博。
本文件实施应用中存在的疑问或修改意见，可咨询或反馈至湖北省林学会，联系电话：027-87698180，邮箱：hbsf2023@126.com。
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苦木组培苗生产技术规程
1 范围
本文件规定了苦木（Picrasma quassioides (D. Don) Benn.）组培苗生产技术的外植体采集与处理、培养前准备、组织培养、炼苗、移栽、苗木出圃、苗木包装、运输与检疫、档案管理等要求。
本文件适用于苦木组培苗培育及生产。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6001 育苗技术规程
GB/T 23473 林业植物及其产品调运检疫规程
LY/T 1882 林木组织培养育苗技术规程
LY/T 2289 林木种苗生产经营档案
LY/T 2290 林木种苗标签
3 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
苦木 Picrasma quassioides (D. Don) Benn.
苦木科（Simaroubaceae）苦木属（Picrasma）的落叶乔木，花期4月～5月，果期6月～9月，分布于南亚北部及东亚，在我国主要产于黄河流域及以南地区。其枝叶是一种传统中药，主要活性成分包括生物碱、苦木素、三萜类等化合物，具有抗炎、抗癌、解热、抗病毒和降血压等作用。
4 外植体采集与处理 母树选择
选择生长健壮、无病虫害、10 a～20 a生的优树。 采集时间与部位
4月～9月，连续2 d以上的晴天时，采集树冠外围中上部当年生长5 cm以上的粗壮嫩枝；或者10月～翌年3月，采集树冠外围中上部的当年生或一年生粗壮枝条于温室内水培，取新萌发的长3 cm以上嫩枝。 外植体贮藏与运输
外植体即采即用。若不能及时使用，可用湿布包裹保湿，4 ℃贮藏不宜超过5 d。若长距离运输，需冷藏保湿。
5 培养前准备 培养基的配制与灭菌
根据各类培养基的配方（见附录A），用70%～80%的最终体积的蒸馏水加热溶解，依次加入大量元素、微量元素、铁盐、有机物、钼酸钠、植物生长调节剂母液等，完全溶解后定容，用1mol/L NaOH溶
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液调节至pH5.8～6.0。分装、封口、标记后，采用高温高压（121 ℃，0.105 MPa）灭菌20 min。 培养基保存
参照LY/T 1882的有关规定执行。
6 组织培养 外植体的预处理
剪除叶片和叶柄，将枝条剪成长约3 cm的带芽茎段，用低浓度洗衣粉液浸泡2 min～5 min，并用软毛刷轻轻刷洗外植体表面，随后流水冲洗2 h，转入超净工作台。 初代培养
6.2.1 外植体消毒
超净工作台消毒结束后，将预处理后的带芽茎段先用75%酒精消毒30 s，无菌水冲洗2次，每次30 s；再用0.1% HgCl2消毒9 min～10 min（野外采集的茎段）或6 min～7 min（室内水培萌发的茎段），无菌水冲洗4次，每次30 s；无菌滤纸吸干茎段表面的水分。
6.2.2 外植体接种
将消毒后的带芽茎段下部切除约0.3 cm，垂直插入腋芽诱导培养基中，每瓶接种1个～2个外植体，注明培养基种类、接种时间等信息。
6.2.3 培养条件
接种后，将植物材料置于（25±2）℃的组培室内培养，光照强度1500 Lux～2000 Lux，光照时间16 h/d。接种15 d后统计外植体的污染率和褐化率，20 d左右腋芽开始萌发，30 d后统计腋芽萌发率。 增殖培养
萌发的腋芽长到2 cm以上时切取幼芽，接种于增殖培养基中，每瓶接种1个～2个芽，接种35 d后统计增殖系数。每隔35 d～40 d，将丛生芽进行分割，置于增殖培养基中培养，扩大无菌苗数量。培养条件与6.2.3相同。 生根培养
将高2 cm以上、带3片～5片叶的无菌苗沿茎基部切下，接种于生根培养基中，每瓶接种1株～2株，培养30 d～40 d后获得生根组培苗，并统计生根率。培养条件与6.2.3相同。
7 炼苗
选取苗高≥5 cm、长3 cm以上的不定根≥3条的完整植株，移至光照5000 Lux～8000 Lux，温度25 ℃～28 ℃的环境中炼苗5 d～7 d；随后松开瓶盖1 d～2 d。
8 移栽 移栽基质准备
将营养土：珍珠岩按体积比7：3均匀混合。移栽前1 d～2 d，用75%代森锰锌或70%甲基托布津的500倍～800倍溶液浇透基质消毒。 组培苗移栽
取出组培苗，用清水洗去根部的培养基，置于带有少量水的托盘中待移栽。移栽时，先往直径6 cm～8 cm、高10 cm～15 cm的容器装填一半基质，再放入组培苗，保持根系舒展，添加基质至苗高的1/3～
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1/2处；随后轻压基质，浇透定根水，并覆盖透明塑料膜或塑料杯保湿。培养条件与7.2相同。 苗期管理
8.3.1 遮阳
待幼苗成活、长出新叶后，去除塑料膜或塑料杯，统计移栽成活率。苗高达30 cm左右时，移至苗圃中继续培养。5月～10月，需搭建遮阳网，遮阳率60%～70%，网高2 m左右。
8.3.2 水肥管理
适时浇水，保持基质湿润，不积水。幼苗长出新叶后，每隔7 d～10 d喷施0.2%磷酸二氢钾溶液，连续喷3次～5次。
8.3.3 有害生物防治
以生物防治为主，坚持“预防为主，综合防治”的原则。主要有害生物种类及其防治方法见附录B。
9 苗木出圃 苗木分级
苗木质量分级参见附录C。 苗木标识
按照LY/T 2290的规定执行。
10 苗木包装、运输与检疫 包装及运输
对于容器苗，可用纸箱等码放整齐。
其他包装及运输参照GB/T 6001的规定执行。 检疫
按照GB/T 23473的规定执行。
11 档案管理
按照LY/T 2289的规定执行。
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A
A
附录A （资料性） 苦木组织培养培养基配方表
成分类别
成分
腋芽诱导培养基
（mg/L）
增殖培养基
（mg/L）
生根培养基
（mg/L）
大量元素
NH4NO3
1416
1416
1416
MgSO4·7H2O
740
740
740
KH2PO4
265
265
265
K2SO4
1559
1559
1559
有机
肌醇
100
100
100
烟酸（VB3）
1
1
1
盐酸吡哆醇（VB6）
0.5
0.5
0.5
硫胺素（VB1）
2
2
2
甘氨酸
2
2
2
铁盐
Na2·EDTA·2H2O
45.4
45.4
45.4
FeSO4·7H2O
33.8
33.8
33.8
钙盐
CaCl2·2H2O
149
149
149
Ca(NO3) ·4H2O
1968
1968
1968
微量
Zn(NO3)2·6H2O
17
17
17
NiSO4·6H2O
0.005
0.005
0.005
CuSO4·5H2O
0.25
0.25
0.25
MnSO4·H2O
33.5
33.5
33.5
H3BO3
4.8
4.8
4.8
钼酸钠
Na2MoO4·2H2O
0.39
0.39
0.39
碳源
蔗糖
25
25
25
凝固剂
琼脂
8
6
8
植物生长调节剂
6-BA
1
3
0
NAA
0.1
0.1
1
IBA
0
0
1
pH
5.8～6.0
5.8～6.0
5.8～6.0
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B
B
附录B （资料性） 苦木主要有害生物及其防治方法
病虫害名称
危害症状
防治方法
斑点病
叶片上出现直径2 mm～5 mm的褐色斑点，随着病情发展，斑点可能会扩大并融合，导致叶片枯萎、变形，甚至整株死亡。
预防为主：在病害发生前，定期喷施预防性药剂，如1%波尔多液、50%多菌灵800倍液等，以防止病害的发生。
物理防治：及时清除病株、病叶和病枝，并集中烧毁。
药剂防治：采用咪鲜胺、苯醚甲环唑等化学药剂，按照说明书推荐的剂量和用法进行喷施。
蚜虫
吸取苦木汁液，导致植株生长缓慢、矮小、叶片卷曲，同时叶片会出现黄化、枯萎等症状，严重时会导致整株枯死。蚜虫分泌的蜜露会覆盖在叶片表面，容易引发煤污病。
生物防治：在田间释放蚜虫天敌进行防治，如瓢虫、草蛉、食蚜蝇等。
物理防治：将黄色粘板放置在植物上方，可以吸引并捕捉蚜虫。
马兜铃凤蝶幼虫
7月～9月咬食叶片和茎，导致叶片和茎破损、残缺不全。受害叶片呈浅黄色斑点，逐渐变为褐色，最后干枯死亡。
人工捕杀：对于数量不多的幼虫，可以手动捕捉并杀死。
药剂防治：用90%的敌百虫500～800倍液喷洒。
物理防治：使用围网或物理屏障，阻止成虫产卵，减少幼虫的数量。
生物防治：利用赤眼蜂、寄生蜂等天敌进行防治，它们可以寄生在幼虫体内，控制其数量。
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C
C
附录C （资料性） 苗木质量分级指标
苗木
种类
苗龄
分级
苗高
（cm）
地径
（cm）
综合控制指标
容器苗
1-1
Ⅰ级苗
≥40
≥0.3
苗干通直，根系成团，充分木质化，无损伤，无林业有害生物。
1-1
Ⅱ级苗
30～40
0.2～0.3